《养殖用水中硝基呋喃类、氯霉素类、三苯甲烷类、喹诺酮类、磺胺类、四环素类和大环内酯类药物残留量的测定 高效液相色谱-串联质谱法》编制说明.docx

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1、中国出入境检验检疫协会团体标准养殖用水中硝基吠喃类、氯霉素类、三苯甲烷类、n奎诺酮类、磺胺类、四环素类和大环内酯类药物残留量的测定高效液相色谱串联质谱法编制说明（征求意见稿）标准起草组二。二四年二月养殖用水中硝基吠喃类、氯霉素类、三苯甲烷类、噗诺酮类、磺胺类、四环素类和大环内酯类药物残留量的测定高效液相色谱-串联质谱法编制说明一、标准起草的基本情况-）任务来源2022年9月1511,根据中国H1.入境检骁检疫协会淙合顺M服务标准化技术委员CIQVTCI2）立项审查结果,由中国检验认证集团广西有限公司牵头,自然资源部第四海洋研究所、北海海关踪合技术服务中心参与拴殖用水中硝基映喃类、就毒素类、三采

2、甲烷类、畦诺扇类、硕胺类、四环素类和大环内酯类药物残留地的测定高效液相色i普-串联版谱法3的项目制定工作，项目编号为P-CIQA-1（M-2O22.为保证标准制订的科学性、适用性,中国检验认证集团广西仃限公司和自然资源部第四海洋研究所、北海海关综合技术服务中心成立标准起草工作组，SM定工作方案、明确职诉分工、时间进度和有关工作要求，（二）主要起草单位,起草人及分工主要起侬单位：中国拾骁认证集团广西有限公司、自然资源部第四海洋研究所、北海海关综合技术限务中心.主要起草人：梁光纤、张丽、梁任佳、刘冬灵、黄芯谱、金其扬、陆媛苑、臾春燕、刘丹三）简要起草过程2022年9月，由中国检骆认证集团广西有限公

3、司奉头，自然资源部第四海洋研究所、北海海关综合技术服务中心参与养殖用水中硝基快哺类、氯毒素类、三苯甲烷类、豚诺胡类、磺胺类、四环素类和大环内酯类药物残留圻的测定高效液相色谱-串联版i司法的项目制定工作.2022年IO月,中国检脸认证集团广西有限公司和自然资源部第四海洋研究所、北海海关媒合技术服务中心成立标准起草工作组.开始制定实5金方案,经过前期大盘文献词连和在实5金室研究工作的基础上探索研究了检测方法条件，2022年11月-2023年9月,开始开展仪器条件研咒、的处理步界、线性范围、方法回收率、准确度、精密度等系列技术内容的确定研究.2023年K）月形成标准检测方法草案,2023年11月-1

4、2月.在完成实验室内方法学验证的基础I.组织了力然资源部第四海洋研究所北海海关综合技术服务中心、春岛海关技术中心对本标准诳行了实验空间验证，脸证结果表明方法的各项技术指标满足养班用水中硝基吠哺类、氯毒泰类、三茶甲烷类,味诺诩类、磺胺类、四环素类和大环内醋类药物残留量的测定的要求.2024年1月2月针对各媒分析实际操作时标准文本中存在的伺题及建议，对标准iS行了修改，得到标准起草小组的一致认可,形成该标准征求意见稿和标准编写报告.三、标准的手要内容本文件对标准方法的原理、检测项目、分析步骤、线性范围、试剂和材料.仪器分析条件的优化和选择、方法检出限及定房限、网也率、正确度和精密度等曲要内容进行了

5、班定和说明.K原理水样中的珀基肤喃类、孤霉素类、-：米甲烷类、哇诺制类、磺胺类、四环素类和大环内丽类药物经亲水亲脂平衡里固相萃取柱百接富集净化后,用高效液相色谱-小联质i普法泅定，三米甲烷类采用内标法定量,其他药物采用外标法定fit.2,检测项目本标准起草小组根据常见的监刈检刈兽药类别,参考GB31658.172021食品安全国家标准动物性食品中四环素类、磺胺类和哇诺酎类均物残留量的测定液相色谱一中联鲂谱法、GB31660.1-2019食品安全国家标准水产品中大环内图类药物残用量的测定液相色诺一串联明讲法等相关兽药戏用检测食品安全国家惊准，对硝基帙喃类、制?E素类、:聚甲烷类、喔诺胡类、磺胺类

6、、四环素类和大环内脂类药物等7类兽药的检测项目进行了预先设定，结台仪器检测条件多数研究中对混合标准物质进行测定，/点对流动相、色谱柱、洗脱梯度进行了选择优化.确认最终的目标伴药检测原口为硝基欣喃类（陕喃理阴、帙喃它渤）、氟毒素类（就专素、氟采尼考）、-:率甲烷类（孔卷石绿、陷性孔雀石球）、哇诺制类环丙沙星、二氯沙星、依诺沙星、恩诺沙星、就甲喙、洛美沙星、诺额沙用、找班沙星、培氟沙星、沙拉沙星、唠噬酸）、磺胺类（磺胺茉成、乙恢磺胺、磺胺氯哒嗪、横胺嗡啜、磺胺甲唠理、磺胺间二甲制喀哄、磷胺邻二甲氧噎咤、磷胺甲喀咤、磷胺二中啼碇、磺胺甲噪：唯、磷胺茶唯哇、确胺毗院、磺胺映映、磷胺二甲异唠性）、四环素

7、类（四环泰、金毒素、多西环泰）和大环内醋类（红霉素、克拉霉素、阿奇毒素、吉他戒素、交沙番素、售米考星、泰乐衡素）.3、试剂纯度和级别的选择除非另有规定,本方法所使用试剂均为优级纯.水为GB,，T66X2规定的强水.4、7类兽药的养殖用水前处理和仪器检测条件的优化4.K前处理条件本标准起草小组对根据既有参考文献及相关兽药检测的食品安全国家标准的研究，前处理关键在于样晶的浓缩富集，本标准采用加标回收的方式H接比较了HB1.、CI8、中性氧化铝柱等3种固相萃取小柱，以及甲醇、1.0.%甲酸乙肪、0.1%中酸酸乙隔，甲醇等3种洗脱液的洗脱能力.结果表明.三种的洗脱能力顺序为；0.1%甲酸乙师+甲解0.

8、1%甲酸乙睹甲解：采用C18固相萃取小柱，7类兽残的回收率获本V20%；采用中性氧化铝柱，仅有孔很石绿可富集洗脱；采用H1.B作固相萃取小柱时,7类普药基本能有效的富集洗脱旦大部分物质满足刚攵率在6(KT20%,故采用HB1.固相萃取小柱作进行浓缩富集，并以0.1%甲酸乙瞄+甲醉经行洗脱。并加终建立了以下分析步骤：水样经0.45m逑膜过滤后,移取50m1.水样,加入1001.混合内标工作溶液(5.45).超声2min.W全部液体过固相萃取柱(预先用6m1.甲醉，6m1.水活化)，特试样完全流出后用6m1.0.1%甲酸水淋洗.弃去水淋液，抽干,再依次用6m1.甲/、6m1.0.1%甲酸乙睛洗脱,

9、收集洗脱液于ISm1.玻璃试管中,45水浴姒气吹干，再用1.UOm1.().1%甲酸水+乙瞰95+5)溶液溶解残渣,经0.22IIm涉膜过活.待上机测定。42、测定条件的优化和选择液相色谱半联质谱分析条件，是养殖刖水中多种类型兽药实现统一分析检测的关键，综合考虑响应值、峰形、稳定性、准确度、仪器分析时间等因素，排除在同时测定过程中被干扰影项的物质,在对测定条件反亚试缝与优化的范础之上，本标准对养殖用水中硝夔映喃类、赳毒素类、三苯甲烷类、哇诺胴类、磷胺类、四环索类和大环内所类药物残留Ift的测定条件详细/规定，确立了可以进行统一分析检测的检测项目.给出T高效液M1.色i格率联质谱的参考条件.4.

10、2.1, 液相色谱工作条件本标准参考既往研究选用安捷伦的ECIiPSeXDBC18,Ec1.ipseP1.usC18100三2.1.11m.1.8um)作为色谱柱，选用0.1%甲酸水溶液与乙脑作为流动相，并采用梯度洗脱的方法，可以实现7类目标兽药物班的有效分两，并将仪器分析检测时间控制在15分钟，保用时间详见表3,建立的液相色谱工作条件如下：a)色谱柱：C18(10011m2.1rr11,1.8m)；b)柱温：35TCsc)进样量：10u1.：d)流速：0.5m1./min：e)流动相：R为0.1%甲酸水溶液，B为乙脑，梯度洗脱条件见表1.表1流动相洗脱条件时间nin01%甲IWC溶液%乙%O

11、9820.59822802()4703075959595I1.O10013、OHX)1592169824.2.2, 质谱工作条件本标准为实现7类兽药物质的统一分析，采用正离子、负高f同时扫描的方式.政溺分析条件主要为定性离子对、定量离子对、砂撞能量等分析参数的优化与建立。根据本实验室的仪器特性，利用仪器自带的优化软件,建立了7类兽药目标物质的质谱分析参数.建立的质谱工作条件如下：a）离子源：电喷雾凄子源：1）扫描方式：正离子、负离子扫描；C）检测方式：多反应检测：d）气体淑度：3（X）:e）雾化器压力：45psi:f）干燥气流玳：氨气IIUmin；g）帮流气温度：35（TC;h）鞘流气流量：觎

12、气I1.Umin：i）毛细管电压：350OV（IE离子）：40W）V（负离子:j）定性岗子刻、定用离子对、储绿佬城见去2。表2定性离子对定量虚子对、碰撞能量、扫描方式药物名茶卿仔m/z于育于m/eV扫播方式吠响它眼325.1281.216.325.1252J*20oMi(M226.113915226.1122,2032125?4-321152*12J1.uie考3563W4-35618514孔世行绿3293132,36329208.132+孔一石绿D5354318.1,38+盼色孔很石绿331315.228.3312392H出色孔落石缘D6337240.P30环西沙鸵332314.2,17荷名

13、爵毋离子nz于育于nzeV扫措方式332288.213+二版沙星400A56.11?.4(X)299.129依诺沙星321.4303319321.4233.922运坨沙鸵360342.2173603162,17飘甲次262.3244,216*262.3202.136洛契沙鸵351.933430351.9265-36诺Ja沙米320302.2,17320276.213+疑融沙星362.4318.217362.4261.125培Ja沙米3316.2173M290.213+沙拉沙星386342.2133%299.2,25嗯珠酸262.2244*12+262.221628硝胺羊Ift276.9156-!2276.9KW乙帙副核215156*8+215IC812+磷胺氯哒嗓2851S6-12285IW20旗放隘於251156-1225110820破按甲喀哇2S4156.19254108.121+磷脓何二甲依喳展311156*1631110828俄胺邻：甲辄段哎I311156-16311IW24硼胺甲嗜唯265156-15+26510828WK:甲旺近27918613279124.1*25*横枝甲曝二魄2711S6-1227110816碘胺落址哇31522220315IW24+WKtt2501S6*16254)KM24荷名爵毋鼻