人颗粒酶AGzmsAELISA试剂盒.docx
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1、本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人颗粒酶A(GZmS-A)的含量。有效期:6个月保存条件:2-8Co实验原理试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(E1.ISA)。往预先包被人颗粒酶A(Gzms-A)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人颗粒酶A(Gzms-A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。样本处理及要求1 .血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4C
2、。过夜,然后100OXg离心20分钟,取上清即可,或将上清置于-20C。或-80C。保存,但应避免反复冻融。2 .血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8Co1000g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20C。或-80C。保存,但应避免反复冻融。3 .组织匀浆:用预冷的PBS(0.01M,pH=74)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如Ig的组织样品对应9m1.的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂
3、)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于500OXg离心510分钟,取上清检测。4 .细胞培养物上清或其它生物标本:请100OXg离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20C。或-80C。保存,但应避免反复冻融。注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。需要而未提供的试剂和器材1.酶标仪(45Onm)2.高精度加样器及枪头:0.5-10度、2-20u1.s20-200u1.200-1000u1.337C恒温箱4.蒸福水或去离子水试剂盒组成名称96孑lB48孑阍置备注微孔酶标板8孔12条8孔6条无标
4、准品0.3m1.*6管0.3m1.*6管无样本稀释液6m1.3m1.无检测抗体-HRPIOm1.5m1.无20洗涤缓冲液25m1.15m1.按说明书进行稀释底物A6m1.3m1.无底物B6m1.3m1.无终止液6m1.3m1.无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无空白稀释板1块1块选配橡胶手套2副2副选配备注:1 .标准品浓度依次为:10、5、2,5、1.25、0.625、0.3125ng/m1.2 .经过大量正常标本检验,标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内,实验过程中直接取501.样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时,可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实
5、验。注意事项1.严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25Coo使用后立即冷藏保存试剂。3 .洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。4 .消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。5 .底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。6 .避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。7 .在储存和温育时避免强光直接照射。8 .平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。9 .任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。1
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