人类嗜T淋巴细胞Ⅰ型病毒(HTLV-Ⅰ)ELISA试剂盒操作步骤.docx

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1、本试剂仅供研究使用目的本试剂盒用于检测人血清.血浆及相关液体样本中类嗜T淋巴细胞I型病毒(HT1.V-I)水平.感染人的血液学诊断。人类嗜T淋巴细胞I型病毒(HTIV-IEUSA试剂盒实蛤原理：本试剂盒采用双抗体夹心胸联免疫法(EUSA)测定标本中人类嗜T淋巴细胞I型病毒(HT1.VI),用纯化的类塔T淋巴细胞I型病卷(HT1.V-I)抗体包被微孔板,制成固相抗体.可与样品中类嗜T淋巴细胞I型病由(HT1.V-I)相结合,经洗涤除去未结合的类唔T淋巴细胞I型病毒(HT1.V-I)抗体和其他成分后再与HRP标记的02-GP抗体结合.形成抗体-抗原-陶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。T

2、MB在HRP酹的傕化下转化成蓝色.并在酸的作用下转化成ZUi终的黄色。用酷标仪在45Onm波长下测定吸光度(OD值,与CUTOFF伯相比较，从而判定标本中人类塔T淋巴细胞I型病由(HT1.V-I)的存在与否。试剂盒组成：试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板腴2片(48)2片(96密封袋1个1个施标包被板1481962-8CO保存阴性对照OSmI瓶0.5ml瓶2-8C）保存阳性对照0.5mll瓶O5mll瓶2-8C。保存酶标试剂3ml*l瓶6mll瓶2-8C。保存样品秫释液3mll瓶6ml瓶2-8C。保存显色剂A液3mM瓶6mll瓶2-8C。保存显色剂B液3mll瓶6mll瓶2-

3、8C。保存终止液3mg瓶6ml瓶2-8C。保存浓缩洗涤液(2OmIX20倍)Xl瓶(20m30倍)l瓶2-8b保存样本处理及要求：1 .血清：室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分).仔细收集上洁,保存过程中如出现沉淀.应再次寓心。2 .血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂.混合10-20分钟后，离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。3 .尿液：用无函管收集.离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清.保存过程中如有沉淀形成.应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。4

4、.细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集.离心20分钟左右(2000-3000转/分)，仔细收集上清”检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-74)稀释细胞悬液.细胞浓度达到100万/ml左右，通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。溪心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5 .组织标本：切割标本后,称取出量“加入一定的PBS.PH74.用液氮迅速冷冻保存备用.标本融化后仍然保持2-8C。的温度一加入一定量的PBS(PH74),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清，分装后一

5、份待检测，其余冷冻备用：6 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实脸.若不能马上进行试蛉,可将标本放于-20b保存,但应避免反复冻融7.不能检测含NaN3的样品.因NaN3抑制辣根过氧化物版的(HRP)活性。操作步躲：1 .编号：将样品对应微孔按序编号,善板应设阴性对照2孔、阳性对照2孔、空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酹标试剂.其余各步操作相同)2 .加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照.阳性对照501.然后在待测样品孔先加样品稀稀液40l.然后再加待测样品101.加样将样品加于陶标板孔底部,尽量不触及孔壁.轻轻品动混匀.3 .温育：用封板膜封板后置37C5温后

6、30分钟。4 .配液：将30(48T的20倍倍浓缩洗涤液加蒸储水至600ml后备用5 .洗涤：小心揭掉封板洪,弃去液体,用干,每孔加满洗涤液峥置30秒后弃去,如此承复5次.拍干。6 .加酯每孔加入酹标试剂50l.空白孔除外。7 .温育：操作同3。8,洗涤：操作同5。9 .显色：每孔先加入显色剂A50l.再加入显色剂B50l,轻轻震荡混匀.37C。避光显色15分钟10 .终止：每孔加终止液503,终止反应(此时蓝色立转黄色)。11 .测定：以空白空调零,45Onm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行.结果判定：试脸有效性：阳性对照孔平均值N1.O0;阴性对服平均

7、值0010临界侑(CUTOFF)计算：临界值=阴性对照孔平均侑+0.15阴性判定样品OD值临界值(CUTOFF)者为人类培T淋巴细胞I型病毒(HT1.V-I)阴性阳性判定：样品OD值M临界伯(CUTOFF)者为人类IST淋巴细胞I型病毒(HT1.V-I)阳性注意事项1-操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用.2试剂盒从冷藻环境中取出应在室温平衡1530分钟后方可使用.酹标包被板开封后如未用完.板条应装入密封袋中保存。3 .浓洗冻液可能会有结晶析出，稻杼时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果，4 .封板溪只限一次性使用，以避免交叉污染。5底物请避光保存。6试验结果判定必须以触标仪读数为准,使用双波长检测时,参考波长为63Onm7.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理，终止液为2M的硫酸，使用时必须注怠安全。保存条件及有效期1 .试剂盒保存:2-.2 .有效期：6个月