人肺炎支原体抗体MPAbELISA试剂盒.docx

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1、人脸炎支原体抗体（MP-Ab）EUSA试剂盒试吃原理MP-Ab试剂盒是固相央心法陶联免疫吸附实验（E1.lSA）.已知MP-Ab浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将MP-Ab和生物素标记的抗体同时温有，洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B.和酶结合物同时作用“产生颜色”颜色的深浅和样品中MP-Ab的活性浓度呈比例关系。试剂盒内容及其配制试剂盒成份（2-8C。保存）96孔配詈48孔配置配制96/48份防标板1块板（96T）半块板（48T）即用型塑科腰板差1块半块即用型标准SI：400ngml1瓶（0.6ml）1瓶（O3

2、m）按说明书进行稀稀空白对照1瓶（1.OmI）1瓶（0.5ml）即用型标准品稀释废冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型生物素标记的MP-Ab抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型亲和链酶妾-HRP1瓶（IOmI）1瓶（5.0ml）即用型洗涤冲液1瓶（20ml）1瓶（IOmI）按说明书进行稀释底物A1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型底物BIS(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型终止液1瓶(6.0ml)1瓶(3.0ml)即用型自备材料1.蒸储水，2,加样器：53、IOuk50k100u1.200、500加100Ou1.3振荡器及磁力搅拌器等。安全性1.避免直接接触终止液和废物A

3、、Bo一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗，2实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。3不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。人肺炎支原体抗体（MP-Ab）EiJSA试剂盒操作注意事项1试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温.稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存.2实验中不用的板条应立即放回包装袋中.密封保存.以免变质。3 .不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。4 .使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。5使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品，6 .洗漆酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应

4、孔中吸水。7 .底物A应挥发,避免长时间打开盖子，底物B对光敏感避免长时间暴露于光下。避免用手接触.有毒，实验完成后应立即读取OD值。8加入试剂的顺序应一致.以保证所有反应板孔温育的时间一样。9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。人脸炎支原体抗体（MP-Ab）EUSA试剂盒样品收集、处理及保存方法1、血清-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管：收集血液后.1000g离心10分钟将血清和红细胞迅速，拉必地分离，2、血浆EDTAs柠檬酸盆、肝素血浆可用于检测.100OXg离心30分钟去赊颗粒,3、细胞上清液-1000*g离心10分钟去除歉粒和聚合物.4、保存如果

5、样品不立即使用.应将其分成小部分-7Ob保存.避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血.，如果血清中大量颗粒,桧测前先离心或过就。不要在37C或更高的温度加热解冻,应在空温下解冻并确保祥SI均匀地充分解冻。试剂的准备1,标准品：标准品的系列稀科应在实验时准备，不能储存。稀祥前将标准品振法混匀。稀程比例按下表中迸行：400gml200gml1OOngZmI任号标准品）（5号标准品）（4号标准品）原倍浓度不用稀释直接加入50ul,100Ul的原倍标准品加入100Ul的标准品稀释液100uI的5号标准品加入100Ul的标准品稀驿液50ngml（3号标准品）100Ul的4号标准品加入100Ul的标

6、准品稀释液25ngml（2号标准品）100Ul的3号标准品加入100Ul的标准品稀释液12.5ngml（1号标准品）100uI的2号标准品加入100uI的标准品稀释液OngZmI（空白对照）原始浓度不用稀稗直接加入503。2洗涤线冲液（50）的稀释蒸循水50倍稀释人肺炎支原体抗体（MP-Ab）EUSA试题盒操作步骤1.使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫.以免加样时加入大的气泡，产生加样上的误差。2根据待测样品数员加上标准品的数员决定所需的板条数：每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，便使用复孔的尽量做复孔。3加入稀释好后的标准品503于反应孔、加入待测样品

7、50于反应孔内；立即加入50u的生物素标记的抗体-盖上腴板,轻轻振荡混匀，37b温育1小时。4甩去孔内液体.每孔加满洗涤液.振荡30秒.甩去洗漆液.用吸水纸拍干。重复此操作3次：如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。5 .每孔加入80Ul的亲和链酹素-HRP,轻轻振薄混匀,37C温宫30分钟“6 Ja去孔内液体.每孔加满洗涤液,振荡30秒.JU去洗涤液.用吸水纸拍干。更复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。7.每孔加入底物A、B各503,轻轻振荡混匀，37C温育10分钟。避免光照。8取出酣标板，迅速加入50Ul终止液.加入终止液后应立即测定结果；9在450nm波长处测定各孔的ODfS.,性能1.灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品,稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0990.2 .依异性：不与人其它细胞因子反应。3 .重复性：板内、板间变异系数均小于10o4局限性：6号标准品以上的结果为非线性的.根据此标准曲线无法得到精确的结果.结果判断与分析1、仪器值：于波长45Onm的的标仪上读取各孔的OD他2、以吸光度OD值为纵坐标(Y),相应的MP-Ab标准品浓度为横坐标(X),做得相应的曲线,样品的MP-Ab含量可根据耳OD值由标准曲线换算出相应的浓度.3、检测值范围:0-400ngml4、眩感度：1.OngZmI