妇幼保健院PCR实验室可行性报告及运行预测分析.docx

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1、市妇幼保健院PCR实验室可行性报告及运行预测分析市妇幼保健院位于市区*号，是一所集医疗、预防、保健、康复教学为一体妇幼保健专科医院，占地3300平方米，建有门诊楼、病房楼。我院开放床位*张，现有职工*人。设有内科、外科、妇科、产科、儿科、乳腺科、眼科、耳鼻喉科、口腔科、皮肤科、肛肠科、不孕症科、近20个临床科室,其中妇科、产科、儿科是重点科室。我院多次荣获省地卫生先进单位，市级文明单位、市级优质服务单位、市级“三八”红旗集体、获联合国儿童基金会、世界卫生组织、卫生部“爱婴医院”光荣称号，全国三八红旗集体称号。市妇幼保健院奉行团结、友爱、勤奋、高昂之精神。一流管理、一流技术、一流服务为广大妇女儿

2、童的身心健康作出贡献。PCR临床基因扩增实验室简介聚合酶链反应(POIymeraSeChainreaCtion,PCR)技术自1983年问世以来，因为其对基因或特定核酸序列在短时间内的极大的扩增效率，已在感染性疾病、肿瘤、遗传病、寄生虫病、法医学、动植物和考古等的诊断和研究中得到了广泛的应用，并在某些方面成为无可替代的检测技术。PCR用于疾病的临床诊断，使人们拥有了从对蛋白分子的表型的认识进一步深入到了遗传物质核酸分子的探索的有力工具，也使临床检验诊断学科中的临床分子诊断这一分支得到了飞速发展。PCR技术获得了诺贝尔奖，在临床检验中，该技术有严格的质量保证程序并在临床分子诊断中已展现了巨大的应

3、用价值。PCR技术有着无可比拟的优点，它对环境因素有较高的要求，要求建立规范化的PCR实验室，并且严格地遵循里面的规章制度。关于建立PCR实验室PCR实验室又叫基因扩增实验室，是采用PCR技术应用于临床基因诊断的工作地方。建立规范化的PCR实验室的必要性主要有以下几个方面：1、PCR实验室技术验收和规范化的实验室管理是PCR技术本身需要，也是在临床上顺利应用该技术前提。由于PCR技术对所检验的核酸模板进行大量扩增，容易出现实验室污染导致临床检测样本假阳性结果，如果这些结果当成临床结果或者一个重大发现去报告或者发表，这必然会造成重大的医疗事故和难以挽回的后果，最严重的甚至会影响社会稳定。2、PC

4、R实验室的建立与技术验收，一方面可以体现出医院在同行业中的高端形象，利用分子核酸检测项目的开展为儿科、妇产科等其他科室的快速发展提供强大的技术支撑，并在区域内起到了一个很好的领头羊及示范作用；另外一方面在医院评审与级别评定中能起到加分的作用。3、经过技术验收后的PCR实验室可以开展许多项目，如HPV-DNA、耳聋基因检测、性病三项的检测、HBV-DNA.单纯疱疹病毒、B族链球菌、结核杆菌的DNA检测等等项目。从方法学上，PCR技术操作简便，出报告时间短，给医院节省人力与时间成本；从经济效益上，会给医院与科室带来非常可观经济收益。PCR实验室的具体分区规划及其设备配置对于临床PCR实验室的分区及

5、其配置，按照卫生部颁发的临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发【2002】10号）中作了明确规定，并且卫生临床检验中心发出的配套文件临床基因扩增检验实验室工作规范（卫检字20028号）又对各区的功能及注意事项作了阐述。PCR实验室可根据医院开展的项目来把PCR实验室规划成三区还是四区（如用实时荧光PCR,则只需3个区；如需要杂交的要分4个区）。一般较为理想的PCR实验室应该符合各自独立，不产生空气流通，各区设计有缓冲间，仪器设备专区专用等要求。PCR实验室可开展的项目很多，可以分为病原微生物检测、生殖遗传、分子病理、个体化用药/代谢基因检测四个类别，我院检验科已建成PCR实验室，根据医院现

6、状及病人分布情况，下面对医院热点项目进行效益分析及项目申请。二、项目详细情况1 .乙肝病毒核酸检测项目背景及意义：乙肝病毒（HBV）是乙型肝炎的病原体，它是一种DNA病毒，在生物学上它是嗜肝DNA病毒科家族种的一员。这种病毒除了对具体的器官具有特异性，对寄主也同样有特殊要求，它通常只对人和猩猩有易感性。乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（HBV）感染所致。全世界约有3亿人是HBV携带者而HBV携带者发生肝癌的危险性比非携带者高100倍，约有80%的肝癌患者与乙肝有关。我国是乙肝高发区，约有1.2亿人携带乙肝病毒，其中慢性乙肝患者约3000万例，每年约有35万人死于慢性乙肝相关疾病。围产期的传播是HBV感

7、染的主要方式，约20万的新生儿会遭受HBV阳性母亲的感染而成为HBV慢性携带者。可见HBV已对人类的健康构成了巨大的威胁。HBV感染是全球性公共卫生问题，据估计全世界HBV携带者达3.5亿人之多。中国作为乙型肝炎的高流行区，其中大约有1.2亿人长期带有乙型肝炎病毒(乙肝病毒携带者)，人群中大约有2000万人是慢性乙型肝炎者，占全球HBV表面抗原(hepatitisBvirussurfaceantigen,HBsAg)总携带率的近50%,其中60%的人受过HBV的感染，在某些人群中甚至高达79%,8%-10%的人为HBSAg携带者。目前,患慢性乙型肝炎的病人约为I(X)O万人，近年发病率约为0.

8、158%。此外，患慢性肝炎的病人中约有80%以上为慢性乙型肝炎患者，而受HBV慢性感染的人群罹患原发性肝细胞癌(hepatoce1.1.u1.arcarcinoma,HCO的相对危险性至少增加300倍。HBV感染后临床表现呈多样性，可表现为重症肝炎、急性肝炎、慢性肝炎或无症状携带者，其中部分慢性肝炎演变成肝硬化或肝癌。所以，乙型肝炎是我国严重的公共卫生问题，在一定程度上制约着我国经济的发展和国民健康素质的提高。据世界卫生组织1983年报告，全世界的原发性HCC中大约80%都与HBV慢性感染相关。中国也是肝癌高发区，因而对HBV的检测与防治已成为中国健康与传染病控制中的首要问题。乙肝定量检测有如

9、下意义：可以了解患者体内HBV的复制情况和传染性的强弱，这是因为单凭大、小三阳并不能准确测定HBV在体内的含量、复制情况和传染性强弱，HBVDNA是HBV感染最直接、特异性强和灵敏性高的指标。HBVDNA定量检测结果浓度越高，说明体内病毒含量越高，病毒复制越活跃，传染性也越强。HBVDNA定量检测结果浓度很低或者为零，说明病毒复制缓慢甚至停止，传染性很低。对慢性乙型肝炎的辅助诊断。对于隐匿性HBV感染：血清HBsAg检测阴性,但外周血或肝组织中可检测到HBVDNAo这是因为乙肝病毒S区变异，不能编码产生HBsAgoHBeAg阴性的慢性乙型肝炎患者(HBeAg(-)/抗-Hbe(+),这是因为乙

10、肝病毒前C区变异，HBeAg表达下调或不表达。用于确定是否开展抗病毒治疗及适宜抗病毒治疗方案的选择。用于抗病毒治疗的疗效评估，考察某种药物治疗乙肝是否有效，首先要观察该药对HBV-DNA的抑制作用。HBVDNA载量的动态变化在临床上可以为用药的剂量、用药时间、是否需要联合用药以及用药的效果等提供重要的参考依据，是评价抗病毒或免疫增强药物疗效的最客观的指标。治疗前、治疗中和治疗后均应定期进行检查（防治指南推荐：每3-6个月检测1次）。2015年3月世界卫生组织推荐的慢性乙肝患者管理流程中明确表示HBVDNA检测应贯穿整个管理流程。2 .丙肝病毒核酸检测项目背景及意义：据世界卫生组织（WHo）公布

11、2017年全球肝炎报告，2015年全球约有7100万人染有丙肝病毒，中国约有IOoo万丙肝感染者。目前，WHO已将病毒性肝炎列为全球公共卫生面临的重要威胁之一。中国卫健委法定传染病报告显示：2018年中国丙肝发病人数22万，发病率为15.79/10万。据中国疾控中心（CDC）数据，我国丙肝患者呈地区分布，大部分分布在偏远农村，患者主动就诊不足20%。全球肝炎防治一号课题，加强检测是防治关键2016年，WHO提出到2030年消除肝炎危害的目标：即在2015年数据基础上将新发病毒性肝炎感染减少90%,丙肝治疗覆盖80%的患者，并将病毒性肝炎引起的死亡数减少65%。而全球只有20%的丙肝感染者得到了

12、检测和诊断,7%开始治疗，中国丙肝患者仅有17.7%得到检测，1.3%得到有效治疗，远低于世界平均水平。2030目标已成为全球肝病防治领域的“一号课题工丙肝检测丙肝治疗2030目标2015基础2017中国图，WHo2030目标以及世界平均和中国现有水平WHOMarcBu1.terys博士表示：“加强肝炎检测是加强挽救生命的肝炎治疗的关键J2017年2月，WHO首次发布了全球慢性病毒性乙型肝炎和丙型肝炎检测指南，为2030目标的实现提供重要工具。丙肝可以治愈，但对实验室检测提出更高要求HCV在患者体内长期地高水平复制，激发免疫清除应答从而损伤肝脏，是其致病机理。临床研究已证明，抑制病毒复制对控制

13、疾病进展非常重要。目前临床治疗慢性丙肝的核心措施，就是抗病毒优化治疗。2017年以来，国家药品监督管理局(NMPA)批准多个国内外丙肝小分子抗病毒药物(DAA),DAA药物仅需1224周治愈90%以上的丙肝感染者。而且，泛基因型DAA药物进入2018版国家基药目录，极大的提升丙肝的治疗可及性。临床治疗的进步，对实验室检测也提出了更高的要求。丙肝抗病毒治疗的目的是清除丙肝病毒，获得疗效，消除或减轻丙肝病毒相关肝损害，阻止进展为肝硬化、失代偿期肝硬化、肝功能衰竭或肝癌，改善患者的长期生存率，提高患者的生活质量。“清除病毒”的含义，是最灵敏PCR方法“检测不出”病毒核酸，以此作为适宜治疗患者选择、确

14、定治疗方案和疗效评价、治疗终点判断关键标志。因此，在临床治疗过程中，准确而敏感地监测患者体内病毒核酸载量的动态变化至关重要。另外，超敏HCVRNA检测在丙肝患者接受透析治疗期间的监测、术前检查等方面有明确的临床意义。国内外指南对HCVRNA检测要求增加目前临床上常采用荧光定量PCR技术可直接检测血清中HCVRNA的载量。荧光定量PCR技术检测HCV-RNA载量具有快速、特异性强、灵敏度高等特点，超灵敏试剂检测结果对HCV感染进行早期诊断、病毒学应答、疗效观察及预后评估、流行病学调查等提供科学依据。北美肝病学会(AAS1.D)和欧洲肝病研究学会(EAS1.)在其最新颁布的HCV临床指南中，均推荐

15、使用“超敏感、特异和宽线性范围”的实时PCR技术测定病毒核酸载量。我国丙型肝炎病毒核糖核酸测定试剂技术审查指导原则也将HCV的灵敏度要求提升到了50IUm1.,同时要求内标全程参与核酸提取和扩增。丙型肝炎病毒检测结果转阴患者血液透析管理方案要求HCVRNA检测灵敏度V15IUm1.3 .B族链球菌基因检测开展的项目背景及意义：在20世纪70年代，GBS已被证实是围产期母婴感染的常见致病菌之一，在围产医学中有不可忽视的地位，同时它也是婴幼儿脑膜炎和败血症最常见的原因。母婴传播是主要新生儿感染的主要途径。美国新生儿早发型GBS感染率90年代初约为1.52,由于其制定分娩GBS预防性筛查，2008年

16、其发生率下降至0.34%o-0.37%o,2010年版美国疾控中心围产期GBS疾病预防指南：在妊娠第3537周取孕妇直肠阴道分泌物进行GBS检测，并对阳性和高危孕妇采用分娩期预防性抗生素（静脉注射）进行干预（临床有效率约为90%）。目前，GBS感染的预防也引起了我国围产界的高度重视，中华医学会起草的2012版孕前和孕期保健指南中，GBS正式被收纳为备查项目。指南表明：外观良好的新生儿、而且母亲需要GBS预防但未进行或进行不充分分娩期预防的；孕周37周或胎膜破裂多8小时，应进行有限的诊断评估，并观察248小时。核酸检测法与传统细菌培养方法相比，PCR可显示出其明显的优势，敏感性为97%,特异性为100%,阳性预测值为100%,阴性预测值为98.8%。通过PCR技术，可以在40-100分钟内得到实验室结果。其中实时定量荧光聚合酶链反应（rea