肾病及其生化检测.ppt

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1、前言肾脏是人体的重要器官，肾病在检验科的检测主要是通过生化来完成，通过一系列血清物质的检测，来判断肾功能及其损害情况。我室现在开展的项目主要有:BUN,UA,CREA,CO2,CYSC（最新开展），内生肌酐清除率，24小时尿蛋白 二）肾小球滤过膜的通盘性和滤过面积二）肾小球滤过膜的通盘性和滤过面积 此为肾小球本身的问题。炎症，使管此为肾小球本身的问题。炎症，使管腔狭窄或完全阻塞，使滤过面积减少，腔狭窄或完全阻塞，使滤过面积减少，滤过率减少。滤过率减少。三）肾小球血流量。三）肾小球血流量。流量减少可使滤出减少：剧烈活动、流量减少可使滤出减少：剧烈活动、大失血、缺氧，致交感大失血、缺氧，致交感NN

2、兴奋。兴奋。三）内生肌酐清除率（三）内生肌酐清除率（CCrCCr）体表面积的计算：体表面积的计算：logA(m2)0.425log体重体重kg0.725log身高身高cm2.144参考值：参考值：根据体表面积校正后，根据体表面积校正后，范围为范围为80-120ml/min/1.73m2。临床意义临床意义 尿素是蛋白质和氨基酸代谢的最终产物。尿素是蛋白质和氨基酸代谢的最终产物。一）一）尿素的代谢过程。尿素的代谢过程。AA AA经脱氨基作用生成氨经脱氨基作用生成氨+CO2+CO2（全身（全身各组织），经血液运至肝脏，加上肠道各组织），经血液运至肝脏，加上肠道吸收的氨一起在肝脏经鸟氨酸循环而生吸收的

3、氨一起在肝脏经鸟氨酸循环而生成尿素。成尿素。三）临床意义BUN为尿毒症诊断指标之一。为尿毒症诊断指标之一。肾功能不全的代偿期肾功能不全的代偿期BUN轻度增高（轻度增高（7.0mmol/L），），肾功能衰竭失代偿期，肾功能衰竭失代偿期，BUN中度增高中度增高（17.9-21.4mmol/L；尿毒症时尿毒症时BUN21.4mmol/L，肾小球滤过率与血肌酐、尿素浓度的关系肾小球滤过率与血肌酐、尿素浓度的关系 血肌酐和尿素浓度测定血肌酐和尿素浓度测定血肌酐和尿素浓度测定 尿素的测定方法可分为两大类：尿素的测定方法可分为两大类：1)尿素酶法（直接法）：尿素酶法利尿素酶法（直接法）：尿素酶法利用尿素酶催

4、化尿素水解生成铵盐，铵盐用尿素酶催化尿素水解生成铵盐，铵盐可用纳氏试剂直接显色、酚可用纳氏试剂直接显色、酚-次氯酸盐显次氯酸盐显色或酶偶联反应显色。色或酶偶联反应显色。尿素测定目前多采用尿素酶偶联法：尿素测定目前多采用尿素酶偶联法：2）酚）酚-次氯酸盐显色法：次氯酸盐显色法：尿素酶水解尿素生成氨尿素酶水解尿素生成氨3)纳氏试剂显色法：纳氏试剂显色法：尿素经尿素酶作用后生成氨，氨可尿素经尿素酶作用后生成氨，氨可与纳氏试剂（与纳氏试剂（HgI2.2KI的强碱溶液）作的强碱溶液）作用，生成棕黄色的碘化双汞铵。用，生成棕黄色的碘化双汞铵。二乙酰一肟法（直接法）：二乙酰一肟法（直接法）：二乙酰不稳定，用

5、二乙酰一肟代替，二乙酰不稳定，用二乙酰一肟代替，后者遇酸水解成二乙酰。后者遇酸水解成二乙酰。试剂中加入试剂中加入Fe3+或或Cd2+及及硫氨脲，可提高灵敏度，增加显色硫氨脲，可提高灵敏度，增加显色稳定性，还能消除羟胺的干扰作用。稳定性，还能消除羟胺的干扰作用。提高酸的浓度可增加灵敏度。二乙提高酸的浓度可增加灵敏度。二乙酰一肟与瓜氨酸也有显色。酰一肟与瓜氨酸也有显色。尿素浓度常用尿素中含有的氮来表尿素浓度常用尿素中含有的氮来表示，称为尿素氮。如换算成尿素，可根示，称为尿素氮。如换算成尿素，可根据据60g 尿素含有尿素含有28g氮计算，即氮计算，即1g尿尿素相当于素相当于0.467g尿素氮，或是尿

6、素氮，或是1g尿素尿素氮相当于氮相当于2.14g尿素。尿素。正常参考值：正常参考值：血清尿素氮为血清尿素氮为2.8-7.1 mmol/L，相，相当于尿素当于尿素1.8-6.8 mmol/L。肌酐测定。肌酐测定。1)Jaffe反应法：测定肌酐最常用的反应法：测定肌酐最常用的方法是尿、血清中的肌酐与苦味酸方法是尿、血清中的肌酐与苦味酸盐作用，生成黄红色的苦味酸肌酐盐作用，生成黄红色的苦味酸肌酐复合物。复合物。此法的缺点是此法的缺点是 特异性不高，维生素特异性不高，维生素C、丙酮酸、丙酮、丙酮酸、丙酮、葡萄糖、乙酰醋酸、果糖、氨基马尿酸、葡萄糖、乙酰醋酸、果糖、氨基马尿酸、蛋白质、胍基醋酸酰胺及许多

7、化合物也能蛋白质、胍基醋酸酰胺及许多化合物也能与碱性苦味酸盐生成红色。这些能起反应与碱性苦味酸盐生成红色。这些能起反应的物质称为假肌酐，相当数量的假肌酐存的物质称为假肌酐，相当数量的假肌酐存在于红细胞中。在于红细胞中。为去除假肌酐的影响，现在常用为去除假肌酐的影响，现在常用速率法来测定血肌酐。速率法来测定血肌酐。乙酰乙酸在乙酰乙酸在20s内已与碱性苦内已与碱性苦味酸反应完成，其他多数干扰物则味酸反应完成，其他多数干扰物则在在80s后才与苦味酸有较快的反应，后才与苦味酸有较快的反应，而而20-80s之间主要是肌酐的反应。之间主要是肌酐的反应。因此，血清与苦味酸混合后，分别因此，血清与苦味酸混合后

8、，分别读取读取510nm在在20s及及80s时的吸光时的吸光度检验肌酐浓度度检验肌酐浓度.2）酶联法：）酶联法：此法特异性高，标本不需去蛋白，此法特异性高，标本不需去蛋白，特别适用于自动分析。但工具酶过特别适用于自动分析。但工具酶过多、价格昂贵。多、价格昂贵。正常参考值：血浆肌酐正常参考值：血浆肌酐44-133 mol/L。尿酸测定方法可分为两大类尿酸测定方法可分为两大类 磷钨酸法：是利用在碱性环境中尿酸具磷钨酸法：是利用在碱性环境中尿酸具有还原性，无蛋白血滤液中的尿酸可使有还原性，无蛋白血滤液中的尿酸可使磷钨酸还原生成蓝色的钨蓝，可进行比磷钨酸还原生成蓝色的钨蓝，可进行比色测定，反应如下：色

9、测定，反应如下：尿酸磷钨酸尿酸磷钨酸尿囊素尿囊素CO2+钨蓝钨蓝 此法的不足之处是特异性不高，显色此法的不足之处是特异性不高，显色褪色速率变化不定，灵敏度低。褪色速率变化不定，灵敏度低。尿酸酶法：尿酸酶测定方法可分为三种尿酸酶法：尿酸酶测定方法可分为三种类型：类型：1)紫外分光法：尿酸在紫外分光法：尿酸在282-292nm处有特异吸收峰，当其经尿酸酶作用后，处有特异吸收峰，当其经尿酸酶作用后，产物在此波长范围无吸收峰，测量酶作产物在此波长范围无吸收峰，测量酶作用前后吸光度之差，经标准品、测定样用前后吸光度之差，经标准品、测定样品同时处理，可计算尿酸含量。品同时处理，可计算尿酸含量。该法灵敏度高

10、，特异性强，其它该法灵敏度高，特异性强，其它物质无干扰，可用血清直接测定，物质无干扰，可用血清直接测定，不需沉淀蛋白，易于自动化，具有不需沉淀蛋白，易于自动化，具有简单、快速的优点。简单、快速的优点。2）酶联比色法：）酶联比色法：3)酶联酶联-紫外分光法：紫外分光法：此反应第一步是特异的，但后面此反应第一步是特异的，但后面的氧化还原反应易受干扰，因体内的氧化还原反应易受干扰，因体内有许多脱氢酶反应，亦可氧化内源有许多脱氢酶反应，亦可氧化内源性底物而伴有性底物而伴有NAD+还原生成还原生成NADH，导致结果偏高。，导致结果偏高。（3 3）对正电荷大分子，起到了促进作用。）对正电荷大分子，起到了促进作用。蛋白会减少使可使白蛋白排蛋白会减少使可使白蛋白排出增加形成选择性蛋白尿，见于肾病综合症。出增加形成选择性蛋白尿，见于肾病综合症。如果如果