抗核抗体检测试剂注册技术审查指导原则（2020年 ）.docx

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1、抗核抗体检测试剂注册技术审查指导原则本指导原则旨在指导注册申请人对抗核抗体 (Antinuclear antibody, ANA)检测试剂注册申报资料的准 备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参 考。本指导原则是对抗核抗体检测试剂的一般要求，申请人 应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用， 需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性 对注册申报资料的内容进行充实和细化。本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导性文件， 但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执 行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用， 但需要提供详细的研究资料和验证资

2、料，相关人员应在遵循 相关法规的前提下使用本指导原则。本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水 平下制定的，随着法规、标准的不断完善和科学技术的不断 发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。一、适用范围抗核抗体作为自身免疫病(autoimmune diseases, AID) 重要的生物学标志，是临床应用中最广泛、最基础的一组自 身抗体。临床常见于系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus, SLE)、干燥综合征、系统性硬化病、混合结 缔组织病及多发性肌炎/皮肌炎等系统性(非器官特异性)AID患者。同时，ANA可见于器官特异性AID患者，如自 身免疫性肝病

3、、自身免疫性甲状腺炎等。除此之外，ANA也 可见于慢性感染性疾病及健康人群中。细胞核是ANA靶抗原所在的最重要的结构部位，因此 传统意义上的ANA是指抗细胞核抗原成分的自身抗体总称。 随着检测技术的改进，尤其是培养细胞抗原基质(如HEp-2 细胞)的广泛应用，ANA的定义扩展到以真核细胞各种成分 (包括细胞核、细胞浆、细胞骨架蛋白及细胞分裂周期蛋白 等)为靶抗原的自身抗体的总称。目前，ANA检测分成ANA总抗体的检测和针对靶抗原 的特异性自身抗体检测。其中，ANA总抗体的检测方法主要 包括间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence, IIF) 酶联免疫吸附法(EnZ

4、yme-Linked ImmunoSorbent Assay, E LlSA)等。ANA特异性自身抗体检测方法主要包括ELISA 法、线性免疫印迹法(Iine immunoassay, LIA)化学发光 免疫分析法(ChemilUmineSCenCe immunoassay, CLIA) 等。本指导原则所述抗核抗体检测试剂是指利用间接免疫 荧光法、酶联免疫吸附法、化学发光法、线性免疫印迹法等 基于抗原抗体反应原理，针对人血清、血浆样本中总抗核抗 体或针对靶抗原的特异性自身抗体进行体外定性和/或半定 量和/或定量检测的试剂。同时，本指导原则是针对抗核抗体 检测试剂的通用指导原则，申请人应结合具体

5、产品的特点进 行申报。如果申报产品有具体指导原则，应参照执行。本指导原则适用于进行注册申请和相关许可事项变更 的产品。依据体外诊断试剂注册管理办法(国家食品药 品监督管理总局令第5号)(以下简称办法)、食品药品 监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知（食药 监械管（2013） 242号），抗核抗体及针对靶抗原的特异性自 身抗体检测试剂属于自身抗体检测试剂，管理类别为类6 840 o二、注册申报资料要求注册申报资料的撰写应符合办法和关于公布体外 诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告 （国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）（以下 简称44号公告）的相关要求。（一）综述

6、资料综述资料主要包括产品预期用途、临床适应症背景情 况、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评 价以及同类产品上市情况介绍等内容。其中，需注意以下内 容：L临床适应症背景情况应对申报的每一个抗核抗体具体项目进行详细的描述， 分别阐述每个靶抗原特异性自身抗体的具体特点及相应临 床适应症信息，包括适应症的发生率、适用人群等。说明具 体的临床意义，例如：是否用于辅助诊断、鉴别诊断、分型 及疾病活动性监测等。介绍相关的临床或实验室诊断方法。2 ,同类产品上市情况应着重从技术方法、主要原材料、检测限、阳性判断值 或参考区间等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准 同类产品之间的主要区别。3 .

7、关于抗DNA抗体的几点考虑3.1 如产品声称用于高亲和力抗ds-DNA抗体检测，应描 述如何证明产品仅针对高亲和力抗体进行检测。3.2 如产品包括对抗单链DNA （ss-DNA）抗体的检测， 并同时声称具备检测抗ds-DNA抗体的能力，应说明检测结 果需结合抗dsDNA抗体检测结果进行解释，并对解释时的 难点进行分析。（二）主要原材料的研究资料（如需提供）若主要原材料为申请人自己生产，其生产工艺必须稳 定；如主要原材料源于外购，应提供的资料包括：供应商提 供的质量标准、出厂检定报告以及申请人对到货后主要原材 料的质量检验资料。L抗原应详述抗原的名称及生物学来源，如为外购抗原，则应 提供外购方名

8、称，外购方出具的抗原性能指标及检验证书， 详述申请人对该抗原技术指标的要求以及申请人确定该抗 原作为主要原材料的依据。如为企业自制抗原，对于天然抗 原，则应提供抗原提取及纯化、鉴定等实验过程予以详述； 对于重组抗原，则应提交有关特定基因选择、基因序列、质 粒转化、抗原表达及抗原纯化、鉴定等详细内容。2 .其他主要原辅料应提交各种原辅料的选择及验证资料，如二抗、工具酶、 固相载体、化学发光剂、反应缓冲液等，如为外购，应详述 每一原辅料的外购方名称，提交外购方出具的每一原辅料性 能指标及检验证书，详述申请人对每一原辅料技术指标的要 求以及申请人确定该原辅料作为主要原辅料的依据。3 .校准品、质控品

9、（如有）应包括原料选择、制备、定值过程及试验资料。校准品 应溯源至现行的国家或国际参考品（如有）。质控品应至少 包含阴性和阳性两个水平。阳性质控品可选择临床阳性样 本，阴性质控品可选择临床阴性样本或缓冲溶液等。4 .企业内部参考品如申报产品有相应的国家参考品，则企业内部参考品应 参考国家参考品的项目设置，且不低于国家参考品要求。若 无国家参考品，申请人应根据产品性能验证的实际情况自行 设定企业内部参考品。应提交企业内部参考品的原料选择、制备、阴阳性及浓 度/滴度确认等相关验证资料。说明参考品阴阳性及浓度/滴 度确认的方法或试剂（建议采用国内已上市的、临床上普遍 认为质量较好的同类试剂）。浓度确

10、认应采用国家或国际标 准品进行溯源（如有）。企业内部参考品的基质应与待测样 本相同。针对多项目联合检测试剂，应分别对每一个靶抗原 特异性自身抗体项目进行研究。对于IIF-ANA检测试剂，企业内部参考品至少应包括： 阴性参考品、阳性参考品和精密度参考品。其中，阳性参考 品应充分考虑可报告荧光模型的验证（至少包括均质型、胞 浆颗粒型、分裂期细胞着丝点型等三种荧光模型），可选择 多份确认为阳性的临床样本，并设置不同滴度水平。阴性参 考品应考虑检测特异性的评价，适当纳入其他AlD特异性自 身抗体阳性样本。精密度参考品应至少设置一个弱阳性水平 参考品。（三）主要生产工艺及反应体系的研究资料（如需提供）

11、生产工艺主要包括：各组分制备工艺的研究，包括试剂 的配方及工艺关键参数的确定依据等。反应体系主要包括样 本采集及处理、样本要求、样本用量、试剂用量、反应条件 等确定的依据，以及校准方法、质控方法。L主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并简要说 明主要生产工艺的确定依据。2 .主要生产工艺过程的研究资料，每一步生产工艺的确 认资料及试验数据。3 .主要反应体系的研究资料、每一步反应体系的确认资 料及试验数据，包括样本采集及处理、样本要求、样本用量、 试剂用量、反应条件、校准方法（如有）、质控方法等。（四）分析性能评估资料申请人应提交在产品研制或成品验证阶段对试剂盒所 有的分析性能进行研究的资料

12、，对于每项分析性能的研究都 应包括研究目的、实验设计、研究方法、可接受标准、实验 数据、统计方法等详细资料。有关研究背景信息也应在资料 中有所体现，包括实验地点、适用仪器、试剂规格、批号和 临床样本来源等。分析性能评估的实验方法可以参考相关国 内外有关体外诊断产品性能评估的指导原则进行。L检测限申请人可根据实际情况选择合理方法研究拟申报试剂 的检测限。1.1 定性/半定量检测试剂对检测限国家参考品或生产企业提供的参考品进行检 测，浓度高于检测限参考品应检出阳性，浓度低于检测限参 考品应检出阴性，检测限参考品可检出阴性或阳性。L2定量检测试剂建议参照国内相关性能评估文件或EP17-A2文件推荐的

13、定义和设计方案，对申报产品的空白限（LoB）、检出限 （LoD）以及定量限（LOQ）进行合理评估和验证。2 .精密度针对本类产品的精密度评价主要包括以下要求：2.1 对于半定量/定量检测试剂，在可报告浓度范围内， 至少应在接近医学决定水平（CUt-Off值）浓度点以及阳性水 平浓度点进行精密度的评价。对于定性检测试剂，至少应选 择接近cutoff值的样本进行精密度的评价。2.2 合理的精密度评价周期，例如：为期至少20天的连 续检测，每天至少由2人完成不少于2次的完整检测，从而 对批内/批间、日内/日间以及不同操作者之间的精密度进行 综合评价。2.3 对于采用新技术进行的试验，或需要对检测结果

14、进 行主观解释时，申请人应选择不同的实验室进行重复实验以 对室间精密度进行评价。3 .线性范围对于定量或半定量检测的试剂，建议通过检测已知自身 抗体浓度的样本来描述产品测试的线性范围。在产品的设计 研究描述中，建议包含样本类型、准备方法、样本浓度、测 试重复数以及采用的统计方法。同时声明可接受标准，并通 过数据来证实研究结果满足预期要求。研究结果应包含线性 回归斜率和截距的95%置信区间，以及整个线性范围内的偏 差。同时建议研究结果中包含不同水平的期望值和观测值。4 .准确度对于定量检测的试剂，申请人可根据实际情况合理选择 一种或多种方法对试剂进行准确度研究，如：与国家/国际参 考品的相对偏差

15、、方法学比对或回收试验等方法。5 .阳性/阴性参考品符合率对于定性或半定量检测的试剂，如申报产品有相应的国 家参考品，则企业内部阳性/阴性参考品应参考国家参考品的 项目设置。在不低于国家参考品要求的前提下，申请人可以 结合实际情况设置合理的内部阳性/阴性参考品。对于没有国 家参考品的产品，申请人应根据产品性能验证的实际情况自 行设定企业内部参考品，阳性参考品应着重考虑抗体滴度要 求，阴性参考品则主要涉及对分析特异性（交叉反应）的验 证情况。申请人应提供企业内部阳性/阴性参考品的来源、抗体滴 度等信息，并提交详细的验证资料。6 .特异性6.1 交叉反应建议通过检测来自其它自身免疫性疾病患者的临床

16、样 本，来评价试验的特异性，并在提交的申报资料中详述产品 的研究设计和评价结果。6.2 干扰物质6.2.1 内源性干扰对样本中常见的内源性干扰物质进行检测，如甘油三 酯、血红蛋白、胆红素、类风湿因子（RF）、干扰抗体（如 人抗鼠抗体，human anti-mouse antibodies, HAMA）等。建 议对抗核抗体阴性、弱阳性（临界浓度）的临床样本或模拟 添加样本分别进行验证，以确定可接受干扰物质的浓度。622抗凝剂的干扰（如有）如果试剂盒适用样本类型包括血浆样本，应采用各种适 用抗凝剂抗凝的血浆样本分别与血清样本进行对比实验研 究。7 .钩状（Hook）效应需采用高浓度自身抗体阳性血清进行梯度稀释后由低 浓度至高浓度开始检测，每个梯度的稀释液重复35次， 对钩状效应进行合理的