PCR反应体系.docx

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在ISOI的Eppendorf管中依次加入:ddH2010PCRbufferIomMdNTPmixTaqPrimer1Primer2基因组DNA以上先配好混合.12.25l2Iul0.25llIW2Ul（1050gul.他如高于此浓度须要林择）分装在分别加入基因组蛭因组DNA（2l假如浓度太大稀择10-100倍）Total（20）充分混匀后，于PCR仪中进行扩增反应。PCR的扩增参数为：95C预变性Smin.94C变性45s,62C退火45s,72C延长Imin30s,30个循环后，721:延长7mln,构犷增后的目的片段在电泳谖冲液、1%琼脂助凝胶、和90V电压条件下电泳30min.以检测其大小、纯度和亮度。注：当模板DNA的GC含质为55%或更低的线性DNA时我们举荐常规PCR的变形条件是94-95变形45s当DNA的GC含最超过55%时须要更高的变形温度，退火温度低于60有许多非特异犷增，测序的时候条带会很乱。我如退火温度太高引物不能与模板做好地红性.复件温度通常在比理论计算的引物和模板的溶解温度低3-5度的条件下进行.最好通过时显性温度比两条燃核甘酸引物的溶解温度按低210度范用内进行系列PCR预试验来对红性条件诳行优化，对Taq酷来说呆道延长海度为72-78C。