白鲜内生菌的分离及检测药用成分白鲜碱、黄柏酮和梣酮实习报告.docx

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1、实习报告书写格式1 .时面要求各实践环节报告封面统一出教务处设计制作，请到各学院教务员处领取“2 .内容要求1）实习报告、毕业调行报告、科研实践报告和专业涂合实验报告内容应包括实习项目、指导教师、In的与要求、实习内容、实习H记、实习报告和总结等方面：2）课程设计、课程论文和课卷设计内容由指导教师根据自身课程特点琉定：3）具体内容格式可参照附表,要求字迹工整.填写认真填写时括号中的说明内容应删除，3 .评阅要求备实践环节报告均应有教师评语，批阅教师签名，批阅日期，教研室主任意见，红笆批阅。4 .格式与装订各实践环节报告内容均用A4纸填写，内容手写打印均可，左他装订.如打印：一级标题字体界体，字

2、号四号：二级以卜标卷和内容字体宋体,字号小四号：单倍行距.愕惕漆4大早实习报告（20_-20_学年第_学期）课程名称：学生姓名：专业班级：学院：学号：学生成绩：实习（设计）项目指导教师参与指导敬如实习类型毕业实习口教学实习口课程实习口生产实习口其他口目的与要求，实习内容，（实习期间各阶段基本内容实习日记日期实习内容3.7-3.12召开毕业实习动员大会期同召开/毕业实习动属大会会上8员?X宏丹老怫对我们讲解r现阶段辰该注意的1多情,为了我们能嘘顺利毕业.为了我们的大学生耕画上完美的句号,Jif老师版我们介MT许多毕业前夕应谖注意的问题，例如与用人单位线约合同时.要认IX阅读协议，提高口己的警惕心

3、,防止自己的权利故侵守，还介绍了许多与用人一位签的的率例,让我打做好准答,除了富老师以外.本专业老师给专业同学说明/实习的内容及实习Wi何的注点事项试验过程中要注意安全.114收集资料及警专文就导伸给我们开会,分别跟我们说明了实习的具体内养及实习用同的注意第项，定Ne的实习思Ii为白薛内生像的分肉及其在效成分门鳏喧*黄柏超及榨用的校测.嵬老师学习了怎样IS找文献,中文的文献在知网.如网上役有资源的在百度学术中资找英文文觎主要在SPrinS”中伐找对衣找到的相关文觎做好分类.强试验之前一定察我”试验的依品般是参考文瞅或校村中的试验方法，所有的步舞必很右它的试找意义，能修证明什么，为什么做，不然试

4、验没有意义自然泡不到好的结果，试发圻娈写好自己的试验方案与步朕,按部就班的做试收，争取减少马虎和借误.3.153.163.173.183.213.223.233.243.25培养茶的种类与制作方法第一.在实验室通过参照实验书学习试验中所安阳到的培养城的制作,并亲手制作了培养压,在煮培养基的过程中了解到琼塘桥比殖脆条的发同效果更好，所以用琼脂粉的时候要比琼版条的用M少一些，不然培寿她太硬,不适宜微生物的生K.第二,学习的了灭曲S的使用方法,培芥茶通常采用湖热灭他法，】20t.3CInin.火苗前要注意向火菌然中加入一定Jft的黑慵水.以保肝火菌战的正常使用.灭丽结束后，取修妥等到阻境PF低到7M

5、C以下，PHJ开锅热取出铜内的物品.培外坛及其尚称将表1.在制作PDA的过程中,土豆削皮切成大狗一立方B1.米的大小,JW水煮沸,当用技选帔林必按压可将土豆按软即可关火,四层华布过浅除去土0.液体川水补充至IoDOnI.加入琼器.加热桢拌至溶化,加入他圆统充分混勺后分装在25ta1.傩形瓶中.用打八腹封住灭苗即可.3.283.293.30X314.111.5（包括日期和每天的具体实习内容、心得、体会和收获等）1.64.74.84.I1.4.124.131.144.154.184.191.204.214224.254.264.274.284.29实习报告：（应包括各实习项目名称、方法手段、材料设

6、备、技术路戏、结果、讨论等）白鲜内生菌的分离及检测药用成分白鲜碱黄柏酮和楼丽1材料与方法1. KftiiWH白爵杭林来源于沈阳农业大学药材园试颓仪Sh1.2培养些种类和剂作方法名称成分马侔普信希常琼用培养整（PDA）马黄Jf200g,前包能IOg,琼脂20生蒸溶水100OmI科祚琼阳培养亚蛋白城10g.NaCI5g,牛肉汁将3g.EtI815g.熊(NA)锚水I(KM)m1.孟加拉红培养些蛋白胶5g,KHRhIg,MgSO.7HX)1.j.RIOg.翻窗索0.1g.孟加拉红0.033g,琼脂18.5g.发芽浸片培捽些蕊愕水100OmI招麦芽役仔在蒸8水中充分溶解,渔城过滤.调至PHM.7102

7、.分装.U火菌15mi行氏故用培养基NnNoa3.0g,MgSO47H2O0.5g.K2HPO41.0g.FcSOrTH2OO.O1.g.KCI0.5g.琼旭15g.筋M30g.猿情水HXXIm1.1.2内生前的分岗培奔1.2 汨称时间及涧梅浓度以内生前分离过程中用次氧限轴作为消毒剂并设定不到的时间悌收和派收桶H川印记法检验滴桩效果.任1.it的培养箱内培养7天左右.以印记位置不出现朵的的最低票的浓境为我面灭丽的坡佳条件.1.2.2内生的分国、培笄及保存将洗好的白鲜根和叶在超冷工作8中M无曲水冲洗3次,取主板切成约2b的小段。将处理好的样&进行加下过科：在无他操作台中川75%乙醉燃洗203OM

8、无曲水冲洗4次：叶片川KWiNaC1.O溶液潦洗30s.根用2（）NaaO涉洗3min：热后用75%乙卿源洗20-30%：丹川无的水冲洗4次：将处理好的叶片用无菌谑纸吸干水分.用打孔涉任传片叶片的机打取IO个样品，接种于9bIM径的不同的培养基上I表1.将处理好的根用无育迪上吸I-.用无慎手术刀切成5mmx5mmxmm的小块接种于90nH役的不同培养基上(表I)。25寸下避光增芥5-14天.根械情落的形态特征和外项分离出的的、特定的窗落.随后将这线菌落塔移到新的PDA或NA培养基上纯化井蛆弓.保存时.将纯化培养后的苗株接种到斜面上，25Cjft,3-5个月需转接一次,以确保菌株的活性.1.3

9、对服药M溶液制备取对照西村粉末1$.和甲醉20m1.,超声处理30min.熬过.泡液靠干.残液加甲分In1.1.使溶解,作为对隐药材溶液”1. 4对照从港液制作取白奸破、杨制和黄柏阳对照品，加甲静制成何Im11.m的溶液，作为对照品培液.1.5 薄恬色说法盛开条件的脑法1.5.1 石油Sf-乙酸乙曲(7:3)隐薄层色谱法(中国药典201。年版-前网录V1.B)试验，吸取上述溶液各5JU.,分别点于同一硅胶G落层板.匕以石油if-乙酸乙Ift(7:3)为展开剂.展开,取出，Kft.ft1.%微取乙静.在i05t加热至点SI色清晰I再喷健化银伸溶液至如点显色清晰.1.5.2 石油Sf-乙酸乙酩(1

10、0:6)照薄层色谱法(中国药典XMO年版一第附录V1.B)试,分别吸取上述溶液各5川”分别点于同徒跤G薄层板上，以石油陛-蹴取乙陆(10:6)为国开剂.盛开,取H1.堀干.用I(H硫酸乙醉以色1.1.(CJK至短点显色清晰：用4项化正仰溶液至理点以色清晰.1.5.3 石油Ift-乙酸乙朋(1:1)将对照丛和药材以及提取液点与一张娃较G通木板，展开条件石油总(60-90C):乙酸乙Ifi(I:)：显色剂:365所波长处双室荧光班点:取存草解浓注般吟等品色.105X?热风吹至如点显色清晰.1.5.4甲羊-甲砰-冰得酸(10:0.5:0.1)照薄出色道法(中IH药典2010年版/附录V1.B)i.吸

11、取3种溶液51.分别点于同硅IKGFW薄层板上,以甲革-甲醉-冰俭取(10.0.5:0.1)为展开剂.上行盛开85an.取出.盼干.f1.10%的凝峻乙醉溶液.置105C烤箱中加热3nun.F365nm萦外灯F观察I再哎10%能酸乙静，加热至斑点显色消蜥；眩磷化秘钾溶液至斑点显色施断.1.5.5 甲羊-环己烷-乙酸乙曲(3:3:3)用薄m色诰法（中国药典2010年版一中附坟VIB）试验.用定性毛细管笔量吸取上述供试Ah溶液、对照药材溶液与对照品溶液点与同一硅胶G薄层板上，展开条件为甲米环己烷-乙假乙曲（3:3:3）飕开，取出，ftft.优广紫外（365nm）下在联英光，然后喷以5、存草修嫦酸供

12、液.在IOSu加热至火点显色清布.再0嬷化使悴溶液至风点显色清晰.供试品色讲中.在与对照品色清相应的位I1.t.M相同色的风点.校测梃取液内仃无白鲜碱、黄柏用以及杨IW.1.6 的憔初话1.6.1 茵线代谢产物提取对上述Iy到的人函用打孔器取15个防塔，的跄而用陌每五个胸柄放于一个PDA培猝取中培非7“0天恃其曲建长满培养Im时，刮取僧丝于泄纸Ijt于28-30摄氏度的烟相中干燥M小时,将干燥后的1隹置F2m1.离G管中,加入甲BM5m1.超声波提取（40t.2h）.超声后J唐心机ftOOUr、7mu态心.将上层液体用移液枪转移至斜的尚心昔中作为供试晶溶液.1.6.2 薄层色由法维选荫株来用薄

13、层色增法（中国药典2010邠版一SJ阳泉VIB）试验，用定性W加管透GV收取上述供试从溶液对照药材溶液与对照瞌溶液点与同硅胶G的以板匕峻开条件为甲米-环己烷-乙蝮乙雷3:3:3）展开.取出,映干.置于紫外（365un）下观察荧光.然后喷以5诸草Ie1.K酸试液.在1310加热饮风点以色沛晰.冉嘤旗化梯押沼液至班点显色清晰.1.6.3筛选结果双舍it算各对照乩的Rt值.以及荚光如点窿色.选取并记录RF做相以（0.1）的供试品济液9码.1.71.7.1 面,代用产物提取首先对1.3中箭透招到的菌株篁新培养,在原有培养基上取5个的柄,分别培养在.5个培养m中，培养时何在2周左右，侍丽丝长清培笄某后制

14、取麻丝，合井于城城匕n28-30摄氏度的烘IB中干炮24h.将干燥后的陆坨置Fim1.离心管中,加入甲眸1.5m1.超声波提取（40C.3h）.超声后J需心机充心6000r、7min.用移液枪取M：淞体新的高心管中.1.7.2 薄层色肃法鉴定内生期活性物项通过上述对展开条件的筛选,将选择甲不-环己炕-乙取乙带（3:3:3）作为乖选条件.石袖磁乙陂乙酩(10:6)作为临选条件二、甲不-甲醉-淳册前(10:0.5:0.1)作为箭迭茨件，At后录用甲米环己烷乙酸乙曲(3:3:3)确定脩株的小红性，对制稀得到的演株进行就一步确认1.7.3 彷选结果取合对比对胜晶黄柏酹、棒酹与臼鲜碱Rf做,保密Rf值祗

15、憎0.01)及十复性好的曲株,Mtmi：W1.(;1.1.IKM411iTqfHt*4MW-1.：Kmff)m,it.i1.f1.V.fti(1.B战州中叱氏修.ntsu.ioM.2.MMm*ft物化学森6QaMh1.81效液和色谱检谢利用高效液相色谱法对求理性好以及K1.-位涯确的菌林提取液进行检测色谱条件色谟柱：A】ItinaCI8(1.6mX250r11,511)：保护柱：An-GUarmC18(4.6n7.511n.5111.);流动相:乙睹一O.1.i1.01.nin.进样U0u1.:柱Sk25-C;检测波长23811n在上述条件下，向鲜破黄柏超和杨超的保留时间分别为15.min.27.7nin.31.0min.射照品溶液的制备精密杉取白耕班对照品2.0I