抗生素治疗大鼠急性胰腺炎后肠道真菌的变化与易位的关系_0.docx

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1、抗生素治疗大鼠急性胰腺炎后肠道真菌的改变与易位的关系抗生素治疗大鼠急性胰腺炎后肠道真菌的改变与易位的关系石承先，陈喜石承先，陈喜贵州省人民医院肝胆胰外科贵州省贵阳市550002通讯作者：石承先,550002,贵州省贵阳市中山东路，贵州省人民医院肝胆胰外科E-mai1.：Chengxian1.yahoo.ComThere1.ationshipbetweenthemu1.tip1.icationandtrans1.ocationofintestina1.fungusafterantibiotictreatmentintheratswithacutepancreatitisSHIChenxianCh

2、enxiChengxianShi,Departmentofhepato-bi1iarypancreaticsurgery,GuizhouProvincia1.Hospita1.,Guiyang550002,P.R.ChinaCorrespondenceto:ChengxianShi,DepartmentofhepatobiIiarypancreaticsurgery,GuizhouProvincia1.Hospita1.,GUiyang550002,P.R.China.Chengxian1.Qyahoo.ComABSTRACTAIM：Toinvestigatethere1.ationshipb

3、etweenthechangeoftheintestina1.fungiandtrans1.ocationafterantibiotictreatmentintheratwithacutepancreatitisMETHODS：TheratswithacutepancreatitiswereinducedbyinjectinCaeru1.eintotheirabdomina1.cavity.Theserats(group2)weretreatedbytheantibioticandseparate1.ydividedtothefivesubgroupsof3,6,9,12,and15daysa

4、ccordingtotheobservingtime,howevercontro1.group(group1)on1.ywerenorma1.anima1.Theirco1.onsmucosa,mesentery,1.ungsandpancreaswerecu1.turedforfungiandp1.asma1-3)-gIucanweremeasuredin3d,6d,9d,12dand15d.RESU1.TS：Thenumberoftheintestina1.fungiandthep1.asma1-3-Dg1.ucaningroup2weresignificant1.ymoreincreas

5、ethaninthegroupIandin3daysofgroup2afterthesixthday(p0.05).Thenafterninthdaythepositionoffungiinmesentery,1.ungsandpancreaseweresignificant1.ymoreincrease(p0.05)thanin3and6daysingroup2.Themu1.tipicationofintestina1.funguswasposi1.ivere1.ationwithintestina1.funga1.trans1.ocation(r=0.8972)andp1.asma1-3

6、-D-g1.ucan(r=0.7970).CONC1.USION:themu1.tip1.icationofintestina1.fungusandp1.asma1-3-D-g1.ucanintheratswithacutepancreatitisweresignificant1.ymoreincreaseafter6daysofantibiotictreatmentandwerepositivere1.ationwithintestina1.funga1.trans1.ocation.Itweresuggestedthatprophy1.acticanti-fungiwasinreasona

7、fter6th9thdofusedbroadspectrumantibioticandmeasuredp1.asma1-3D-g1.ucanwashe1pfu1.forthediagnosisofthefunga1.infectin.Keyword:acutepancreatitis;antibiotic;fungitrans1.ocation;1-3D-g1.ucan;rat摘要目的：观察急性胰腺炎大鼠使用抗生素治疗后，肠粘膜真菌和血浆1-3-D锚聚轴的变化与真菌易位的关系。方法：采用雨蛙素（Caeru1.ein）腹腔注射法复制大鼠急性水肿性胰腺炎（AP）模型。对成功复制AP模型的大鼠（组2

8、）使用头抱哌附舒巴坦治疗，分别治疗3d,6d,9d,12d及15d,按观察时间随机分为5个亚组，每亚组动物6只。对照组（组1）为正常大鼠。观察期间正常喂食。分别于相同时间点处死2组动物并取相应的肠组织、肠系膜、肺和胰腺组织进行真菌培养，测定血浆1-3-D前聚糖含量。结果：与组1相比，组2大鼠在抗生素治疗3口后，肠道真菌数量开始增加，于第6口后肠道真菌和血浆1-3-D葡聚糖的含量增加明显（PV0.05）,第9日后肠外组织真菌检出率明显增加（p0.05）O血浆1-3-D弱聚轴含量随着肠道真菌数量和真菌易位的增加而增力口，以及后两者之间，均呈正相关关系（r分别为0.7970、0.7132和0.897

9、2）0结论：急性胰腺炎大鼠使用抗生素治疗6d后肠道真菌和血浆1-3-D葡聚糖明显增加，并与真菌易位和血浆1-3-D葡聚糖水平呈正相关，提示急性胰腺炎使用抗生素后在69d预防使用抗真菌药物是合理的；检测血浆1-3-T）葡聚处有助于早期诊断真菌感染。关键词：急性胰腺炎：抗生素：真菌易位：1-3-7偏聚糖：大鼠0引言急性胰腺炎（AP）尤其是重症急性胰腺炎（SAP）,并发症多，病死率高，其中中后期病死率的80舟由感染引起，真菌感染乂是感染的主要原因之一，占全部SAP感染患者的4070%,病死率高达2053.1%1,2。导致SAP患者中后期真菌感染的因素是多方面的，除了肠粘膜屏障功能障碍、导管引起感染等

10、外，多数学者认为重要的原因与广谱抗生素的长时间使用有关3,4,在真菌感染的防治方面，大多数学者主张在临床明确真菌感染的依据后才开始抗真菌治疗，但疗效不甚满意，病死率仍然很高3,4,5：有少数学者报道临床预防性使用抗真菌药物，病死率可降低至15虹6,但在什么时候使用抗真菌药物最为适宜，各家报道不一。本实验通过对Ap模型大鼠使用头抱哌阳舒巴坦治疗.，观察肠道真菌增殖和血浆1-3-D葡聚轴的变化与肠真菌易位的关系，探讨在使用抗生素治疗AP时预防全身真菌感染的理论依据。1材料和方法1.1实验动物和分组：%star大鼠60只（重庆龙鑫实验动物中心），雌雄各半，体重20020g,随机分为2组：对照组（组1

11、）和治疗组（组2）,每组30只。每组根据观察时间3d,6d,9d,12d和15d又分为5个亚组，每个亚组6只。组1仅给予正常饲料（贵阳医学院动物中心）喂食；组2复制急性水肿性胰腺炎（AP）模型，然后使用抗生素治疗，并正常喂食。1 .2动物模型的夏制和处理：采用雨蛙素（广州伟伯化工有限公司进口雨蛙素试剂0.1MG）腹腔注射法旦制AP大鼠4,7：用生理盐水将雨蛙素浓度调为2g/m1.固定大鼠四肢于操作板上，备皮，碘伏消毒腹部皮肤，垂直进针，按照35gkg的标准，注射药物，每小时1次，连续7小时共7次，注射间隙给予大鼠正常喂食。按照上述方法成功熨制AP动物模型后，随机将模型动物分为5个亚组，经动物尾

12、静脉注入头抱哌酮舒巴坦（1：1,1g,清华紫光制药厂生产，批号200802133）34gkg,分两次间隔12小时注入，直至分别到3d,6d,9d,12d和15d处死动物为止。期间给予大鼠正常喂食。上述2组动物分别按照观察时间3d,6d,9d,12d和15d,采用乙醛麻醉后，抽取尾静脉血作标本；剖开腹壁，以回盲部为解剖标志，在回盲部远端15cm（大约为大鼠乙状结肠部位）切取肠组织长约ICm为标本，同时沿肠系膜剪下整个肠系膜组织、切取肺和胰腺组织等作为真菌培养的标本。整个操作过程严格根据无菌要求进行。1.3观察指标1.3.1大鼠一般情况：大鼠的精神状况，进食、活动情况等。1.32肠道真菌培养：将结

13、肠标本用生理盐水5m1.洗净肠内容物，将洗净的肠壁置于Iom1.生理盐水中，搅拌约5min（八）,取A中的盐水1m1.,稀释至IOm1.（B）,用接种环取1环B液约11,均匀涂抹于沙氏培养基及显色培养基（郑州博赛生物技术研究所）上，于37C温箱中培养48小时，计数真菌菌落个数，乘以稀释倍数得出此肠管真菌个数（个cm2）,对真菌个数取对数值后记录。1 .3.3肠系膜、肺和脯腺组织真菌培养：分别将肠系膜、肺和胰腺组织加入In1.1.生理盐水研磨至匀浆，将匀浆液加入肉汤培养基中，37C培养36小时，若肉汤培养基出现浑浊，再取出2m1.培养液，用10%K0H2m1.混合摇匀5min杀灭细菌后，取接种环

14、1环，接种于沙氏培养基及显色培养基上进行真菌培养。记录真菌培养阳性例数。1 .3.4检测血浆1-3-D前聚糖：采各组大鼠静脉血3m1.,缓慢放入无热原离心管中，用灭菌铝箔封闭管口以防污染，3000rpm离心60s,分离得血浆（简称PRP）,-30C保存。取上述PRP液0.1m1.,加入装有0.9m1的样品处理液中，混匀后70C保温1Omin,取出后立刻放入冰水浴中，即为待测血浆样品。采用MB-80微生物快速检测系统及1-3-D葡聚触试剂盒（北京金山生物技术公司）方法检测，在南京军区总医院中心实验室8进行。按试剂盒说明公式将吸光度值换算成1-3-D葡聚糖浓度。操作在生物安全柜中进行，遵守无菌原则

15、。统计学处理采用SPSS1.2.0统计软件分析处理。肠道真菌数和1-3-T）葡聚糖含量以均数加减标准差（XS）表示，组内和组间比较采用方差分析。肠外组织培养阳性例数比较采用x2检验。肠道真菌数量变化与血浆1-3-D前聚糖水平之间相关性采用Spearman秩相关分析，肠真菌移位与血浆1-3-D葡聚糖水平的相关性使用回归分析。P0.05表示差异有显著。2结果2.1动物一般情况的变化组1大鼠精神、进食正常。组2动物萎靡，进食和活动均减少。2.2肠道真菌的变化见表1,组1正常大鼠肠粘膜存在少量真菌，组2大鼠从使用抗生素第3日开始出现肠粘膜真菌增殖，第6日后真菌数量增加明显（PV0.05）,其中6至9天期间肠道粘膜真菌数量增加趋势较快。表12组动物肠道真菌的改变（XS）3d6d9d12d15d组14. 150.254.310.344.410.474.770.184.50. 416.990.06组24.560.05b9.890.07b9.980.02b10.030.04b注：与组1比较pV0.05；b与组2第3d比较p0.052.3肠道真菌易位的变化组2大鼠在使用抗生素6d后开始出现肠道真菌易位于肠系膜和胰腺组织，第9日后真菌易位明显（PV0.05）,第15口时组2在培养的18份标本中竟有16份为阳性。表2果15d组2455肺合计组2中肠系膜组织