《实验用水貂胚胎采集及移植技术规程（征求意见稿）》.docx

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1、ICS65.020.30B44DB地方标准DBXM/0752020实验用水貂胚胎采集及移植技术规程Experimenta1.minkembryoco1.1.ectionandtransferprocedure（征求意见稿）XXXX-XX-XX-XX-XX发布目次trH1范用12规范性引用文件13术谙和定义14器械清洗和消毒25冲胚液及胚胎保存液的配制26结扎公貂的准符27供体水貂的选择及配种38手术冲胚及收集39部胎质量签定410受体水和胚胎移植4附录A资料性附录）器械清洗和消毒5附录B（资料性附录）冲胚液及胚胎保存液配方及配制5附录C（资料性附录）实般用水貂的选择6附录1）（资料性附录）实验

2、器材、药品及试剂6附录E（资料性附录）实脸用水貂配种、胚胎收集及移植记录表711-K-刖三本文件按照（；B/TI.I-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起以规则3的规定起草.本文件出吉林省科学技术厅提出并归口。本文件起草单位：中国农业科学院特产研究所.木文件主要起草人：刁公飞、李晓麴、许保埴、赵伟刚、徐出、探海军、杨钱峰、张领、唐如.I1.实验用水貂胚胎采集及移植技术规程1葩国木文件规定了实骁用水貂胚胎采集及移植的术语和定义、器械清洗和消毒、所需溶液的配制方案、公貂结扎手术的技术及要求、实脸水貂的选择、水貂手术的技术及要求、胚胎采染的技术及要求、代孕母第的同期交配处理及胚胎移植

3、手术的技术及要求.本文件适用于水貂胚胎的果象及移栖.2规楚性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中，注日期的引用文件,仅该11期对应的版本适用于本文件,不注口期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单适用于本文件。GBi.1-2020标准化工作导则GB/T358232018实的动物动物实脸通FH要求3术语和定义下列术语和定义适用于本文件，3. 1供体水貂donormink在胚胎移植过程中提供胚胎的母水粗。3.2受体水貂recipientmink在胚胎移植过程中接受胚胎的代孕母水貂.3.3结扎公貂Vasectomizedma1.emink用于受体水貂副激排卵

4、的输精管结扎的公水貉。3.4冲胚液embryof1.ushingmediurn用于采集胚胎时,符胚胎从输卵管或子宫角中冲洗出体外并提供保护的化学试剂.3.5胚胎保存液Cmbryoprcscrvationmedium用于快时保存来集到的胚胎，提供材养、保护的化学试剂，3.6胚胎移植针embryotransferpipette用于吸IU胚胎并移植到受体水招体内的毛细玻璃管.4器械清洗和消毒参见附录A.5冲胚液及胚胎保存液的配制参见附录B.6结扎公貂的准备1.1 结扎公韶的选择要求参见!附录CJ.1.2 结扎公貂的输精管结扎手术6. 2.1手术器材药品及试剂参见附录D.7. 2.2术前准备水貂手术前

5、禁食12小时以上.8. 2.3麻醉与保定水解的麻醉与保定应符合GB/T35823的要求。全身麻醉后，将水貂腹部朝上，平放于手术台。9. 2.4术部消毒手术部位于率丸下部阴囊缝际处，麻醉后的水貂术都备皮，用5%碘酊和75%酒精消毒。10. 2.5手术方法6.2.5.1在睾丸下部阴囊缝际一儡，平行于缝际，一次性切开皮肤、内膜、总鞘膜，做一个2cm左右切口，将军丸及输精管暴祸。6.2.5.2用尖头钺子.符与阳照距国2c处的输精管与系膜小心分寓,用10号蚕统线将输精管结扎紧.完成后，用同样的方法将另侧输精管进行结扎.6. 2.6缝合与消击将输精管结扎好的瞿丸小心放回阴囊内，K1.后将总鞘膜、内股、皮肤

6、用可吸收外科缝合税缝合，用5%碘酊消毒,术后3天内每天注射2次青帘索、依霉素.术后恢复1个月后才可用于交配.7供体水貂的选择及配种6.1 供体水貂的选择参见附录C2,6.2 发情鉴定母貂发情表现精神兴奋，食欲M退，排尿变频并呈黄绿色,观察阴毛明显分开，倒向两边，可见阴旃膨胀、突出或微外翻成四海,早.白色或伪红色，阴门附着黄白色或白色粘液，视为发情中期，造干交配.6.3 配种将发情供体水貂与种公貂同笼配种，配种时间为早6点开始至9点结束，交配后及时将供体水招放回原笼内.每天1次,连续交配2天.8手术冲胚及收集8.1 冲胚器材药品及试剂参见附录D,8.2 饰卵管手术采集8.2.1术前准备供体水貂第

7、：次交配后第2天手术冲胚，术前禁食12小时以上。8.2.2麻薛与保定水貂的麻髀与保定应符合GB/T35823的要求.进行全身麻潸，将水貂腹部划上平放于手术台上.8.2.3术部消毒术部位于腹中线倒数第二乳头处.麻醉后术部备皮,用5%碘AJ和75冬酒精消毒.8.2.4输卵管手术采集在眼中线倒数第二孔头处整一个2cm左右切口，将两侧子宫用、输卵管、卵缎编乐，观察左右卵梁黄体发育情况并记录.在子宫角和输卵管结合部的子宫.角端用蚕统线进行结扎,将卵巢叮怆卵管用眼科剪进行剥离采集，将取下的输卵管放设在冲胚液中保存.8. 2.5缝合与消毒将结扎好的子宫复位则腹腔内,用可吸收外科健合线将腹段与肌肉层连续健合,

8、皮肤结结缝合用5%旗打消毒，术后3天内每天注射2次针标素、位毒素.8.3 冲胚将枭集到输卵管放在平皿里进行冲胚。注射器吸入5m1.冲水液，安装上冲胚针从输卵管余口处插入.用钺子格包襄冲胚针处的输卵管夹紧，防止液体倒液，将5m1.冲胚液缓慢的注入到怆卵管中，使胚胎随着冲胚液从输卵管另一端流出至平皿中。8.4 胚脑收集用。吸管连接胚胎收集针,在体式翻微憧下收集冲胚液中的胚胎.将收集到的胚胎放入胚胎保存液小滴中，井照装矿物油.9胚胎质量笺定9.1胚胎检查在无曲操作室内，将存放胚胎的平皿放在37C忸温板上，体视显微境尸检查、签定胚胎发育阶段并记录.随后放入38.5T、5%C6浓度的高湿度培养箱中保存出

9、至后续实验或胚胎格植.92胚胎质量分级92.1第二次配种后第2天，肥胎应为1细胞或者2细胞。9 .2.2胚胎可分为A、B、C、D四个等皴，A、B级为可用胚中,C,D级为不可用胚胎,- A级：胚胎发月阶段与胚龄一致，轮睨清晰、呈球形，弟周隙适中，若2细脆则分裂球大小均匀、结构紧凑。B级：胚胎发育阶段与胚龄基本一致,轮廓清晰.细胞球略收缩,卵周隙略大,若2细胞分裂球大小基本一致.- C级：胚胎发Rf阶段与胚龄不太-致，轮旎尚清斯，细胞球收缩较大，卵周隙大。- D级：胚胎发行阶段与班龄不一致，轮廓不清晰，细胞脱破裂，有细恂碎片。10受体水貂胚胎移植10 1移植器械、药品及试剂参见附录D.11 2受体

10、水貂的选择参见附录C2。12 .3同期排卵剌激将与供体水貂同期发情的受体水都与结扎公犯同笼交配剌激样卵,每天1次,连续2天。13 .4术前准备、麻醉、保定、消雷具体方法与8.2,1、8.2.2和&2.3相同，105胚胎移植10.5.1在腹中战例数第：乳头处做一个2cm左右切口，将一儡子宫角、输卵管、卵巢暴露。1052在输卵管的膨大部，用Im1.注肘器针头穿一个小孔，用口吸管连接胚胎移植针吸取1-5枚胚胎及5-1OHI胚胎保存液,将胚胎移植竹小心捅入怆弟管小孔中，缓慢的将全部胚胎及胚胎保存液注入输卵管中，避免注入大业气体，完成后将胚胎移植针缓慢拔出，105.3按照同样方法将1-5枚胚胎格植入另一

11、输卵管中.10. 5.4移植完成后,符幼卵管与子宫史位回腹腔,并用生理盐水简单冲洗.10.6缝合与消而具体方法与8.2.5相同.附录A（资料性附录）器械清洗和消毒A.1玻璃器皿的清洗和消毒新购置的玻璃皿或使用后的玻璃潜皿.都要用白来水先浸泡.洗涤时.先在加行洗谦剂的淑热溶液中进行刷试，如果遇到有污物或油垢不易清洗的，应先放入重珞酸钾洗液中浸泡数小时，然后再用水冲洗干净，最后用蒸储水冲洗两遍.宜至器皿光亮、无水滴附籽为止.将洗净的玻璃器皿放入电热干燥箱.加热至16（TC后恒温1小时.自然冷却后待用.胚胎移植用的玻璃E细管，需用蒸慵水通过超声波清洗1小时，放入铁制器皿并用锡纸包装好后，120C高压

12、灭曲1小时，随后放入电热干燥箱加热干燥1小时，自然冷却后待用.A.2手术器械的清洗和消毒手术器械使用后,用水冲去表面污物，然后在加有洗涤剂的温热溶液中用长毛刷刷洗,并用清水冲洗干净，再用蒸慵水逐个冲洗。将洗净的手术器械放入不锈钢手术器械怠中，120高压灭第1小时，的后放入电热干燥箱加热燥1小时.自然冷却后待用.手术前放在0.2%的新洁尔灭落液浸泡30分钟后用于手术。附录B（资料性附录）冲胚液及胚胎保存液配方及配制表B.1冲松液推荐配方成分含量：胎牛血清25m1.PBS援冲液475a1.液体配制完成后,用0.22m过游器过滤表R2国&保存液推荐配方成分含最胎牛血清25m1.KSoM培养液475三

13、1液体配制完成后，用0.22n过游器过滤附录C（资料性附录）实脸用水貂的选择C1结扎公貂的选择体况良好，生珀机能正常，年龄在12岁的公水貂.C.2供体、受体母貂的选择体况良好、生殖机能正常.年龄在13岁的母水郛.受体电水招的发情时间与供体水和同步.附录D（资料性附录）实验JS材、药品及试剂实殴.材材具体要求药品及试剂培养箱可调节温度至95%温度38.5P的二氧化碳培养箱麻酹药（盐酸赛拉嚎注射液）体视镜苏醒药盐酸茶喏理注射液）恒温板可加热至37C青霉素手术刀-流有索缝合针H1.针，1/2瓠生理盐水可吸收外科缝合线型号：4-0矿物油银子尖头绿子冲胚液创巾御灭的胚胎保存液创巾夹-蚕丝线型号：4号冲胚针平头，HC.8-1.2mn胚胎移植针针口外径不能大于1.511m.内径不能小于0.3三m口吸管-培养皿衢灭菌附录E（资料性附录）实验用水貂配种、胚胎收集及移植记录表表E.1供体水貂配种记录表供体号发情情况第一次配种第二次配种配种公貂号配种时间同种公貂号配种时间*E,2供体水冲SE记录供体号：冲胚时间:卵巢卵巢黄体数回收胚数1细胞胚胎数2细胞胚胎数胚胎发育等级等级枚数左ABCD右ABCD表E.3供体水初冲压汇总表供体号经产/育成冲胚时间黄体数胚胎数胚胎等级可用胚胎数需注表1.4受体水初后移植记录受体号发情情况结扎公和配种时间移植时间移植肚胎数胚胎等级侪注笫一次第：次左右