乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）操作规程.docx

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1、乙型肝炎核心抗体（抗-HBC）操作规程1.操作步骤：（1）配液：浓缩洗涤液配置前充分混匀（如有结晶析出应充分溶解），将浓缩洗涤液（25*）用蒸镭水或去离子水按1：19稀释后使用。（2）编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂）（3）加样：将待测样本用生理盐水1:30稀释。（稀释样本检测结果为临床意义；样本原液加样，检测结果为流行病学意义。用户可根据实际情况选择。）分别在相应孔中加入稀释样本50微升和阴，阳对照50微升及质控血清。加酶标抗体：空白对照孔不加酶标试剂，每孔加入酶结合物50微升，轻轻振荡混匀。温育：置37。C温育30分钟。（6

2、）洗涤：手工：扣去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置20秒，扣去洗涤液，重复5次在吸水纸上拍干。洗板机：将孔内液体甩干。选择4次洗涤程序，洗板后在吸水纸上拍干。（7）显色：每孔加入显色剂A,B液各1滴（50微升），轻轻振匀，370c避光显色15分钟。（8）终止:每孔加终止液1滴（50微升），混匀。（9）测定：用于酶标仪读数，取波长450nm（建议使用双波长的酶标仪比色，参考波长63Onm)测定各孔OD值先用空白孔校零，然后读取各孔OD值。2.结果判断(1)目测：在白色背景下观察核孔显色情况，有明显黄色者为乙型肝炎表面抗体(HBCAb)阳性；无色者为乙型肝炎表面抗体(HBcAb)阴性。(2)酶标仪检测: 临界值(CUT/0FF)计算：未稀释样品CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N0.3o1:30稀释样品CUT/OFF=阴性对照孔OD均值N0.5o 阳性判定：样品OD值小于COV,说明该样品HBcAb阳性。 阴性判定：样品OD值大于或等于COV,说明该样品HBcAb阴性。