2 羟丙基 β 环糊精 葡萄籽提取物包合物对羊肚腐败菌的抑制作用及保鲜效果 附2型糖尿病合并心血管疾病应如何选择药物.docx

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1、2.羟丙基-环糊精/葡萄籽提取物包合物对羊肚腐败菌的抑制作用及保鲜效果羊肚即羊胃，是羊的副产品之一。但在贮藏过程中，易受到内源性微生物和外界环境的影响，从而发生腐败变质。因此，寻找控制肉与肉制品在加工贮藏中微生物污染的有效方法是非常必要的。近年来，天然抗氧化剂植物多酚抑菌机理的探究成为了热点。植物多酚取代合成抗氧化剂和抑菌剂已是大势所趋。酿酒后的副产物葡萄籽提取物（GSE）是丰富且廉价的多酚来源，主要单体是黄烷-3醇和低聚葡萄籽原花色素（GSP）,其中GSP可有效清除超氧化物和羟基自由基。GSE广泛应用于肉制品贮藏加工中，但其自身特性在食品工业中的应用已受到限制，因为GSE在水中的溶解度、生物

2、利用度有限，见光易分解、吸潮，具有不稳定性。环糊精是由-l,4-葡萄糖昔键连接的无毒环状低聚糖，因为具有中空圆锥形的特殊结构，使得形状和大小合适的疏水性客体分子或官能团能嵌入其空穴中，形成包合物。而水溶性环糊精衍生物，如2-羟丙基-环糊精（HP-CD）,因具有亲水外表面和亲脂内腔的结构，且客体分子被封装到腔中可以不改变宿主的化学结构而被广泛应用在食品或医药领域。已发现客体分子的许多化学和物理性质在包合物形成过程中被优化。然而，有关GSE与HP-CD的包合物在肉制品中防腐抑菌方面的应用鲜有报道。因此，针对HP-P-CD/GSE包合物对羊肚腐败菌的抑制作用及保鲜效果进行了研究，以期为肉类食品防腐保

3、鲜提供新的途径。1 HP-B-CD/GSE包合物结构与特性的表征1.1 FnR分析结果共沉积法制备的不同物质的量之比的HP-CDGSE包合物、HP-CDGSE物理混合物、HP-CD及GSE的FTIR图如图1所示。GSE在3431Cm-I处显示出特征吸收峰。HP-P-CD在3416.08Cm-I处有明显的一OH伸缩振动吸收带，在2928.33cm-1处存在一CH伸缩振动峰，在1159cm-1处和1032cm-1处为C-O-C的对称和不对称伸缩振动峰。在形成HP-CDGSE包合物后，GSE特征峰逐渐减少（主要呈现HP-P-CD的峰），移位或丢失。GSE中对应的苯骨架在3431cm-1处的吸收峰轻微

4、移动至3410Cm-LlOOo500Cm-I处的C-O拉伸振动被HP-CD的特征性吸收峰被遮蔽。物理混合物是HP-CD和GSE单一组分之间的FTIR光谱的简单叠加。1.2 热特性分析结果由图2可知，GSE在238.21处出现了急剧的吸热熔融峰。对于HP-CD,在82.56处显示出较宽的吸热熔融峰，这与HP-CD水分损失有关；在349.38C处观察到第二吸热熔融峰，这可能是热分解所致。物理混合物的DSC曲线是HP-CD和GSE曲线的简单叠加，该结果表明这两种物质仅物理混合但彼此不相互作用。在具有不同物质的量之比的HP-P-CD/GSE包合物中，除了在283处GSE熔融峰的消失外，HP-CDGSE

5、（1：0.5）包合物的DSC曲线中其特征吸收峰仅在71.15C处很明显。在HP-CDGSE（1：1）包合物的DSC曲线中，在74.99和341.70C处有两个吸热熔融峰。在HP-P-CD/GSE（1：2）包合物的DSC曲线中，在73.65C和323.35处存在两个吸热熔融峰。DSC分析可用于确定固体包合物的形成，且包合物中客体分子的热峰消失进一步表明包合物的成功制备。1.3 微观结构观察结果如图3所示，GSE呈现针状菱形晶体形态，而HP-CD呈球形。在HP-CD和GSE的物理混合物中两种形态都能被观察到，为不规则的嵌段结构和片段化的球形结构，其中宿主(HP-CD)和客体(GSE)的形式未改变。

6、包合物的形状与物理混合物的形状完全不同，其呈现出具有球形腔或腔体碎片结构表面的多层块结构。不同物质的量之比的HP-CDGSE包合物的表面形态不同；HP-CDGSE(1：0.5)的包合物呈圆球形嵌段结构，而1：1和1：2比例的包合物呈现不规则的层状结构。研究表明，当客体分子包含在-CD中时，包合物的表面由于客体分子结晶度的降低而发生很大变化。在HP-P-CD/GSE包合物中，两种组分的原始形态完全丧失，并被不规则尺寸的小聚集体取代。因此，FnR、DSC和SEM的结果表明HP-CDGSE包合物制备成功。2羊肚中的菌落总数及腐败菌的分离、鉴定结果1.1 贮藏过程中羊肚的菌落总数变化结果显示，新鲜羊肚

7、的菌落总数为3.91(Ig(CFUg),在贮藏的前4d,菌落总数呈现快速上升的趋势。随后，微生物的繁殖与营养物质达到平衡状态，在贮藏第5天菌落总数为7.52(lg(CFUg)o一般来说，生鲜肉定菌落总数高于6(lg(CFUg)时表示肉品质已经腐败变质，而羊肚在贮藏第2天时的菌落总数已高于6(Ig(CFUg),说明已腐败变质。1.2 腐败菌的鉴定及进化树的构建结果对羊肚中微生物进行分离纯化后，共筛选出7株腐败菌，对7株腐败菌进行DNA提取和PCR扩增,扩增后的条带如图5所示,特异性扩增条带均出现在1250bp左右，且条带清晰、无杂带。对条带进行测序后，在BLAST上比较测序结果,选择了98%以上

8、的相似菌株，并使用MEGA7.0构建了腐败菌系统发育树(图6),得到分离纯化出的7株腐败菌菌株分别为表皮葡萄球菌(Sgphylococcusepidermidis)金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus),蜡状芽袍杆菌(BaCillUScereus)吉氏库特菌(KUrthiagibsonii)肠溶沙门氏菌亚种(SalmoneIlaentericasubsp.)大肠杆菌(Escherichiacoli)棕色类香味菌(MyrOiddeSphaeus)o3 HP-B-CD/GSE包合物(1：2)对腐败菌的抑制作用实验中发现物质的量比为1：2时包合物的抗氧化效果最好，且物质的量比为1

9、：0.5和1：1对腐败菌的抑制效果没有1：2时好(未列出相应实验结果)，所以只对1：2的最优效果进行讨论。结果显示，HP-CDGSE包合物(1：2)对分离的7种菌均具有一定的抑菌效果，其中对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌活性效果最强，其次是表皮葡萄球菌。图7为抑菌实验中包合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌结果。4 HP-B-CD/GSE包合物对羊肚的保鲜效果4.1 PH值的变化结果显示，空白组中的羊肚在第0天时PH值为6.62,而处理组的PH值在第0天时为6.53,处理组的PH值低于空白组可能是因为与HP-CDGSE包合物溶液本身的PH值有关。在贮藏期间羊肚的PH值均呈现缓慢上升趋势。不同物质

10、的量之比的HP-CDGSE包合物(1:0.5、1：1、1：2)处理的羊肚在贮藏期间的PH值始终低于空白组，说明在使用HP-CDGSE包合物溶液浸泡后，GSE进入羊肚的组织中，抑制了羊肚中的蛋白降解，减缓了羊肚腐败变质的过程。相比较下，1:2HP-CDGSE包合物处理组的羊肚PH值在贮藏的前6d保持在较小的范围波动，这对羊肚品质保持十分有利。4.2 TVB-N含量的变化结果显示，在第0天时，新鲜的羊肚中TVB-N含量为8mgl(X)g左右。在后期贮藏过程中，各处理组的TVB-N含量均呈现上升的趋势。空白组中TVB-N含量上升趋势较快，贮藏期在第2天时已超过GB9961-2008鲜、冻胴体羊肉中对

11、鲜肉TVB-N的限量15mg/100go而不同物质的量之比的HP-P-CD/GSE包合物(1：0.5、1：1、1：2)处理的羊肚在贮藏期间的TVB-N含量始终低于空白组，说明HP-CDGSE包合物能有效抑制由微生物引起的TVB-N含量增加。其中，物质的量比为1：2的HP-P-CD/GSE包合物TVB-N含量增长较缓慢，在贮藏的前6d均低于15mgIoOg,保鲜效果较好，这一结果与PH值的变化趋势相似。4.3 感官品质的变化在贮藏开始时，羊肚的颜色色泽均匀，富有光泽，有弹性，质地坚实，具有羊肚固有浓郁气味，无异味。贮藏2d后，空白组的感官评分明显低于用HP-P-CD/GSE包合物处理组。贮藏时间

12、超过4d后，空白组色泽极度不均匀，羊肚表面水分过多，无弹性，质地非常柔软，固有气味消失，有明显异味，感官评分小于6分，并呈现急速下降趋势；包合物处理组(除1：0.5)在6d内感官评分大于6,保持在可接受范围。结果表明，HP-CDGSE包合物处理组可有效延长羊肚的货架期34d,与理化指标研究结果一致。结论本实验以HP-CD为主体成功制备了不同物质的量之比(1：0.5、1：1、1：2)的HP-CDGSE包合物，利用FnR、DSC和SEM表征手段证明了包合物的形成。另外，对羊肚腐败菌进行分离后，鉴定出了表皮葡萄球菌(St叩hylococcusepidermidis)金黄色葡萄球菌(StaPhyIOC

13、oCCUSaUreus)、蜡状芽泡杆菌(BaCiIlUScereus)、吉氏库特菌(Kurthiagibsonii)、肠溶沙门氏菌亚种(Salmonellaentericasubsp.)大肠杆菌(Escherichiacoli)棕色类香味菌(MyrOiddeSPhaeUS)7株主要腐败菌，且HP-CDGSE包合物(1：2)对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌具有明显的抑制作用。将HP-P-CD/GSE包合物应用于羊肚的保鲜(4C)中，发现其对羊肚的品质起到一定的保持作用，且物质的量之比为1：2的HP-CDGSE包合物对羊肚的抑菌保鲜效果较好。2型糖尿病合并心血管疾病应如何选择药物2型糖尿病正在成为一种流

14、行病。动脉粥样硬化性心血管疾病(ASCVD),包括冠心病、脑血管疾病和外周动脉疾病，是2型糖尿病患者死亡和残疾的主要原因。2型糖尿病合并多种危险因素或者合并冠心病、心力衰竭等疾病时，应如何选择治疗药物呢？许多新的降糖药物已被证明对心血管和肾脏保护有效。日前，我国台湾心脏病学会发布了专家共识，我们选择重点内容介绍如下，供大家参考。糖尿病合并多种危险因素糖尿病患者常合并高血压、血脂异常、肥胖和慢性肾脏病(CKD)等多种危险因素,这些危险因素进一步增加了心血管疾病发病风险。对于这些患者，HbAlc目标为7%。二甲双眼可作为一线治疗药物；需要联合治疗者，可选择二甲双胭+SGE-2抑制剂。SGLT-2抑

15、制剂可降低有危险因素患者的复合肾脏终点以及心血管死亡/心衰住院终点。基于REWIND试验和荟萃分析结果，建议将GLP-I受体激动剂作为首选的三线药物,但仅应选择证实有效的药物；下一个药物建议为睡哩烷二酮类(TZD),例如吐格列酮；DPP-4抑制剂对MACE具有中性的作用，可作为第三选择。磺服类（SU）、格列奈类和-葡萄糖甘酶抑制剂（AGD是最后的选择。表1糖尿病合并多种危险因素患者的血糖管理TargetHbA1c7%MonotherapyMetforminDualtherapyMetformin+SGLT-2iTripletherapyFirstchoiceMetformin+SGLT-2i+GLP-1RAaSecondchoiceMetformin+SGLT-2i+TZDbThirdchoiceMetformin+SGLT-2i+DPP-4iFourthchoiceMetformin+SGLT-2i+SUorglinideorAGIInsulintherapyBasalinsulinorpremixedinsulinorbasalbolusinsulin,plusoralagentsAGI=alpha-glucosidaseinhibitor；DPP-4i=dipeptidylpeptidase4inhibitor；GLP