微生物培养技术.ppt

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1、微生物微生物非细胞生物：病毒非细胞生物：病毒原核生物：细菌、放线菌、支原体、原核生物：细菌、放线菌、支原体、 立克次氏体立克次氏体真核生物：真菌（酵母菌、霉菌）真核生物：真菌（酵母菌、霉菌）菌落菌落 1 1、概念：、概念： 单个或少数微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 2 2、菌落是鉴定微生物的重要依据：、菌落是鉴定微生物的重要依据： 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落一般具有稳定的特征，如菌落的大小、形状、边缘特征、隆起程度、颜色等。细菌菌落细菌菌落细菌的菌落特征细菌的菌落特征因种而异因种而异 如图是酵

2、母菌电子显微如图是酵母菌电子显微镜下的形态结构镜下的形态结构真菌：酵母菌和霉菌真菌：酵母菌和霉菌青霉青霉一、微生物的分离和纯培养一、微生物的分离和纯培养（3 3项技术项技术1 1个案例）个案例） （一）培养基配制技术（一）培养基配制技术（二）无菌技术（二）无菌技术（三）接种技术（三）接种技术 案例：大肠杆菌的分离和纯培养案例：大肠杆菌的分离和纯培养 （一）无菌技术（一）无菌技术 1 1、概念：无菌操作泛指、概念：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。所有防止杂菌污染的方法。对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行

3、清洁和清洁和消毒消毒；将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行等进行灭菌灭菌；实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。具与周围的物品相接触。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行在酒精灯火焰附近进行酒精灯的火焰旁的局部酒精灯的火焰旁的局部高温使微生物难以生存高温使微生物难以生存2、消毒消毒（1 1）定义：）定义：使用较为使用较为温和温和的的物理或化学物理或化学方法仅杀方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不死物体表面或

4、内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）包括芽孢和孢子）A A、煮沸消毒法煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min，日常生活常用，日常生活常用B B、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min，适用于不耐高温的液体，如牛奶。，适用于不耐高温的液体，如牛奶。C C、化学药剂消毒法化学药剂消毒法: :用酒精进行皮肤消毒用酒精进行皮肤消毒; ; 氯气消毒水源氯气消毒水源D D、射线消毒法，如紫外线射线消毒法，如紫外线（2 2）消毒的方法：）消毒的方法：（1 1）定义：）定义：使用使用强烈的理化因素

5、强烈的理化因素杀死物体内外所杀死物体内外所有的微生物，有的微生物，包括芽孢和孢子包括芽孢和孢子 。2 2、灭菌、灭菌（2 2）灭菌的方法：）灭菌的方法：A A、灼烧灭菌、灼烧灭菌方法：直接在酒精灯火焰的方法：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层充分燃烧层(温度最高温度最高)灼灼烧烧(迅速彻底迅速彻底)适用范围：接种环、接种针、金属用具适用范围：接种环、接种针、金属用具(接种工具接种工具)；试管口或瓶口试管口或瓶口(在接种过程在接种过程中易被污染的部位中易被污染的部位)C、湿热灭菌、湿热灭菌 方法：方法：高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌P8 适用于适用于培养基培养基的灭菌的灭菌B、干热灭菌：干热灭菌： 方法：干

6、热灭菌箱方法：干热灭菌箱, 160-170 下加热下加热1-2h。适用范围：吸管、适用范围：吸管、培养皿培养皿(玻璃器玻璃器皿皿)、金属用具、金属用具(能耐高温的、需保能耐高温的、需保持干燥的物品持干燥的物品)1 1、培养基定义、培养基定义：（课本第：（课本第9 9页）页）2 2、营养构成：、营养构成：环境条件：环境条件：pHpH、氧气、二氧化碳、渗透压等、氧气、二氧化碳、渗透压等 （二）培养基配制技术（二）培养基配制技术基本营养成分：基本营养成分：水水、无机盐无机盐、碳源碳源、氮源等氮源等特殊营养成分：特殊营养成分：维生素、生长因子等特殊的、能维生素、生长因子等特殊的、能满足微生物不同需要的

7、营养物质。满足微生物不同需要的营养物质。固体培养基固体培养基用于菌种分离、鉴定菌落等用于菌种分离、鉴定菌落等半固体培养基半固体培养基可观察微生物的运动可观察微生物的运动液体培养基液体培养基常用于发酵工业。常用于发酵工业。（1 1）按物理状态分：）按物理状态分：固体培养基固体培养基和和液体培养基、半固体培养基液体培养基、半固体培养基。3.3.培养基的分类培养基的分类固体培养基固体培养基平板培养基（课本第平板培养基（课本第9页）页）斜面培养基斜面培养基固体培养基中需加入凝固剂，如固体培养基中需加入凝固剂，如琼脂琼脂半固体培养基半固体培养基无运动无运动 有运动有运动 半固体培养基中半固体培养基中也需

8、要加入凝固剂琼也需要加入凝固剂琼脂，但加入量少于固脂，但加入量少于固体培养基。体培养基。液体培养基液体培养基表面生表面生长长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长选择培养基选择培养基（2 2）按功能分：）按功能分：选择培养基选择培养基和和鉴别培养基鉴别培养基加入加入青霉素青霉素的培养基的培养基:抑制细菌和放线菌的生长，抑制细菌和放线菌的生长， 分离分离酵母菌、霉菌酵母菌、霉菌等真菌。等真菌。 不加氮源不加氮源的的无氮无氮培养基培养基: : 分离分离固氮菌固氮菌定义定义（课本第（课本第18页）页）举例：举例：加入加入高浓度食盐高浓度食盐的培养基的培养基: :分离分离金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌

9、鉴别培养基鉴别培养基 根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同鉴别不同种类的微生物种类的微生物。 例如：在培养基中加入例如：在培养基中加入伊红和美蓝伊红和美蓝，可以用来，可以用来 鉴别鉴别大肠杆菌大肠杆菌。 如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝如果有大肠杆菌，其代谢产物就与伊红和美蓝 结合，结合，使菌落呈蓝紫色，并带有金属光泽使菌落呈蓝紫色，并带有金属光泽。 ( (课本课本1515页页) ) 用用化学成分已知的化学物质化学成分已知的化学物质配成的，因成配成的，因成分明确，常用于分

10、类、鉴定等分明确，常用于分类、鉴定等 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。合成培养基合成培养基: :天然培养基：天然培养基：（3 3）按成分：）按成分：合成培养基合成培养基和和天然培养基天然培养基(P(P9 9 用化学成分不明确的天然物质配用化学成分不明确的天然物质配成的，成的，如血清、组织提取液等如血清、组织提取液等称量：称量：准确地称取各种成分。牛肉膏比较黏稠，准确地称取各种成分。牛肉膏比较黏稠， 可以用玻棒挑取，放在可以用玻棒挑取，放在称量纸称量纸上称量。牛上称量。牛 肉膏和蛋

11、白胨都肉膏和蛋白胨都容易吸潮容易吸潮，称量时，称量时动作要动作要 迅速迅速，称后要，称后要及时盖上瓶盖及时盖上瓶盖。4.4.培养基的配制步骤（第培养基的配制步骤（第1010页）页）（1 1）. .计算计算: :根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的根据牛肉膏蛋白胨培养基配方的 比例，计算配制比例，计算配制100mL100mL的培养基的培养基 时，各种成分的用量。时，各种成分的用量。（以牛肉膏蛋白胨固体培养基为例）（以牛肉膏蛋白胨固体培养基为例）（2 2）. .溶化：溶化：加水加热熔化牛肉膏加水加热熔化牛肉膏 将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯加入少量的将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯加入少量的 水

12、，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒水，加热。当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒 取出称量纸。取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解；加入蛋白胨和氯化钠，用玻棒搅拌，使其溶解；加入琼脂；加入琼脂；用蒸馏水定容到用蒸馏水定容到100mL100mL。 整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。底而导致烧杯破裂。（3 3）. .调节调节pHpH（4 4）. .分装、包扎分装、包扎（5 5）. .灭菌灭菌（6 6）搁置斜面）搁置斜面P11P11或倒平板或倒平板P13P13搁置斜面搁置斜面-斜面培养基斜面培养基(P11) 待

13、试管冷却至50 左右，将试管口部枕在高约1cm的木条或其他合适高度的物体上，使其自然冷却，斜面长度不超过试管总长的1/2.待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右左右时，在酒精灯附近倒平板。时，在酒精灯附近倒平板。倒平板倒平板-平板培养基平板培养基(P13)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；在火焰旁右手拿锥形瓶，左手拔出棉塞；右手拿锥形瓶，使右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过火焰锥形瓶的瓶口迅速通过火焰；左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培 养皿，立刻盖上皿盖。养皿，立刻盖上皿盖。待平板冷却凝固后，将平板待平板冷却凝固后，将平板倒过来

14、放置倒过来放置。 平板冷凝后倒置的原因：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固平板冷凝后倒置的原因：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基既可以使培养基表面的水分更好地挥发，表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。造成污染。 （三）接种技术（三）接种技术1.1.定义定义: :在无菌条件下将微生物接入培养基的在无菌条件下将微生物接入培养基的操作过程。操作过程。3.3.平板培养基上接种方法平板培养基上接种方法平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法

15、平板划线法、稀释涂布平板法、稀释混合平板法2.2.斜面培养基上接种方法斜面培养基上接种方法目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种目的：菌种转移、扩大培养和保存纯净菌种目的：用来培养、分离细菌等微生物目的：用来培养、分离细菌等微生物斜面培养基上接种方法斜面培养基上接种方法准备接种准备接种接种环灭菌接种环灭菌挑取菌种挑取菌种划线接种划线接种培养、观察培养、观察点燃酒精灯、取斜面培养基、取菌种试管点燃酒精灯、取斜面培养基、取菌种试管灼烧多次，迅速彻底地灭菌灼烧多次，迅速彻底地灭菌试管口通过火焰试管口通过火焰2-3次，杀灭试管口微生物次，杀灭试管口微生物试管口灭菌试管口灭菌接种环冷却后挑取菌种接种环冷

16、却后挑取菌种不要将培养基的表面划破不要将培养基的表面划破37 下培养下培养24h平板培养基上接种方法平板培养基上接种方法1、平板划线法、平板划线法 将混在一起的微生物或同一微生物群体中将混在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞。区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞。准备接种准备接种接种环灭菌接种环灭菌划线接种划线接种培养、观察培养、观察试管口灭菌试管口灭菌挑取菌种挑取菌种平板划线操作平板划线操作平板划线要点平板划线要点在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环的原因的原因 A.操作的操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；B.每次划线前灼烧接种环是为了每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来