人骨保护素OPG酶联免疫分析.docx

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1、人骨保护素（OPG）降联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。检冽范围，96T80pgm1.-2000pgm1.使用目的I本试剂盒用于测定人血清、Ih1.浆及相关液体样本中it保护素（opg）含量.实殴JK理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标木中人骨保护素（OPG）水平，用纯化的人骨保护索（OPG）抗体包被微孔板.制成同相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入成保护素（OPG）.再与HRP标记的胃保妒素OPG抗体结合，形成抗体-抗原-陋标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP的的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成培终的黄色。散色的深浅和样品中的闿保护素（OPG）呈正相关，

2、用前标仪在45Onm波长下测定吸光度（ODfft）,通过标准曲线计算样品中人骨保护泰（OPG）浓度.130倍浓缩洗涤液20m1.1.ffi7终止液6m1.X1.瓶2的标试剂6mX1.瓶8标准品(4000pgm1.)0.5m1.X1.IX3陆标包被板12孔X8条9标准品稀杯液1.5m1.XIfii4样品稀释液6m1.X1.瓶10说明书1份5显色剂A液6mX1.瓶11封板展2张6显色剂B液6m1.X1./精12密封袋1个标本襄求1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验，若不能Iy上进行试验.可将标本放于-2oc保存,但应避见反更冻眼2 .不能检测含NaNS的样品，因N

3、aN3抑制棘根过氧化物陇的（HRP）活性.掾作步1 .标准品的林锋：本试剂盒提供原倍标准晶一支，用户可按照卜列图表在小试管中进行林择.2000pgm1.5号标准品1501.的原倍标准品加入1501.标准品林轿液100OPg/m1.4号标准品1501.的5号标准品加入1503标准品桶径液500pgm1.3号标准品1501.的4号标准品加入1501.标准品稀样液250pgm1.2号标准品1501.的3号标准品加入150川标准品稀柞液125pm1.1号标准品IsOW的2号标准品加入150H标准品稀样液2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及解标试剂其余各步操作相同、标准孔、待测样品孔.在商标包

4、被板上标准品准确加样501.,特测样品孔中先加样M稀择液401.然后再加持测样品IOW（样品最终稀郛哎为5倍）。加样将样品加于解标板孔底部，尽呆不班及孔壁,轻轻见动混匀。3 .温育：用封板腰封板后置37C温存30分钟.4 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸濡水30倍稀糅后备用5 .洗涤；小心揭抻讨板腹，非去液体，甩干，好孔加滴洗涤液，静置30秒后弃去，如此一-5次,拍干.6 .Jj1.f1.:每孔加入梅标试剂50u空白孔除外。7 .温育：操作问3.8,洗涤：操作向5.9 .显色I每孔先加入显色剂A503,再加入显色剂B501.轻轻俄荡混匀，37C避光显色15分钟.10 .终止：每孔加终止液501.

5、终止反应（此时盔色立转黄色）.11 .测定：以空白空调零，45Onm波长依序测网各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。掾作程序总结，洗板5次，加入显色液A、B,37C显色10分钟IJ/加入终止液计算以标准物的浓度为横型标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲城，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度：再乘以稀择倍数：或用标准物的浓度与ODGi计算出标准曲线的直线W1.归方程式，将样品的OD值代入方程式，H中出样M浓度，可乘以稀择倍数，UP为样品的实际浓度，注意事1 .试剂盒从冷减环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用.陶标包被板开封后如未用完，板条应笠入密封袋中

6、保存.2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀林时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果，3,各步加样均应使用加样器,并经整校对其准确性,以避免试脸误差。一次加样时间最好控制在S分钟内如标本数量多,推荐使用持枪加样.4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔.如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的ODff1.）,请先用样品稀择液稀柞一定倍数（n倍）后再测定，计算时请球后乘以总桶锋倍数（XnX5）。5 .封板膜只限一次性使用.以避免交叉污染.6 .底物请避光保存.7 .严格按照说明书的操作进行，试裟结果判定必须以醵标仪读数为准.8 .所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传来物处F1.9 .本试剂不同批号组分不得混用.10 .如与英文说明书有异，以英文说明书为准.保存条件及有效期1 .试剂盒保存：；2-8o2 .有效期：6个月