RNA mimic细胞转染(Entranster)步骤.docx

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下面以EntrHnster-R4000试剂为例，说*下RNAmimic转染步鼻(24孔板)1 .提前1天细胞种植贴壁细胞：提前一天将如版种植在24孔板中，以转柒时如胞汇合度(COnnUenCe)在30%左右为宜，转架前全培育压总量为0.45ml。悬浮细胞：采纳对数生长期的细胞，毁量为常规培育细胞数的1/3进行转案试脍。如某细胞常规培育的细胞数是6X()5,那么就用2X1()5的蛔胞进行转柒。2 .特染过程(1)取0.67ug(50pmol)的RNAmimic,加入肯定量无血才稀锌液,充分混匀,制成RNA稀锋;衣，终体积为25l0瑞能:无血济佛禅液建议采妁()PTI-MEM、无血清DMEM或J640.(2Jfr0Entrans(CRM-R4OOO,然后加入24ul无血清格择液体，充分混句，制成EnlranSIerT“R4000稀释液，终体积为25W室温好冕5分钟.将EngnSICnZ-R4000稀释液和RNA杼作液充分混合(可用振荡器振荡或用加杯55吹吸10次以上)混合，室温静克15分钟。转染复合物制备完成。将50W特染5.合物流加到有0.45ml全培有寒(可含10%血清和抗生去)的细胞上，前后移动培育皿，混合力称。秘名：计本送JH,东的含血流的全培才金有助于提升转奏效率。转染后6小时视察细胞状态，如状态艮好可不必更换培百基，接着培育24-96小时得到结果。