乙型肝炎e抗原(HBeAg)操作规程.docx
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1、乙型肝炎e抗原(HBeAg)操作规程1.操作步骤:(1)配液:浓缩洗涤液配置前充分混匀(如有结晶析出应充分溶解),将浓缩洗涤液(25*)用蒸镭水或去离子水按1:19稀释后使用。(2)编号:将样品对应微孔按序编号,每板应设阴阳性对照各2孔和空白对照1孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂)(3)加样:分别在相应孔中加入待测样品50微升和阴,阳对照50微升及质控血清。加酶标抗体:空白对照孔不加酶标试剂,每孔加入酶结合物50微升,轻轻振荡混匀。温育:置37C温育30分钟。(6)洗涤:手工:扣去孔内液体,用洗涤液注满各孔,静置浸泡3060秒,扣去洗涤液,重复5次在吸水纸上拍干。洗板机:将孔内液体甩干。选择4
2、次洗涤程序,洗板后在吸水纸上拍干。(7)显色:每孔加入显色剂A,B液各1滴(50微升),轻轻振匀,370c避光显色15分钟。(8)终止:每孔加终止液1滴(50微升),混匀。(9)测定:用于酶标仪读数,取波长450nm(建议使用双波长的酶标仪比色,参考波长63Onm)测定各孔OD值先用空白孔校零,然后读取各孔OD值。2.结果判断(1)目测:在白色背景下观察各孔显色情况,有明显黄色者为乙型肝炎e抗原(HBeAg)阳性;无色者为乙型肝炎e抗原(HBeAg)阴性。(2)酶标仪检测: 临界值(CUT/OFF)计算:CUT/OFF=阴性对照孔OD均值NX2.Io(阴性对照孔OD值低于0.05者按0.05计算,高于0.05按实际OD值计算) 阳性判定:样品OD值大于或等于COV值时,说明该样品HBeAg阳性。 阴性判定:样品OD值小于COV值时,说明该样品HBeAg阴性。


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