流行性感冒病毒核酸检测试剂注册审查指导原则（2023年修订版）.docx

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1、流行性感冒病毒核酸检测试剂注册审查指导原则（2023年修订版）本指导原则旨在指导注册申请人对流行性感冒病毒（以下简称流感病毒）核酸检测试剂注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。本指导原则是对流感病毒核酸检测试剂的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供注册申请人和技术审评人员使用的指导性文件，但不包括审评审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和

2、验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定，随着法规和标准的不断完善以及科学技术的不断发展，相关内容也将适时进行调整。一、适用范围本指导原则适用于采用逆转录实时荧光PCR法，对人口咽拭子、鼻咽拭子、鼻拭子等呼吸道分泌物样本中的流感病毒核酸进行体外定性检测的试剂。对于采用其他方法学或其他样本类型的流感病毒核酸检测试剂，可能部分要求不完全适用或本文所述内容不够全面，申请人可参照本指导原则，根据产品特性对适用部分进行评价，并补充其他的评价资料。流感病毒属于正粘病毒科，是单股、负链、分节段的RNA病毒。根据核蛋白和基质蛋白不同可分为

3、甲、乙、丙、丁（或A、B、C、D）四型。甲型流感病毒根据病毒表面的血凝素（hemagglutinin,HA）及神经氨酸酶（neuraminidase,NA）的蛋白结构和基因特异性，可分为多种亚型。目前发现的HA和NA分别有18个（HI-18）和11个（NI-Il）亚型。乙型流感病毒分为Victoria系和Yamagata系。目前引起流感季节性流行的病毒是甲型流感病毒中的HIN1、H3N2亚型及乙型流感病毒中的ViCtOria和Yamagata系。流感病毒核酸检测试剂可用于流感的实验室诊断，甲型流感病毒各亚型的核酸检测试剂还可用于区分季节性流感病毒和新型甲型流感病毒。本指导原则适用于流感病毒核酸

4、检测试剂注册申请和变更注册申请的情形。本指导原则仅针对流感病毒核酸检测试剂注册申报资料中的部分内容进行撰写，其他未尽事宜应当符合关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告等相关法规要求。二、注册审查要点（一）监管信息1 .产品名称及分类编码产品名称应符合体外诊断试剂注册与备案管理办法及相关法规的要求，如甲型/乙型流感病毒核酸检测试剂盒（荧光PCR法）。根据体外诊断试剂分类规则，该产品按照第三类体外诊断试剂管理，分类编码为6840。2 .其他信息还包括产品列表、关联文件、申报前与监管机构的联系情况和沟通记录以及符合性声明等文件。（二）综述资料综述资料主要包括概述、产品描述、预期

5、用途、申报产品上市历史及其他需说明的内容。应详细说明产品所采用的技术原理及检测流程。提供不同适用机型的检测通量，即一次检测最多可检测的样本数。提供核酸提取（手工和自动提取方式应分别明确）和PCR扩增的时间，以及检测全过程所需的时间。不同检测流程，分别提供最少和最多检测样本量下的检测时间。与已上市同类产品进行比较，比较内容包括样本类型，检测原理，检测靶基因，组成成分，内标，质控品，判读规则，分析性能和临床性能等。预期用途中明确产品检测的靶基因，需选择保守性和特异性的基因，同时还应考虑基因的扩增效率。检测靶基因的选择应提供相关指南或文献，并分析所检测基因的灵敏度和特异性是否符合临床需求。（三）非临

6、床资料1 .产品技术要求及检验报告注册申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下，根据产品研制、前期评价等结果，依据国家标准、行业标准及有关文献资料，结合产品特性按照医疗器械产品技术要求编写指导原则的要求编写。该类产品作为第三类体外诊断试剂，应当以附录形式明确主要原材料以及生产工艺要求。甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂已有国家参考品，技术要求中应体现国家参考品的相关要求，并使用国家参考品对三批产品进行检验。如果有适用的国家标准、行业标准，产品技术要求的相关要求应不低于相应的要求。2 .分析性能研究注册申请人应采用在符合质量管理体系的环境下生产的试剂盒进行所有分析性能研究，提交具体研究方法、试验

7、方案、试验数据、统计分析等详细资料。如申报产品适用不同的机型，需要提交在不同机型上进行性能评估的研究资料。如申报产品包含不同的包装规格，需要对各包装规格间的差异进行分析或验证。对于适用的不同样本类型应分别进行分析性能研究。分析性能评估所用样本的基本信息均需明确，例如样本来源、样本类型、采集和处理方式、稀释方式、定值过程及数据等。研究中采用的流行性感冒病毒阳性样本，应采用科学合理的方法确定其阴阳性和浓度水平，并提交具体的试验资料。分析性能评估用样本一般应为真实样本或病毒培养物，如涉及稀释后检测，应采用与适用样本类型一致的阴性基质。不可采用质粒或假病毒进行分析性能评估。对于各项性能中采用的样本,在

8、下述各项性能研究资料中分别提供样本信息列表。2.1 样本稳定性考虑到病毒RNA极易被降解的特性，应对样本稳定性进行研究，包括采集后未经处理的样本，加入不同裂解液/消化液的样本，灭活处理后的样本，研究内容包括冷藏保存时间，冷冻保存时间，冻融次数等。如产品适用拭子、痰液等不同的样本类型，因其中干扰物质存在较大差异，可能对病毒RNA降解的影响不同，建议对每种样本类型均进行稳定性研究。如核酸提取液可不立即进行检测，还需对核酸提取液的保存条件和稳定性进行研究。2.2 适用的样本类型列明产品适用的样本类型。2.3 准确度采用申报试剂与临床诊断或已上市产品，同时检测临床样本，比较检测结果之间的一致性程度，进

9、行申报试剂的准确度评价。样本应选择符合样本稳定性的预期人群样本。研究应纳入一定数量的阴性和阳性样本，并注意包含一定数量的阳性判断值附近的样本和干扰样本。24企业参考品验证根据主要原材料研究资料中的企业参考品设置情况，采用三批产品对企业参考品进行检验并提供详细的试验数据。2.5 精密度应对精密度指标，如标准差或变异系数等的评价标准做出合理要求。应考虑运行、时间、操作者、仪器、试剂批次和地点等影响精密度的条件，设计合理的精密度试验方案进行评价。精密度评价试验应包含核酸提取步骤。设定合理的精密度评价周期，例如：为期至少20天的检测，具体方案可参考性能评价相关文件进行。应采用临床样本或病毒培养物进行精

10、密度评价，应至少包含3个水平：阴性样本、检出限水平样本、中/强阳性样本，并根据产品特性设定适当的精密度要求，例如：阴性样本：不含待测物或待测物浓度为零时，阴性符合率应为100%(n20)o检出限水平样本：检出限水平样本阳性检出率应N95%(n20)o中/强阳性样本：待测物浓度呈中度到强阳性，阳性符合率为100%且Ct值的CVW5%(n20)o2.6 检出限2.6.1 检出限的确定将不同来源的至少3份流感病毒样本分别梯度稀释于与适用样本一致的基质中，进行检出限的确定。每个浓度梯度重复检测不少于20次，将具有95%阳性检出率的浓度水平作为检出限。申请人可采用半数组织感染量测定法(TCID50)进行

11、浓度确认，以TCID50/m1.作为毒株浓度的表示方式；也可采用空斑形成单位(PFU)进行浓度确认，以PFUZm1.作为毒株浓度的表示方式。除此之外，申请人还应采用数字PCR,标准曲线等方法进行毒株核酸浓度的确认，以copies/m1.或国际单位作为毒株核酸浓度的表示方式。在进行检出限建立时申请人应对申报产品声称可检测流感病毒的类型及其亚型分别进行研究，甲型流感病毒应至少包括HlN1.H3N2亚型，乙型流感病毒应包括ViCtOria系和Yamagata系。2.6.2 检出限的验证另外选择具有时间和区域特征性的至少3个临床样本或病毒培养物在检出限浓度水平进行验证，应达到95%阳性检出率。检出限验

12、证的样本型别应覆盖甲型流感病毒HIN1、H3N2、H5N1和H7N9亚型，乙型流感Yamagata系和ViCtoria系以及近3年内我国出现的新的流行亚型，具体可参考中国国家流感中心发布的流感监测报告。应提供详细的病毒滴度/浓度的确定方法，同时应详细描述病毒样本的确认方法及验证结果。2.7 包容性2.7.1 采用生物信息学方法对产品检测的包容性进行研究，研究应覆盖已公布的申报试剂声称检测范围内的流感病毒核酸序列。2.7.2 验证样本型别应覆盖甲型流感病毒HlNUH3N2、H5N1和H7N9亚型，乙型流感病毒Yamagata系和ViCtoria系以及近3年内出现的新的流行亚型。每种亚型应使用具有

13、时间和区域特征性的不同来源的多例阳性样本(临床样本或病毒培养物)进行研究，应包括检出限和重复性的验证。注意包容性研究样本和检出限研究样本不能重复。申请人应提供用于包容性验证的病毒株的来源、型别确认、滴度或浓度确定等信息。2.8 分析特异性2.8.1 交叉反应用于流感病毒核酸检测试剂交叉反应验证的病原体种类主要考虑以下几方面：核酸序列具有同源性、易引起相同或相似的临床症状、采样部位正常寄生或易并发的其他微生物。建议在病毒和细菌感染的医学相关水平进行交叉反应的验证。通常，细菌感染的水平为1()6cfu/m1.或更高，病毒为IO,pfu/m1.或更高。首先，应在流感病毒不同类型和亚型间进行交叉反应验

14、证；其次，采用其他的病原微生物进行验证（见表1）。申请人应提供所有用于交叉反应验证的病毒和细菌的来源、种属/型别和浓度确认等试验资料。有关交叉反应验证的信息应在产品说明书的【产品性能指标】项中有所体现。表1推荐用于交叉反应性研究的微生物博卡病毒鼻病毒巨细胞病毒呼吸道合胞病毒B型副流感病毒（1、2、3型）EB病毒单纯疱疹病毒1型水痘带状疱疹病毒流行性腮腺炎病毒肠道病毒麻疹病毒人偏肺病毒腺病毒（1、3、7型）人冠状病毒新型冠状病毒2019-nCoVSARS冠状病毒（可使用假病毒）MERS冠状病毒（可使用假病毒）轮状病毒诺如病毒肺炎衣原体肺炎支原体肺炎链球菌肺炎克雷伯菌化脓性链球菌军团菌肺抱子菌流感

15、嗜血杆菌百日咳杆菌金黄色葡萄球菌结核分枝杆菌奈瑟氏菌属白色念珠菌光滑念珠菌烟曲霉新生隐球菌唾液链球菌卡他莫拉菌乳酸杆菌属棒状杆菌属2.8.2 微生物干扰申请人应充分考虑临床上容易与流感病毒合并感染的病原体以及流感病毒的不同类型或亚型，在高浓度的情况下对低浓度（例如检出限浓度）被测类型或亚型流感病毒核酸检测的影响。2.8.3 竞争性干扰申请人应充分考虑临床上常见存在的流感病毒不同类型或亚型混合感染情况，评价高浓度分析物对低浓度分析物检测的影响。建议申请人结合申报试剂的反应模式，使用一种类型或亚型最低检测限浓度的流感病毒和另一种类型或亚型高浓度流感病毒评估竞争性干扰，竞争性感染的流感病毒型别组合建议为同一反应体系内常见不同类型或亚型混合感染的流感病毒。竞争性干扰试验可与最低检测限、重复性或其他干扰试验同时进行。2.8.4 干扰物质应根据所采集样本类型，针对可能存在的内源/外源物质干扰情况进行验证。建议申请人在每种干扰物质的潜在最大浓度（“最差条件”）条件下进行试验，检测包含检出限水平和阴性水平在内的常见亚型流感病毒样本。对结果进行合理的统计分析，对比添加干扰物质前后的口值差异。检测的潜在干扰物包括样本中的原有物质及在样本采集和处理期间引入的物质。表2推荐用于干扰研究的物质物质活性成分粘蛋白纯化粘蛋