人麻疹病毒MVELISA试剂盒.docx

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1、人麻疹病毒(MV)EIJSA检测试剂盒检测原理试剂盒采用双抗原一步夹心法的联免袋吸附试验(E1.ISA),往预先包被麻疹病毒抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过配化物前的催化下转化成蓝色并在酸的作用下转化成最终的黄色用酹标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，与CUTOFF值相比较，从而判定标本中麻疹病毒(MV)的存在与否。样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管.操作过程中避免任何细胞剌激，收集血液后.3000转褰心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分需，2 .血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000

2、转离心30分钟取上清.3 .细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物.4 .组织匀浆将组织加入适量生理盐水描碎。3000转离心10分钟取上清”5 .保存：如果样本收集后不及时检测.请按一次用量分装.冻存于-20b.避免反复冻融.在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。自备物品焦标仪(450nm)高精度加样耕及枪头：0.5-IOu1.x2-20u1.20-200U1.200-100Ou1.37C恒温箱操作注意事项试剂盒保存在2-8C。，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这奥于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封(低温干燥

3、)保存.，预处理后的样本谙按熙操作步骐用样本稀释液适当稀释以达到试剂盒的的最佳检测效果，严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。所有液体组分使用前充分摇匀。试剂盒组成名称96孔配置48孔配置备注微孔陶标板12孔8条12孔4条无阴性对照0.5m1.0.5m1.无阳性对照0.5m1.0.5m1.无检测抗原-HRPIOm1.5m1.无20洗涤缓冲液25m1.15m1.按说明书进行稀释样本稀释液6m1.3m1.无底物A6m1.3m1.无底物B6m1.3m1.无终止液6ml3m1.无封板腴2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无试剂的准备20洗涤媛冲液的稀释：蒸饱水按1：20稀释.即1份

4、的20洗涤媛冲液加19份的蒸镭水。洗板方法手工洗板JU尽孔内液体.每孔加满洗涤液.静置Ifnin后用尽孔内液体,在吸水纸上拍干.如此洗板5次。自动洗板机：每孔注入洗液3501.浸泡Imn洗板5次，操作步嗥从室温平衡20min后的宏筠袋中取出所需板条,附余板条用自封袋密封放回4C设置阴、阳性对照孔和样本孔,阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各501.;待测样本孔先加待测样本10l,再加样本稀释液40l;随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗原1001.用封板膜封住反应孔37C。水浴锅或恒温箱温育60mio弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置Img,甩

5、去洗涤液，吸水纸上拍干，如此承复洗板5次(也可用洗板机洗板)。每孔加入底物A、B各50瓜.37C避光所育15min.每孔加入终止液501.15min内.在45Onm波长处测定各孔的OD值，结果判断1 .试吃有效性阳性对照孔OD(S平均值券1.oO；阴性对照孔OD值平均值W0.15。2 .临界值(Cutoff)计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.153 .阴性判断：样品OD伯V临界值(Cutoff)1样品为阴性4 .阳性判断样SIoD值临界侑(Cutoff),样品为阳性试剂盒性能准确性：阳性对照孔OD伯平均值N1.O0；阴性对照孔OD值平均值W0.15,说明试玲结果有效。牯异性不与其它可溶性结构类似物交叉反应。重复性：板内、板间变异系数均小于15*e贮核：2-8C。，避光防潮保存。有效期6个月免责声明试剂盒仅供研究使用.不得用于临床实蛤或人体实胎.否则所产生的一切后果.由实玲者承担，本公司概不负责-，严格按照说明书操作.实验者违反说明书操作.后果由实验者承担。