白鲜内生菌的多样性和它们产生白鲜碱.docx

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1、MkiwJIi:AMK.书用植常日”度的化分成分及薄N仆阳像绘3内蒙古尚化工,2007(3|;50-51Mftwj2:.nn.v.纪力他,%th.门斯已解除饮精元坦城IJ安衣科学3ru1.oM3Art.Sd.2013.41(11821餐堂修iS9,d惊T次,等门的料也靖界及无怜系建立的靖加,时母国IX田机Ma2M2k%M*ttM1可：owrvcofcr*1fiyticS1.Crnhf6：cr*1.o(iyisvt(,Ifw11*B*K011I，f1111*Jrjr.Mimhjx1.QC1j冰外g.XcYtMfkUtr29MftW%5:Hmm.In:Mirob1.M)Eco1.ucy(ImvUa

2、NrY(IrIGSpring-KrImh.1.1.：1WNk(wM:MrAStrobe1.G50erfe0.TMandMfieproSuct)n勿hurcsndfrfr4Jn的皿tngus01Pacrtkyew.Scr4c.1993.260:214216MIHWc,tMb嚼中药门螂应内生如儡s5生化箝在tcw假的排MfPH川.中间也优出2010120115)324327*ft(Wj8:MKXK万.门”内牛国仆忠W:U,广东我让，1?2”220m9boBttwj9:4)?.,1.k.正以上.门外根皮、木CiA性成分比较3北川.我庆文过与隈学报2皿涧3U365MkimMM):2地此乍ft生屈ttf

3、I也不可榭KMJnwnWW1.iuaKHdjo(i6p9自以&1出虬代在总门餐改止I1.fvU的药”新充川,力求心仄“火伊，家J99925问:W5与效儿处.楣田崎,，长索,门的升发门利。我知枝素J1.HWMR4005z344i41.BttiwJIii:I门W皮产伙如WG白鲜内生菌的多样性和它们产生白鲜破、样!和黄柏)的能力*9：内生偏陡第产生。必工梳物相同成相耀的活也成分，力/研究门料内生谓的多样性和它打产生白蝉收、杵剂和货帕制的能力,木实验从好生白弊楸&和木心中分离出株内生的,M1PtiM侏内生八仙相一株内生纲何.&过聚合岫就反应(PCR)物以中界定的株分加出/什么科展).井用A效沧相色帘法

4、测定自株产生门杆M、树用相访柏朋的能力如落七(产以奴岛的何株的名称,产SU.知字I多样性.内生(#.门我收,材用.WIIMDictamnusdasjcassTurcz.)乂名人收牛、野花忸.竽稣亨.是芸件M门鲜14多年生草本机物以根皮入药.中药Z为白鲜皮.K(WK.栋热,利以.除湿和杀虫海功g现代研究我明门”皮还具41.t消炎.保护神言、治疗动脓筋样硬化对小债化等战国日域外用Jt整加I仙机nwH”113(id.朱齐作农初用,阿防治多种痛火内生苗(EndoPhyte)是指理拄在其生活史的定阶段或全部阶段生活于他原的物的各种飙织和；有内他的Ji菌或捆谢被感染的宿Ktf1.物(至少是留时)小表现出外

5、在病症，可通过组织学方法或从严格表血消海的机物坦织中分幽或从植物组织内直接扩增出微生物DNA的方法来证明其内生脚我们可把植物内生信押解为植物纸织内的正常前群,它们不仅包括了瓦.密其利的GUtUa1.iStiC)和中性的(neutra1.)内共生微生物,也包括了那些潜伏在宿主体内的病吃化生物，但是在以往的研究中涉及更多的是美于植物内生女曲的报道.内生R防(endophyticfungi)是指花牛.活史中的某一个阶段存在于ft!微物构筑织内部，不会引起宿主明显病症或在对宿E造成明显伤出的现雨，包括一宿在生油史的儿阶段表面生的腐生苗、潜伏性扃炭苗和曲根曲.内生网窗传遍存在地域Hi物讯织中一类繁多,分

6、布广泛.近十几年来，其中某些产物与宿主的次级代谢产与出同或相1上这些发现,使内生Si菌代谢产材中活性物质多样性的研究受到广泛关注.怫端木竽人!从中药门鲜皮中强生的株内生细曲TS6对灰毒IW有较强H稳定的抑制作用,在培养In1.对峙试验中.抑崩带达10mm,在活体上对病善的抑制率为33.72%：经形态学观察和生理生化反应，S1.定此菌株居枯草芽胞杆菌(Baci1.IussubtiIB);其最适生长温度为30X?,RISPH7.最佳培养时间为48h,通气忖超大曲株的生长情况也好.浏丽娟等人从迪化仲能学院M物汨的野生门虾中分离徉到“糕内1归集.共中12种H耸.10种革兰氏阳性函,2种革兰氏阴性i三,

7、1种球Si为第兰氏阴性菌,并且发现了白鲜仃抑菌作用,IB丽图等人I比较白鲜根皮和水心的活性成分，发现以活性和分桁身为指标,门许根皮中两考含量均大于木心中的两者含；根皮与木心中两者含贸均达到了中IH药典要求.二者HpIC指纹图谱的吻合科段较充.活性成分相似.白鲜根皮可不去木心入药.f1.m.N内外利用内牛:曲世烈稀/次4:代初产物和防治病虫咨的Bf允和报道牧力.(UM白维的国龙：1：安集中在化学屐分.为播性、就培等方配防符对H弊的Sf%的不断流入.各什止对门”的需求M越来越大.而白*f现在:1:要M野生为主.人1：优培技术尚不成姆从而导致白轩的价格在21卅纪以来楸，1.岛.”1.后也郴绘定张.忸

8、此.利用内生苗产生门蟀有效成分对缓解中场压力,保护野生资源仃极共由妥的作用,本女发票用如织分禽法从自静的帙和叶中分归内生!用Bi效液和色中法HPtCA宜定其产生白中Bt样第和货相用的能力.为:双模工业化生产臼蝉行效成分及你麻提供条f1.”并I1.比坡根皮W木心中内生曲的种类和数”从内生的的丸也考IS白饼入的是否必须抽取木心.1 Materia1.sandmethods1.1 Samp1.ingandiso1.ationDicumnusdscpusspecimenswereo1.ecte(JfromtheyearoWhea1.thyp1.ants,grwcinQ1.arvthanronofAn-

9、shanCity(iuo-nng,6I2).Beforedwfectioc,thep1.antsamp1.eswerethoroMgh1.washedunderrunningtpwatertoremoveaUacedsodandrinsedthrztimeswithdisti1.1.edwatet.P1.antswere*paratedintoporttonsofroot/ndkaf.ForsurfacedMfecxon,anv,root),acainin70%(vv)ethano1.for30s,andfina*frinsedinstewater4timesTherootwa*IU裱分成戌初

10、木心)withSteriIesca1.pe1.SmaiPieCeMO.5X0.5Crn)ofDictamid;HyCarPUSwr。phcdPKndhn,sirteSIOnieSofdistinctivemphotypesWerCseparatedonthebasisofthe*mofpMogka1.Charawr1.sHandappearance.Theco1.oniesWefesubsequent1.yre-iso1.teJbyPutmSonPOAandincubatedat28*Cfor24YBhtoobtainpurecu1.tures.AJIoftheBoistesWCre转格到4C

11、的冰箝保.h困23个转接,次J;InddepositedmtheCoftccofShenyangAgrkv1.tura1.Universitv,1.2在白对照ftttwi2:人VMf生JnI分离gH如何在分围内生出何过程中设四类空白对髅处理实会，以佻正所AJM株为M物内生以修：*,Hf1.21在内生MIe1.分离的整个无曲舞作过粗中在超冷工作台内放5个敞开由了“16钝培岸瓶平板,平板好28C珞养7d6，不得出现任时杂僭,以检测制抄工作台中的无除风油冷度,从由保证分尚丫板中长出的储荒来源植物材料，川不是来源于环境的柴僭.1.2.2值两林M物材料衣而大的效果恰批方伏,保证所分离的的株为樵物内生文曲

12、.而不是来自干断物表面的杂用1.2,2.1如织印母法，采用经衣血消位的如织块在空白圻券霭上凝动.牡殂织块各表闻接触和养IH丹掖料好的培养H起培IP解靛烙养皿上未长出，落.说明发而涓布糊底，1.2.2.2amattHi:取胞一次部优液】5。微升曲平板,28七培养丸.蜕察祭古力甫长出,以增定灭加是否制蜕2真产白鲜鼻、掰男或黄柏S1.的初步探究2.1 材料2.1.1 试剂白鲜碱、样洞和黄柏酮标准品：购自沈阳药检所试剂：2.1.2 仪器2.1.3 供试菌种2.1.4 培养基的制备2.2 实验方法2.2.1 初步筛选2.2.2 垃筛2.3 检测方法3结果&1表困灭条件的母途分离内生真的就要尽可能分离到所

13、行内生其S1.而不足分离部分内生真苗.强度太大，不仅杀灭了表而微生与，杀的剂还可进入材料内部，格分布于表皮下的内牛.过的桑死，使所分离的内生口偏的种类和处rt爻到影响：杀前强收过低.又会使表而我菌混进于内生或雨中，造成分离失败，本研先以5%】012仍，30%的次氨酸帧溶液进行表面灭菌,灭苗时间30s1.0min,杀菌强度由SS到弱,以对照平板不出现杂萌的公蚊乘用强度为表面灭菊以佳条件.门It内生典第分离的最佳灭崩条件见表1和表2我1白鲜根表面灭菌域佳条件处理时间活M气浓度(%)5)0203030s60s5inTninMx1.in注，十.最健衣面灭的浓度:有杂菌出现&2臼鲜叫麦而灭便施佳条件处理

14、时间活性纸浓度（）510203030s*M)s90s50in7ninIOnin注：.最佳表面火菌浓度:-仃朵谓出现从我1和2可见,高浓度坳时问处理组与怔浓度长时间处理粗，都可i到河底火芮的效果.但桶先发现.低浓变长时间处理所分离的内生典由种类皎少.材料发信时间仃延迟现象,而岛浓度距时间处理分离的内生九曲种类较多.见农衣3杀留赤度对人参内生支曲分离影响杀强殷长出内生曲的时间K出内牛.f1.曲的种突s1020%30注：培养条件为由于次氨酸钠溶液在表面灭湎的同时，次氟酸筋会浸入他拗材料内部，浸泡时间越长，次弱酸他汹入越深，表皮以下会行更多、分布更深的内生寅的被杀死，内生典翦从材料中长出所需的时间就电长.所以,公仕衣面灭情釜件疑为高浓哎短时间处理.时f草本植物和较*植物.其衰皮薄角质化程度低灭IMWe更易于溶入组织内，杀死内生iiSi,更应采用高浓收短时处理工艺3.2内生