六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十二指肠炎的疗效及机制研究.docx

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1、六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十二指肠炎的疗效及机制探讨六君子汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十：指肠炎的疗效及机制探讨摘要目的：评估六君汤合左金丸治疗小鼠急性放射性十：指肠炎的疗效，与临床常规抑酸联合黏膜爱护制剂对比，探讨其产生疗效的机制。方法：依据文献探讨，参考放射性肠炎模型建模标准结合十：指肠特征，首创小鼠放射性卜二指肠损伤模型。将模型小鼠随机分为比照组（n=26、中药干侦组（n=16）、西药干预组（每只法莫替悬液O.5m1.+铝镁加混悬液0.3m1.灌胃，每日1次，n=16）0标准给药后通过小鼠一般状况、体重、健康评分变更、病理学、炎性因子表达等客观指标评价疗效。结果：选取12Gy胜利

2、建立小鼠放射性十二指肠炎模型。比照组小鼠出现体重卜降，厌食、少饮、稀便，偶有黏液血便，精神差，皮毛不光整、少动、弓背等表现。药物干预组小鼠一般状况较单纯照耀组好转。中、西药干预组脾、肠系膜淋巴结组织I1.-6,I1.-I,TNF-的表达与比照组相较有下降趋势，外周血中三者浓度变更亦有所体现，中药组在降低炎性因子方面优势显著。镜下视察可见中、西药干预组较单纯照耀组黏膜有所修复，改良Chiu氏法评分中西药组间差异有统计学意义(PO.05)o结论：六君子汤合左金丸治疗急性放射性十二指肠炎除能调整机体免疫、抑制急性损伤、促进局部组织修复外，还具有抗辐射肠道纤维化等不良反应潜力，其中调整炎性因子释放是疗

3、效产朝气制之一。关键词六君子汤：左金丸；急性放射性肠炎收稿日期2013-05-07基金项目首都卫生发展专项(2011-5041-04)通信作者*周平，博士，副教授，硕士生导师，Te1.：(010)68610099-6356,E-mai1.：ZhOUP作者简介陈晓，硕士，医师，E-mai1.：chcnxiao_dawn1985163.COm放射治疗是治疗肿痛的主要手段之一，据统计65%75%的患者在肿瘤治疗过程中接受放疗，组织损伤仍为制约其疗效的主要因素1-20国内外文献3-8可见肠黏膜对射线极度敏感，腹盆腔肿瘤放疗剂量大于40Gy常会引起不同程度腹冯、胃部不适等急性黏膜炎临床症状。近年来肝癌、

4、胃癌、胰腺癌等上腹肿病高发，其中胰腺癌恶性程度高、生存及生活质量差。蔡晶等971采纳伽马刀立体定向放射治疗胰腺癌总有效率(CR+PR)88.4%,IIN期1,2年总生存率分别为56.5%,23.1%,已超过外科手术效果，但十二指肠由于其特别解剖结构，与胃酸亲密接触，本就简洁损伤，加之活动度较小，距离照耀野较近，肝、胰等周边脏器肿痛放射治疗时局部受量难以避开，且其耐受剂量与胰腺癌根治剂量非常接近(45-65Gy6070Gy)。作者前期探讨及相关文献报道均表明胰腺癌在接受规范化-SBRT早期出现胃肠道反应高达70%,急性胃十二指肠黏膜糜烂及溃疡达7%,表现为腹痛、腹胀、呕血、便血。晚期反应为胃涉疡

5、、十二指肠溃疡和消化道梗阻，发生率分别为17%,9西医保守治疗主要运用抑酸、爱护黏膜制剂，方法简洁，多年来疗效无明显提高。且探讨多针对立肠、乙状结肠及空回肠放射性损伤，较少关注胃、十二指肠放射毒性的防治，查阅近10年文献，仅范丽华等12报道运用中药复方(麦冬、南沙参等)与西药(胃复安、氢氧化铝凝胶)形成比照，视察其治疗放射性胃炎疗效，见中药能明显削减补液量、暂停放疗例数。可见中药独特疗效在放射性损伤领域发挥了不行替代的作用。放射性十二指肠炎损伤重，愈合慢，生活质量差，严峻者危及生命，部分患者因难受、恐惊中断、放弃放疗，可见主动降低胃、十二指肠放射性损伤，将使患者按安排完成放疗，在提高肿痛局控率

6、的同时改善患者生活质量，具有小.常重要的临床意义。另有文献报道六君子汤在胃及十二指肠炎中有良好疗效，结合中医辨证及当前十二指肠放射性损伤探讨少见报道、理论探讨缺如的实际状况，六君子汤合左金丸治疗放射性十二指肠炎或许有效。本探讨模拟体部伽马刀治疗胰腺膈等肠周肿瘤急性放射性十二指肠损伤建立动物模型（60CO-ARE模型），六君子汤合左金丸对损伤进行干预，与抑酸、黏膜爱护剂传统方案比照，通过对应指标评估疗效，并探讨其可能机制。1材料和方法1.1动物及用药健康SPF级Ba1.b/c小鼠151只，68周龄，1820g,购自北京华阜康生物科技股份有限公司，试验动物合格证号S1.XK（京）2009-0007

7、,于解放军军事医学科学院SPF级试验动物中心饲养，试验室条件：温度（212）C,相对湿度60%,自由饮水，标准小鼠饲料喂养。六君子汤合左金丸加减方（鼠用：党参10g,炒白术10g,茯苓10g,陈皮12g,姜半夏6g,制甘草6g,黄连9g,吴茱萸3g,砂仁6g,木香6g,乌贼骨10g,蒲公英15g）：西药（法莫普丁胶囊、铝镁加混悬液），各药物均经空军总医院药房副主任医师生药鉴定并供应。1.2照耀条件军事医学科学院放射与辐射医学探讨所60Co照耀室照耀小鼠，腹部照耀防护套件及配套模具由军事医学科学院放射与辐射医学探讨所馈赠。照耀上界为胸骨剑突下，照耀下界为耻骨联合。照耀面积约2cm2cm,其余部位

8、均由模具完整屏蔽，60C。照耀源照耀距离4m,照耀剂量率在134.62137.31cGy?min-1.）4.5Gy照耀3min；6.OGy照耀4min5s：9Gy照耀6min16s；12Gy照耀8min27s：13.5Gy照耀9min38s；15Gy照耀10min44s；不同次照耀时间相差10s三1.3仪器及试剂实时定量PCR仪（Bio-Rad公司）；E1.ISA用酶标仪（MK3,Thermo公司）：centrifuge5417R低温离心机（德国Eppendorf公司）；C1000TMTherma1.cyc1.er反转录抚育机（Bio-Rad）oRea1.timePCR试剂盒购自TOYOBO公

9、司（无水乙醉/异内醉/三氯甲烷配套）：I1.-6,I1.-I,TNF-E1.ISA试剂盒购自eBioscience公司；I1.-6I1.-ITNF-抗体购自eBioscience公司（E1.ISA洗液自制）：病理标本固定、脱水、包埋、染色等所用试剂为空军总医院病理科供应。1.4造模及分组试验用SPF级Ba1.b/c小鼠适应性喂养3d,禁食12h,自制麻醉第合制剂（速眠新一氯胺酮2：1.5）腹腔注射麻醉后固定于特制模具，依据0，4.5,6.0,9,12,13.5,15Gy递增剂量分组，采纳体部伽马刀同源60Co射线摸索小鼠放射性肠炎建模剂量，胜利建立放射性十二指肠炎模型后，将模型小鼠随机分为比照

10、组（n=26、中药T预组5=16）、西药干预组(n=16)连续灌胃给药7d（照耀及照耀前4d,照耀后3d）,中药组给药方法：每只2m1.中药液灌胃（依据六君子汤合左金丸中药配方配伍颗粒剂型，以50m1.灭菌注射用水37C水浴制成匀浆），每口1次:西药组给药方法：法莫替丁胶囊20mg加入50m1.灭菌注射用水，每只0.5m1.灌胃，每日1次；铝镁加混悬液每只0.3m1.灌胃，每日1次,比照组采纳生理盐水每只0.8m1.灌胃。药物用量的换算参照医药试验动物模型制作与应用中人与小鼠口服用药量换算方法，本试验采纳的给药方法相当于同等体重条件下成人给药量的30倍%末次给药后12h处死小鼠并采集标本。1.

11、5检测指标视察小鼠一般状况，评估体市及健康评分变更口，13。病理学视察大体标本及镜下变更：取小鼠十二指肠组织，大体标本视察有无水肿、充血、溃疡、出血、狭窄等变更，福尔马林固定，生理盐水冲洗，包埋、切片、HE染色，镜下视察，改良Chui氏评分法评分。炎性因子检测：Rea1.-timePCR测量脾及肠系膜淋巴结组织匀浆I1.-6,I1.-I,TNF-炎性因子的表达，E1.ISA双抗夹心法测量外周血I1.-6,I1.-I,TNF-炎性因子含量。1.6统计学处理采纳SPSS13.O进行统计分析,计量资料以s表示，多组间比较采纳单因素方差分析，2组间比较采纳t检验，必要时采纳Mann-Whitney检验

12、，计数资料比较采纳卡方检验。P值为双侧，检验水准=O.05o2结果2.160Co-RE模型的建立各组小鼠受照耀后一般状态及生存状况：4.5,6.0.9Gy照耀组未见稀便，照耀后2C1.出现不同程度的精神差，食欲降低，饮水量下降，照耀约57d即可竟原正常，12,13.5,15Gy照耀组照耀后2d均有程度不一的稀便，偶有小鼠出现血便，至照耀后7d仍不能好转，其中13.5,15Gy照耀组出现小鼠死亡，13.5Gy组死亡率约25%,15Gy照耀组死亡率约40%。各组小鼠体重均有下降（图1）,4.5,6.OGy组在照耀后5d出现体重回升，余组持续下降，以12,15Gy组下降最为显著。各组健康评分随照耀后

13、时间延长均有下降，以12,13.5,15Gy照耀组最为明显，三者与9Gy组之间的差异有统计学意义（P0.05）,但彼此之间的差异无统计学意义。图1不同剂量60C射线小鼠腹腔照耀后体市及健康评分变更Fig.!Graphsshowpercentbodyweightandhea1.thscore1.ossatdifferenttimesafterirradiationin60Coabdomina1.1.y-radiatedmicegivendifferentdoses2.260Co射线小肠辐射损伤后脾、肠系膜淋巴结组织中I1.-6,I1.-I,TNF-的表达变更为了进一步证明I1.-6,I1.-I,

14、TNF-与放射性肠损伤的关系，检测不同剂量小鼠脾及淋巴结组织中I1.-6,I1.-I,TNF-的表达变更。结果表明不同剂量组小鼠脾、肠系膜淋巴结组织中I1.-6,I1.-I,TNF-与比照组相比均有表达上升，而且随着剂量的提升，这一趋势更为明显，值得留意的是13.5,15Gy剂量组上升趋势并不比12Gy剂量组明显，表明在放射性肠损伤中I1.-6,I1.T,TNF-表达上调，参加炎症反应，与既往探讨基本一样（图24）。.脾；B.肠系膜淋巴结：与12Gy组相比1）PO.05（图3,4同）。图2Rea1.-timePCR检测60Co-RE小鼠脾、肠系膜淋巴结中I1.-6mRNA的表达变更Fig.2T

15、hesp1.eenandmesenteric1ymphnodesin60CoREmicewereexaminedformRNexpressionofI1.-6byrea1.-timePCR图3Rea1.-timcPCR检测60Co-RE小鼠脾、肠系膜淋巴结中I1.-ImRNA的表达变更Fig.3Thesp1.eenandmesenteric1ymphnodesin60Co-REmicewereexaminedformRNAexpressionofI1.-Ibyrea1.-timePCR图4Rea1.-timePCR检测60Co-ARE小鼠脾、肠系膜淋巴结中TNF-mRNA的表达变更Fig.4Thesp1.eenandmesenteric1.ymphnodesin60Co-AREmicewereexaminedformRNAexpressionofTNF-byrea1.-timePCR2.360Co射线小肠辐射损伤后血清中I1.-6,I1.-I,TNF-的浓度变更由于13.5,15Gy组死亡率较高，分别为30%(3/12),46.2%(6/13),故仅通过E1.ISA测定其余各剂量组及比照组血清中I1.-6,I1.-I,TNF-浓度。不同剂量放射性肠损伤诱导机体分泌I1.-6上升，组间产生差异，I1.-I,TNF-结果与之相像，在此未全赐予图示。其中