细胞培养实验用品准备方案.docx

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1、细胞培养实验用品准备方案1 .种类：1.1. 细胞培养实验用品均为无菌，除了玻璃容器与PaSteUrPiPet外，其它均为塑料无菌制品。1.2. TC级培养盘表面均有coating高分子物质以让细胞吸附，培养容器种类有Tflask,plates,dishes,rollerbottle依实验需要使用。1.3. plasticsterilepipet:1ml,2ml,5ml,10ml,25ml1.4. 塑料离心管：15ml,50ml,均有2种不同材质，*polypropylene(PP)为不透明材质，polystyrene(PS)为透明材质，可依实验需要而选择适合材质之离心管。1.5. glass

2、pastuerpipet:9inch,用以抽掉废弃培养液等。1.6. 玻璃血清瓶(PyreXorDuranglassware)：100ml,250ml,500ml,1000ml2 .清洗：2.1. 新购玻璃血清瓶先以0.10.05NHCl浸泡数小时，洗净后才开始使用。2.2. 用过之玻璃血清瓶，以高压蒸汽灭菌，洗净后分别用一次与二次去离子水冲洗干净，勿加清洁剂清洗。3 .灭菌：3.1. 实验用玻璃血清瓶以铝箔纸包覆瓶盖，高压蒸汽灭菌121C,151b,20分钟，置于oven中烘干O3.2. 实验用玻璃PaSteUrPiPet以干热灭菌170,4小时。3.3. 液体或是固体废弃物可用10%hyp

3、ochloride溶液(次氯酸，即漂白水)或是蒸汽高压灭菌121,151b,20分钟处理。无菌室的灭菌：1 .定期打扫无菌室：每周打扫一次，先用自来水拖地、擦桌子、超净工作台等，然后用3%。来苏尔或者新洁尔灭或者0.5%过氧乙酸擦拭。2 .CO2孵箱(培养箱)灭菌：先用3%。新洁尔灭擦拭，然后用75%酒精擦拭或者0.5%过氧乙酸，再用紫外灯照射3 .实验前灭菌：打开紫外灯、三氧杀菌机、空气净化器系统各20-30分钟4 .实验后灭菌：用75%酒精(3%。新洁尔灭)擦拭超净台、边台、倒置显微镜的载物台。实验人员的无菌准备：1 .肥皂洗手。2 .穿好隔离衣、带好隔离帽、口罩、放好拖鞋3 .用75%酒

4、精棉球擦净双手。无菌操作的演示：1 .凡是带入超净工作台内的酒精、PBS、培养基、胰蛋白酶的瓶子均要用75%酒精擦拭瓶子的外表面2 .靠近酒精灯火焰操作。3 .器皿使用前必须过火灭菌4 .继续使用的器皿（如瓶盖、滴管）要放在高处，使用时仍要过火。5 .各种操作要靠近酒精灯，动作要轻、准确，不能乱碰。如吸管不能碰到废液缸。6 .吸取两种以上的使用液时要注意更换吸管，防止交叉污染。器械的清洗和消毒玻璃器械洗消：一、新的玻璃器皿的洗消：1 .自来水刷洗，除去灰尘。2 .烘干、泡盐酸：烤箱中烘干，然后再浸入5%稀盐酸中12小时以除去脏物、铅、碎等物。3 .刷洗、烘干：12小时后立即用自来水冲洗，再用洗

5、涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。4 .泡酸、清洗：用清洁液（重格酸钾120g：浓硫酸200ml：蒸偏水IOOOmD浸泡12小时，然后从酸缸内捞出器JnI用自来水冲洗15次，最后蒸馀水冲洗3-5次和用双蒸水过3次。5 .烘干、包装：洗干净后先烘干，然后用牛皮纸（油光纸）包装。6 .高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内盖好盖子，打开开关和安全阀，当蒸气成直线上升时，关闭安全阀，当指针指向15磅时，维持20-30分钟。7 .高压消毒后烘干二、旧的玻璃器皿的洗消：1 .刷洗、烘干：使用过的玻璃器皿可直接泡入来苏尔液或洗涤剂溶液中，泡过来苏尔溶液（洗涤剂）的器皿要用清水刷洗干净，然后烘干。2 .泡酸、

6、清洗：烘干后泡入清洁液（酸液），12小时后从酸缸内捞出器皿立即用自来水冲洗（避免蛋白质干涸后粘附于玻璃上难以清洗），再用蒸馈水冲洗3次。3 .烘干、包装：洗干净的器皿烘干后取出用牛皮纸（油光纸）等包装，以便于消毒储存及防止灰尘和再次被污染。4 .高压消毒：包装好的器皿装入高压锅内，盖好盖子，打开开关和安全阀，随着温度的上升安全阀冒出蒸气，当蒸气成直线冒出35分钟后，关闭安全阀，气压表指数随之上升，当指针指向15磅时，调节电开关维持20-30分钟即可。（玻璃培养瓶消毒前可将胶帽轻轻盖上）5 .烘干备用：因为高压消毒后器皿会被蒸气打湿，所以要放入烤箱内烘干备用。金属器械洗消：金属器InI不能泡酸，

7、洗消时可先用洗涤剂刷洗，后用自来水冲干净，然后用75%酒精擦拭，再用自来水，然后用蒸偏水冲洗，再烘干或空气中晾干。放入铝制盒内包装好在高压锅内15磅高压（30分钟）消毒，再烘干备用。橡胶和塑料：橡胶和制品通常处理方法是：先用洗涤剂洗刷干净，再分别用自来水和蒸储水冲干净，再用烤箱烘干，然后根据不同品质进行如下的处理程序：1 .针式滤器帽不能泡酸液,用NaOH泡6-12小时,或者煮沸20分钟,在包装之前要装好滤膜两张，安装滤膜时注意光面朝上（凹向上），然后将螺旋稍微拧松一些，放入铝盒中在高压锅内15磅30分钟消毒，再烘干备用。注意在超净台内取出使用时应该立即将螺旋旋紧。2 .胶塞烘干后用2%氢氧化

8、钠溶液煮沸30分钟（用过的胶塞只要用沸水处理30分钟）,自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸馈水，三蒸水洗净，烘干。最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。3 .胶帽，离心管帽烘干后只能在2%氢氧化钠溶液中浸泡6-12小时（切记时间不能过长），自来水洗净，烘干。然后再泡入盐酸液30分钟，再用自来水，蒸播水，三蒸水洗净，烘干。最后装入铝盒内高压消毒，烘干备用。4 .胶头可用75%酒精浸泡5分钟，然后紫外照射后使用即可。5 .塑料培养瓶，培养板，冻存管：6 .其他消毒方法：有的物品既不能干燥消毒，又不能蒸气消毒，可用70%酒精浸泡消毒。塑料培养皿打开盖子，放在超净台台面上，直接暴露

9、在紫外线下消毒。也可用氧化乙烯消毒塑料制品，消毒后需要用23周时间洗除残留的氧化乙烯。用20000-IOOOOOrad的r射线消毒塑料制品效果最好。为了防止清洗器材已消毒与末消毒发生混淆，可在纸包装后，用密写墨水作好标记。其法即用沾水笔或毛笔沾以密写墨水，在包装纸上作一记号，平时这种墨水不带痕迹，一经高温，即出现字迹，从而可以判定它们是否消毒。密写墨水的配制：氯化钻(CoCI26H2o)2g,30%盐酸10ml,蒸储水88ml0注意事项：1 .严格执行高压锅的操作规程：高压消毒时，先检查锅内是否有蒸僧水，以防高压时烧干，水不能过多因为其将使空气流畅受阻，会降低高压消毒效果。检查安全阀是否通畅，以防高压时爆炸。2 .安装滤膜时注意光而朝上：注意滤膜光滑一面是正面，要朝上，否则起不到过滤的作用。3 .注意人体的防护和器皿的完全浸泡：A.泡酸时要戴耐酸手套，防止酸液溅起伤害人体。B.从酸缸内捞取器皿时防止酸液溅到地面，会腐蚀地面。C.器皿浸入酸液中要完全，不能留有气泡，以防止泡酸不彻底。