长沙医学院大学生研究性学习和创新性实验计划项目中期报告.docx

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1、长沙医学院大学生研究性学习和创新性实验计划项目中期报告项目名称：紫杉醇对肺纤维化小鼠血浆MlP-1一、MCPT含量的影响项目编号：长医教201961号-059学生姓名：M院（系）：口腔医学院班级：20级本科口腔5班指导老师：李萍、欧阳四新项目科类：医生填写日期：2023年4月1日填写说明一、中期检查要按照大学生研究性学习和创新性实验计划指南的要求认真填写，填写内容必须实事求是，表达明确严谨。二、格式要求：表格中的字体为小四号仿宋体，1.5倍行距；需签字部分由相关人员以黑色钢笔或水笔签名。均用A4纸双面打印，于左侧装订成册。1 .计划执行情况概述（包括哪些内容作了必要的调整和变动，哪些内容未按计

2、划进行，原因何在）1、调整和变动：因为部分原因，不能按照最开始的小鼠数量计划执行，以及实验周期循环受到限制。原计划的28天全部摘除小鼠眼球取血法，换为第四周取血保存后利用试剂盒检测，小鼠则由40只变为20只（模拟实验组不算）。2、为了更方便取样，以及照顾小鼠，由原本的实验室取40只SPF级雄性小鼠适应性喂养1周后，变更为了取20只SPF级雄性小鼠喂养，减少了小鼠的数量，分组仍然为随机分成5个组：正常组、模型组、紫杉醇低、中、高剂量组。正常组保持原来计划，假手术5%苯巴比妥钠腹腔注射将小鼠麻醉后，作颈中切口，逐层分离暴露气管。缝合皮肤，置于动物室喂养。2 .计划主要进展和所取得的成果（主要解决的

3、关键技术与创新点，主要技术与计划完成情况，包括代表性成果介绍，说明其水平和影响，并简要阐述其科学意义或应用前景等。视情提供必要的国内外动态和研究成果的比较，必要的参考文献出处等）1、解决的关键技术与创新点：本课题初次探讨紫杉醇对肺纤维化小鼠血浆中MIP-I,MCP-I的影响，为紫杉醇在肺纤维化的应用上提供更进一步的机制研究，为肺纤维化的临床治疗提供实验基础。2、计划完成情况，实验过程及部分成果：目前为止小鼠正常组存活几率较高，在模拟组里面，紫杉醇中及低剂量下，小鼠存活率更高，已经采取部分小鼠眼球摘除法取血，保存至96孔酶链板，放置恒温箱，运用双抗夹心酶链免疫测定试剂盒（BiOSoUrCeInt

4、ernational,USA）保存测定。目前根据已有实验数据已于医药卫生发表论文紫杉醇对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠血浆MIPTa、MCP-I和TGF-1含量的影响一篇。3、国内外论文动态比较：肺纤维化（pulmonaryfibrosis,PF）是呼吸系统疾病中的一个重要的病理改变，是指由多种原因引起的一组异质性下呼吸道弥漫性炎症性疾病1症状出现后5年存活率为30%50%2o肺纤维化严重影响人体呼吸功能，主要表现为干咳、进行性呼吸困难（自觉气不够用），且随着病情和肺部损伤的加重，患者呼吸功能不断恶化。其中，中老年发病病因不明，胸部影响和组织病理学表现为普通型间质性肺炎的慢性进行性肺纤维化疾病，称

5、为特发性纤维（IPF）o特发性肺纤维化发病率和死亡率逐年增加，诊断后的平均生存期仅2.8年，死亡率高于大多数肿瘤，被称为一种“类肿瘤疾病:目前，针对肺纤维化机制的研究大多集中在对效应细胞、细胞因子及其相关基因调控的研究3。以紫杉醉为代表的抗增殖药物己成为预防支架内再狭窄的研究热点。有研究表明4,在肺纤维化的过程中，在某些致炎因子的作用下，肺内炎性细胞的激活、释放趋化因子是肺泡炎形成的重要起始环节。趋化因子可分为C-C家族和CXC家族。单核细胞炎性蛋白-IQ(MIP-Ia),巨噬细胞趋化蛋白T(MCPT)是C-C家族成员，它们对免疫/炎症反应细胞有明显的趋化活性,并能调节效应细胞功能5,是调控肺

6、损伤、肺的免疫功能和与之有关的细胞因子网络的重要成员6。新近研究发现BLM肺纤维化动物模型肺内有大量的嗜酸性粒细胞存在，它们与肺纤维化的预后有关7。我们也观察到嗜酸性粒细胞在肺纤维化的早期渗出并与肺纤维化损伤的发展相平行。从相关性分析可以看出MIP-Ia.MCP-I与嗜酸性粒细胞呈显著正相关,提示它们之间存在某种联系。体外试验表明在嗜酸性粒细胞参与的肺疾病中，MIPTQ是关键介质，它能促进嗜酸性粒细胞的迁移8MlPTQ和MCP-I在肺纤维化早期便开始升高，且与疾病的严重程度相平行，这提示血浆MPTa和MCP-I可以成为监测肺纤维化临床发生、发展过程的早期、灵敏的指标。肺纤维化危害大，病死率高，

7、确诊后平均生存率为3-5年。目前，临床上传统的治疗药物主要有糖皮质激素和免疫抑制剂等，但这些方法治疗效果有限，特异性差且副作用较大。近年来有报道某些中药成分如丹参等也有一定的对抗PF作用，但尚未寻找到疗效更佳的抗肺纤维药物。紫杉醇和其它紫杉烷类化合物主要存在于红豆杉科植物，紫杉醇具广谱的抗肿瘤活性，有研究表明，紫杉醇能通过抑制血小板源性生长因子对血管平滑肌的刺激，抑制由此产生的平滑肌细胞增殖与迁移。在给予肺纤维化大鼠红豆杉提取物紫杉醇溶液后，在肺纤维化的早期，肺组织I型前胶原蛋白含量无显著变化，而在中晚期紫杉醇各组与模型组肺组织Proal(I)含量比较，差异均有统计学意义(P005)8。紫杉醇

8、提取物作用于博莱霉素A5所致的大鼠肺纤维化,可以调节肺纤维化大鼠肺组织I型前胶原蛋白、In型前胶原蛋白含量，进而改善肺组织细胞外基质过度沉积状态以防止纤维化的形成。同时研究表明，紫杉醇脂质体可通过降低肺间质纤维化大鼠肺组织TGF-1含量，起到抑制细胞外基质的合成和沉积，促进基质蛋白受体的产生，减少基质降解酶以及增加降解抑制剂的合成，进而抑制肺组织弹性纤维钙化。4、参考文献：1候显明，于润江.间质性肺病学M.北京：人民卫生出版社，2003：40.2RoglianiP,MuraM,AssuntaPorrettaM,etal.Newperspec-tivesinthetreatmentofidiop

9、athicpulmonaryfibrosisJ.TherAdvRespirDis,2008,2(2):75-93.3徐晓峰，王辰，代华平，等.大鼠肺纤维化过程中转化生长因子Bl及其受体的同相表达J.中华结核和呼吸杂志，2002,25(9):550-551.4肺纤维化大鼠血浆MIP-Ia.MCP-I水平动态变化的观察J.李学军,崔社怀,韩根成.解放军医学杂志.2001(10).5 TheclinicalsignificanceofHRCTinevaluationofpatientswithrheumatoidarthritis-associatedinterstitiallungdisease:

10、areportfromChinaJ.Yu-QiongZou,Ya-SongLi,Xiao-NanDing,Zhen-HuaYing.RheumatologyInternational.2012(3).6 JcrchelS,KaufholdI,Schuchardt,Letal.HostimmuneresponsesafterhypoxicreactivationofIFN-EinducedpersistentChlamydiatrachomatisinfection.FrontiersinCellular&InfectionMicrobiology,2014,4:43.7 HashimotoS,

11、NakayamaT,GonYetal.Correlationofplasmamonocytechemoattractantprotein-1(MCP-I)andmonocyteinflam-matoryprotein-l(MIP-la)levelswithdiseaseactivityandclinicalcourseofsarcoidosis.JExpMed,1998,188(6):157.8 BucknerLR,LewisME,GreeneSJ,etal.Chlamydiatrachomatis,infectionresultsinamodestpro-infIammatorycytoki

12、neresponseandadecreaseinTcellchemokinesecretioninhumanpolarizedendocervicalepithelialcells.Cytokine,2013,63:151.9 紫杉静对牛血清白蛋白诱导大鼠肝纤维化的抑制作用及机制J.边虹铮,刘丽芳.中国普通外科杂志.2018(08).3.存在的问题、纵深研究的建议及其他需要说明的情况1、存在的问题：因为部分原因，没有办法按照最开始的小鼠数量计划执行,以及实验周期循环受到限制。原计划的28天全部摘除小鼠眼球取血法，换为第四周眼球取血保存后利用试剂盒检测，以及试剂盒需要熟悉说明书及操作方法步骤。2

13、、建议：已经顺利购买到鼠MIPTa多克隆抗体，96孔酶链板以及双抗夹心酶链免疫测定试剂盒(BioSoUrCeInternational,USA),并已阅读按试剂盒说明书，准备进行操作。在进行后面眼球采血测定数值的时候，可以先选择正常组的检测，作为一个参考值，后面的波动范围作为比较数值。3、其他情况：需要后期严格的统计学数据处理：各组数据均以X-s表示，采用t检验。采用SPSS21.O统计软件进行数据分析，结果用中位数或四分位数间距和XS表示，多组间比较采用单因素方差分析，若不符合参数方法应用条件，则先数据转换后再进行相应的方差分析，核心论文发表等还在分析中。4.论文目录（论文注明：刊物名称，时间，卷（期），起止页码）紫杉醇对博来霉素诱导的肺纤维化小鼠血浆MIP-I、MCP-I和TGF-1含量的影响，医药卫生，2022.643-455.经费决算表（金额单位：元）支出类别支出金额及说明普刊论文版面费2700元博来霉素以及紫杉醇药物1000元96孔酶链板500元鼠MIP-IQ多克隆抗体1000元双抗夹心酶链免疫测定试剂盒800元合计6000元指导老师意见：签名：年月日6.院（系）意见院系负责人签名（公章）：年月H7.教务处审核意见单位公章：年月08.学校审核意见单位公章：年月B