人单核细胞增多性李斯特菌素listeriolysinELISA试剂盒.docx

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1、人单核细胞增多性李斯特茵索(IiSteriOIySin)EuSA试剂盒试卷原理：底eri。IySin试剂盒是固相夹心法能联免疫吸附实验(EUSA).已知底M。IySin浓度的标准品、未知浓度的祥品加入微孔酶标板内进行检测。先将Iisteriolysm和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后.加入亲和素标记过的HRP；再经过温宫和洗涤.去除未结合的酹结合物.然后加入底物A、B,和酹结合物同时作用.产生颜色”颜色的深浅和样品中IiStenOlySin的活性浓度呈比例关系，试剂盒内容及其配制试剂盒成份(2-8C。保存)96孔配詈48孔配置配制96/48份防标板1块板(96T)半块板(48T)即用型塑科腰板

2、差1块半块即用型标准SI：400ngml1瓶(0.6ml)1瓶(03m)按说明书进行稀稀空白对照1瓶(1.OmI)1瓶(0.5ml)即用型标准品稀释废冲液1瓶(5ml)1瓶(2.5ml)即用型生物素标记的Iisteriolysin抗体1瓶(6ml)1题(3.0ml)即用型亲和链酶妾-HRP1瓶(IOmI)1瓶(5.0ml)即用型洗涤冲液1瓶(20ml)1瓶(IOmI)按说明书进行稀释底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物BIS(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型自备材料1.蒸储水，2,加样器：53、IOuk50k100u1.200

3、、500加100Ou1.3振荡器及磁力搅拌器等。安全性1.避免直接接触终止液和废物A、Bo一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗，2实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。人单核纸胞增多性李斯特菌素。EerioIysmEUSA试荆盒操作注意事项1试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温.稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存.2实验中不用的板条应立即放回包装袋中.密封保存.以免变质。3 .不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4 .使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5使用干净的塑料容器配置洗涤液。

4、使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品，6 .洗漆酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。7 .底物A应挥发,避免长时间打开盖子，底物B对光敏感避免长时间暴露于光下。避免用手接触.有毒，实验完成后应立即读取OD值。8加入试剂的顺序应一致.以保证所有反应板孔温育的时间一样。9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。人单核细胞增多性李斯特茵素。isteriolysin）EUSA试剂盆样品收集、处理及保存方法1、血清-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管：收集血液后.1000g离心10分钟将血清和红细胞迅速，拉必地分离，2、血浆EDTAs柠檬酸盆、肝

5、素血浆可用于检测：100OXg离心30分钟去赊颗粒,3、细胞上清液-1000*g离心10分钟去除歉粒和聚合物.4、保存如果样品不立即使用.应将其分成小部分-7Ob保存.避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血.，如果血清中大量颗粒,桧测前先离心或过就。不要在37C或更高的温度加热解冻,应在空温下解冻并确保祥SI均匀地充分解冻。试剂的准备1,标准品：标准品的系列稀科应在实验时准备，不能储存。稀祥前将标准品振荡混匀。稀程比例按下表中迸行：400gml200gml1OOngZmI任号标准品）（5号标准品）（4号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul,100Ul的原倍标准品加入100Ul的标准品

6、稀释液100uI的5号标准品加入100Ul的标准品稀驿液50ngml（3号标准品）100Ul的4号标准品加入100Ul的标准品稀释液25ngml（2号标准品）100Ul的3号标准品加入100Ul的标准品稀释液12.5ngml（1号标准品）100uI的2号标准品加入100uI的标准品稀释液OngZmI（空白对照）原始浓度不用稀稗直接加入503。2洗涤线冲液（50）的稀释蒸循水50倍稀释人单核细胞增多性李斯特菌素。isteriolysin）EUSA试剂盒操作步骤1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫.以免加样时加入大的气泡，产生加样上的误差。2根据待测样品数员加上标准品的数员决定

7、所需的板条数：每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，便使用复孔的尽量做复孔。3加入稀释好后的标准品503于反应孔、加入待测样品50于反应孔内；立即加入50u的生物素标记的抗体-盖上腴板,轻轻振荡混匀，37b温育1小时。4甩去孔内液体.每孔加满洗涤液.振荡30秒.甩去洗漆液.用吸水纸拍干。重复此操作3次：如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5 .每孔加入80Ul的亲和链酹素-HRP,轻轻振薄混匀,37C温宫30分钟“6 Ja去孔内液体.每孔加满洗涤液,振荡30秒.JU去洗涤液.用吸水纸拍干。更复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7 .每孔加入底物A、B各503,

8、轻轻振荡混匀，37C温育10分钟。避免光照。8取出酣标板，迅速加入50Ul终止液.加入终止液后应立即测定结果；9在450nm波长处测定各孔的ODfS.,性能1.灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品,稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0990.2 .依异性：不与人其它细胞因子反应。3 .重复性：板内、板间变异系数均小于10o4局限性：6号标准品以上的结果为非线性的.根据此标准曲线无法得到精确的结果.结果判断与分析1、仪器值：于波长45Onm的的标仪上读取各孔的OD他2、以吸光度OD值为纵坐标(Y)1相应的IEenOlyn标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线.样品的Iisteriotysin含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。3、检测值范围:0-400ngml4、眩感度：1.OngZmI