药敏试验资料.ppt

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1、药敏试验药敏试验 MIC：在与微生物生长速率有关的特定时间间隔内，通常是1824小时，能够抑制被测菌生长的最低药物浓度。对倍稀释的优点：操作容易 敏感株的MIC呈正态分布 区分异常(R)与敏感(S)的菌群药敏试验折点的建立 1.MIC的分布的分布2.药代动力学和药效学药代动力学和药效学 定 MIC的折点3.临床疗效和细菌清除率临床疗效和细菌清除率4.抑菌圈直径的分布 定抑菌圈折点 统计学的线性回归 计算错误率：尽可能减少极重要误差(假敏感率)MIC的分布051015200.0080.0320.1250.52832128512药代动力学和药效学 药代动力学：药物吸收，分布，代谢，排泄 药效学：药

2、物对机体的作用 时间依赖型（TMIC：内酰胺类，大环内酯类 浓度依赖型（AUC/MIC比率：AGS,FQ 这些参数可用于计算具有最佳药效的给药方案MIC与抑菌圈直径的线性关系耐药 中介 敏感RISLog2.MICD 1 d2 抑菌圈直径（mm)v抑菌圈直径与MIC的关系MIC(ug/ml)1 12 23 35 52 22 22 22 22 21 11 11 11 12 22 25 58 8111251 12 25 568小误差中介中介3234耐药耐药重要误差小误差9敏感敏感小误差极重要误差小误差24262830141820220.250.510121248256256163264128不同国家

3、的判定折点可能不同 原因：用药剂量不同，服药的间隔不同 评价敏感时较保守 更强调检测出耐药株（即特定的耐药群）技术因素：接种、培养基敏感性分类(NCCLS的定义)敏感（Susceptible）用常规用量治疗有效 常规用药时达到的平均血药浓度超过细菌的MIC 5倍以上。耐药（Resistance）用常规用量治疗不能抑制细菌的生长 MIC高于药物在血、体液中可能达到的浓度敏感性分类（2）中介(Intermediate)MIC接近血、体液中药物的浓度，治疗反应率低于敏感株 药物生理浓集部位有效(尿FQ)加大用药剂量可能有效缓冲区：防止操作的系统误差造成重大结果的判定错误药敏试验的方法学 半定量纸片扩

4、散法 (抑菌圈直径)MIC法：稀释法(肉汤、琼脂)自动化仪法 抗生素连续梯度法(Etest)流式细胞仪药敏试验方法的选择 纸片法有独特之处 选药灵活、便宜、易懂 MIC法：商品肉汤法(自动化法)可用于厌氧菌、苛氧菌 计算机管理 快速，但可能有错误（如诱导型菌）新药的评价药敏试验方法1（纸片扩散法 材料：浸有一定Abs的干燥的园滤纸片 步骤：制备菌悬液涂平板贴纸片孵育卡尺测量抑菌圈直径判定R、I、S 优点：选药灵活、便宜、一个平皿可测多个药 缺点：影响因素多 适用于快生长菌、部分苛养菌纸片扩散法影响因素MIC接种菌量细菌生长率抗生素含量、扩散性平皿厚度温度，预孵育时间纸片扩散法标准化NCCLS：

5、美国实验室标准化委员会(National Committee for Clinical Laboratory Standards)每年修订更改 包括质控 新药的判定标准 特殊耐药性的检测NCCLS的法规 规定纸片含量、接种浓度、培养基、平皿厚度、判定标准、质控 规定常规测试报告的抗生素 不同的药判定标准不同 不同的菌判定标准也不同 肠杆菌科绿脓和非肠杆菌科一 级 氨苄头孢他啶 唑林，庆大庆大，替卡，哌拉二级 阿米卡星阿米卡星 氨苄/舒，阿莫/克吡肟，哌酮，氨曲南 头孢肤肟，头霉环丙，亚胺培南，替卡/克 噻肟，曲松，环丙妥布，磺胺 亚胺培南，替卡，哌拉三级 氨曲南，头孢他啶头孢曲松 卡那，奈替，

6、妥布氯霉素，奈替 四环素，氯霉素 葡萄球菌肠球菌一级 苯唑，青霉素青霉素，氨苄二级 红霉素类万古霉素 克林，万古三级 氯霉素庆大 流感嗜血杆菌肺炎链球菌一级 氨苄，青霉素青霉素，红霉素 TMP/SMZ TMP/SMZ二级 头孢肤肟，噻肟氧氟，四环素 他啶，氯霉素 万古霉素三级 阿奇，头孢克罗氯霉素，利福平 环丙，亚胺培南利福平，四环素预报用药(一)测试药菌名推测其它药物的敏感性 苯唑西林 葡萄球菌所有内酰胺类 四环素所有（除葡多西环素，米诺环素 萄球菌和不 动杆菌 红霉素G球菌罗红，克拉，阿奇 克林霉素所有林可霉素预报用药(二)测试药菌名推测其它药物的敏感性 氨苄西林肠球菌青霉素 青霉素G葡萄

7、球菌氨苄，美洛，替卡 头孢噻吩肠杆菌科拉定，头孢氨苄，克罗 奈啶酸s肠杆菌科所有FQs 万古霉素s所有替考拉宁s纸片扩散法操作规程(一)培养基：MH(重复性好，低抑制剂，营养好)厚度：4mm PH：7.27.4 pH低时，氨基糖甙,大环内酯 pH高时，青霉素类的活性 离子浓度(Ca 2+,Mg 2+)影响 氨基糖甙类、四环素对Pae活性 高时，抑菌圈；纸片扩散法操作规程(二)接种：纯的新鲜菌落，0.5号麦氏比浊管菌悬液在15分钟内种入平皿内 纸片中心的间距=24mm 孵育：CO2影响Ags,Tet,Macrolides 质控:ATCC25922,35218 ATCC27853,ATCC2592

8、3纸片扩散法结果的判定1.先看菌名（鉴定到种2.不同的药物使用不同的折点药名菌名RS菌株1 菌株2Pip/Taz 绿脓171816R30SCAZ绿脓 141816I19S3.同是S时，偏离敏感折点越高的药,MIC越低，活性也越高抑菌圈的分布北京协和医院127株表葡菌对万古霉素的敏感性000018334414200000051015202530354068101214 1618202224 2628303234抑菌环直径(m m)株数(%)抑菌圈的分布北京协和医院8 9 株金葡菌对苯唑西林的敏感性54212221310432201020304050606810121416182022242628

9、303234抑菌环直径(m m)株数(%)非NCCLS系统的扩散试验方法国家学会培养基评论比较法 UKBSACIso-Sensitest 不校正MICsStokes UKBSACIso-Sensitest 不校正MICsSFM法国SFMMH与NCCLS相近DIN德国DINMH与NCCLS相近SIR瑞典SMSPDMASM MIC相关值低Neo-sensitabs丹麦、比利时MH药片，易保存双歧澳大利亚Sensitest无中介药敏试验的错误来源(一)每个系统特有的局限性（快生长菌 培养基（成分、厚度、pH、离子浓度）各种材料的正确保存(纸片20)操作步骤 纯菌、35、1628h 葡萄球菌、肠球菌

10、24h药敏试验的错误来源(二)体内、体外试验的不一致性 某些菌测某些药，结果有误 头孢菌素、氨基糖甙类：沙门菌、志贺菌 头孢菌素：李斯特菌属 头孢菌素、氨基糖、克林、TMP/SMZ：肠球菌 Beta内酰胺类：MRS 即使敏感，也应报告耐药问题菌和耐药机制 有些菌无标准化的药敏试验 棒杆菌、芽胞杆菌、气单胞菌、巴斯德菌 某些耐药机制需要多种检测方法 诱导型：VanB,Bush I型酶 MRS的异质型表达 ESBL 药敏可能无法检出新出现的耐药，VISA药敏试验方法2肉汤稀释法 4 816 32 64 128 256 ug/ml 混 混 清抗生素倍比稀释，种菌105CFU/ml，孵育35，16-2

11、0h，判读药敏试验方法2肉汤稀释法 调节离子浓度的MH肉汤 宏量肉汤法（2ml,13x100mm）微量肉汤法 （0.1ml,微量板）自动化仪 优点：准确，可靠，可用于研究 缺点：劳动强度大 细菌生长情况不可查药敏试验方法3琼脂稀释法 浓度 16 32 64 128 256 ug/ml 制备含对倍抗生素浓度梯度的平板，制备菌悬液，点种菌，104/每个点，孵育，判读结果药敏试验方法3琼脂稀释法优点：金标准 精确可靠可同时测定多株菌（40株）细菌生长情况可查缺点：测多个药时劳动强度大制备平皿费时费力药敏试验方法4E test 法 细菌生长区E test 塑料条椭圆形细菌生长抑制区256128 801

12、6判读抑菌浓度（MIC ug/ml)药敏试验方法4E test 法 优点 连续浓度梯度，与琼脂稀释法相关性好 影响因素少，稳定性高 操作简单，省时 缺点：昂贵 用途：快生长菌，苛养菌，厌氧菌，酵母菌，分枝杆菌评价药物体外抗菌活性的指标 MIC50,MIC90,MIC 均值，MIC 范围，R，I，S MIC50/MIC90：MIC从小到排列，位于第50/90百分位菌株的MIC值 单纯比较MIC50，MIC90是片面的，还要同时看平均MIC及MIC范围 同时结合R，I，S，（不同药物血浓度不同，安全范围不同抗生素抗生素细细 菌菌人人 体体 RESISTANCEPHARMACODYNAMICSINF

13、ECTIONIMMUNITYSIDE EFFECTSPHARMACOKINETICS抗生素、细菌、人体抗生素、细菌、人体Time above MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC(susceptibility)of an organism Time above MICTimeAntibiotic concentration(ug/ml)2Drug ADrug BABDrug A present at concentration of 2 ug/ml for 50%of dosing intervalDrug B present at

14、 concentration of 2 ug/ml for 30%of dosing interval4680Relationship between Time above MIC and efficacy in animal infection models020406080100020406080100Time above MIC(%)PenicillinsCephalosporinsMortality after 4 days of therapy(%)Craig.Diagn Microbiol Infect Dis 1996;25:213217Antibiotic concentrat

15、ionMIC TimeArea under the curve over MIC24-hr AUC/MIC is correlated with outcome of infection,the magnitude required for success and MIC at which this occurs becomes the PD breakpoint 24-hr AUC/MICCorrelation of serum pharmacokinetics with MIC(susceptibility)of an organism The relationship between t

16、ime above MIC90and bacteriological cure in (red)and(blue)in otitis media and sinusitisOtitis mediaSinusitisTime Above MIC(%of dosing interval)Bacteriological cure(%)020406080100020406080100Craig,ECCMID 2000,Stockholm,Sweden药物药物感染部位浓度感染部位浓度对细菌对细菌MIC结果结果微生物学微生物学抗菌机制抗菌机制抗菌谱抗菌谱药代动力学药代动力学吸收、分布、代吸收、分布、代谢、排泄谢、排泄给药方案给药方案药效学药效学时间时间/浓度依赖型浓度依赖型杀菌剂杀菌剂/抑菌剂抑菌剂组织渗透组织渗透抗菌时效抗菌时效临床效果临床效果细菌清除细菌清除患者依从性患者依从性耐受性耐受性耐药产生耐药产生病人相关原因病人相关原因依从性差依从性差不适当给药途径不适当给药途径免疫抑制免疫抑制病灶病灶微生物相关的原因微生物相关的原因病原确立错误病原确立错误治疗中出现耐药治疗中出现耐药抗菌活性不足抗菌