血清总胆固醇测定.ppt

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1、血清总胆固醇测定血清总胆固醇测定 （胆固醇氧化酶法（胆固醇氧化酶法）胆固醇 英文名称：英文名称：cholesterolcholesterol，Ch Ch 定义：定义：胆固醇又称胆甾醇。一种胆固醇又称胆甾醇。一种环戊烷多氢菲环戊烷多氢菲的的衍生物衍生物。是最早从动物胆石中分离出。是最早从动物胆石中分离出具有羟具有羟基的固醇类化合物基的固醇类化合物，1816年化学家本歇尔将年化学家本歇尔将这种具脂类性质的化合物命名为胆固醇。这种具脂类性质的化合物命名为胆固醇。学名：学名：5-5-胆烯胆烯-3-3-醇。醇。在类固醇核的在类固醇核的C-3C-3上上连接一羟基，而在连接一羟基，而在C-17C-17位上接

2、有一条八碳或更位上接有一条八碳或更多碳原子的脂族侧链多碳原子的脂族侧链。是由乙酰辅酶。是由乙酰辅酶A A通过异通过异戊二烯单位的缩合反应而合成。戊二烯单位的缩合反应而合成。胆固醇结构式 胆固醇广泛存在于动物体内，尤以胆固醇广泛存在于动物体内，尤以脑及神经组织脑及神经组织中最为丰富，中最为丰富，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似，在肾、脾、皮肤、肝和胆汁中含量也高。其溶解性与脂肪类似，不溶于水，易溶于乙醚、氯仿等有机溶剂不溶于水，易溶于乙醚、氯仿等有机溶剂。在在胆汁胆汁中它以溶于与中它以溶于与胆汁酸胆汁酸、卵磷脂卵磷脂所形成的微胶粒中运载的。任何原因造成胆汁中所形成的微胶粒中

3、运载的。任何原因造成胆汁中胆固醇含量增多和或胆汁酸、卵磷脂含量减少，致使胆固醇浓度胆固醇含量增多和或胆汁酸、卵磷脂含量减少，致使胆固醇浓度相对增高，就可使胆固醇从胆汁中析出结晶而形成相对增高，就可使胆固醇从胆汁中析出结晶而形成结石结石。一般都知道，脂类物质主要分为两大类。一般都知道，脂类物质主要分为两大类。脂肪脂肪（主要是甘油（主要是甘油三酯）是人体内含量最多的脂类，是体内的一种主要能量来源；三酯）是人体内含量最多的脂类，是体内的一种主要能量来源；另一类叫另一类叫类脂类脂，是生物膜的基本成分，约占体重的，是生物膜的基本成分，约占体重的5%，除包括，除包括磷脂、糖脂外，还有很重要的一种叫磷脂、糖

4、脂外，还有很重要的一种叫胆固醇胆固醇。胆固醇又分为胆固醇又分为高密度胆固醇高密度胆固醇和和低密度胆固醇低密度胆固醇两种，前者对心两种，前者对心血管有保护作用，通常称之为血管有保护作用，通常称之为“好胆固醇好胆固醇”，后者偏高，后者偏高，冠心病的危险性就会增加，通常称之为冠心病的危险性就会增加，通常称之为“坏胆固醇坏胆固醇”。血液中胆固醇含量每单位在血液中胆固醇含量每单位在140199毫克之毫克之 间，是比较正常的胆固醇水平。间，是比较正常的胆固醇水平。胆固醇是由胆固醇是由甾体部分甾体部分和和一条长的侧链一条长的侧链 组成。人体中胆固醇的总量大约占体重的组成。人体中胆固醇的总量大约占体重的 0.

5、2%，骨质约含，骨质约含10毫克，骨骼肌约含毫克，骨骼肌约含100毫毫 克，内脏多在克，内脏多在150250毫克之间，肝脏和毫克之间，肝脏和 皮肤含量稍高，约为皮肤含量稍高，约为300毫克。脑和毫克。脑和 神经组织中含量最高，每神经组织中含量最高，每100克组织克组织 约含约含2克，其总量约占全身总量的克，其总量约占全身总量的l4。胆固醇的作用功能 1.形成胆汁酸形成胆汁酸 胆汁产于肝脏而储存于胆囊内，经释放进入小肠与被胆汁产于肝脏而储存于胆囊内，经释放进入小肠与被 消化的脂肪混合。消化的脂肪混合。胆汁的功能是将大颗粒的脂肪变成小颗粒，使其易于胆汁的功能是将大颗粒的脂肪变成小颗粒，使其易于与小

6、肠中的酶作用。与小肠中的酶作用。在小肠尾部，在小肠尾部，85%95%的胆汁被重新吸收入血，的胆汁被重新吸收入血，肝脏重新吸收胆酸使之不断循环，剩余的胆汁（肝脏重新吸收胆酸使之不断循环，剩余的胆汁（5%15%）随粪便排）随粪便排出体外。肝脏需产生新的胆酸来弥补这出体外。肝脏需产生新的胆酸来弥补这5%15%的损失，此时就需要的损失，此时就需要胆固醇。胆固醇。2.构成细胞膜构成细胞膜 胆固醇是构成细胞膜的重要组成成分胆固醇是构成细胞膜的重要组成成分，细胞膜包围在，细胞膜包围在人体每一细胞外，胆固醇为它的基本组成成分，人体每一细胞外，胆固醇为它的基本组成成分，占质膜脂类的占质膜脂类的20%以上以上。有

7、人曾发现给动物喂食缺乏胆固醇的食物，结果这些动物的红细胞脆性有人曾发现给动物喂食缺乏胆固醇的食物，结果这些动物的红细胞脆性增加，容易引起细胞的破裂。增加，容易引起细胞的破裂。研究表明，温度高时，胆固醇能阻止双分研究表明，温度高时，胆固醇能阻止双分子层的无序化；温度低时又可干扰其有序化，阻止液晶的形成，保持其子层的无序化；温度低时又可干扰其有序化，阻止液晶的形成，保持其流动性。流动性。因此，可以想象要是没有胆固醇，细胞就无法维持正常的生理因此，可以想象要是没有胆固醇，细胞就无法维持正常的生理功能，生命也将终止。功能，生命也将终止。3.合成激素合成激素激素是协调多细胞机体中不同细胞代谢作用的化学信

8、激素是协调多细胞机体中不同细胞代谢作用的化学信使，参与机体内各种物质的代谢，包括糖、蛋白质、脂肪、水、电解质使，参与机体内各种物质的代谢，包括糖、蛋白质、脂肪、水、电解质和矿物质等的代谢，对维持人体正常的生理功能十分重要。人体的肾上和矿物质等的代谢，对维持人体正常的生理功能十分重要。人体的肾上腺皮质和性腺所释放的各种激素，如皮质醇、醛固酮、睾丸酮、雌二醇腺皮质和性腺所释放的各种激素，如皮质醇、醛固酮、睾丸酮、雌二醇以及维生素以及维生素D都属于类固醇激素，其前体物质就是胆固醇。都属于类固醇激素，其前体物质就是胆固醇。血清总胆固醇 血清中总胆固醇（TC）包括游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）两部

9、分，其中低密度脂蛋白（LDL）中含量最多，其次是高密度脂蛋白（HDL）和极低密度脂蛋白（VLDL），乳糜微粒（CM）中含量最少。测定方法：化学法与酶法。化学法一般包括:抽提，皂化，毛地黄皂苷沉淀纯化，显色与比色五个阶段。目前临床上常用的是胆固醇氧化酶法实验目的：掌握血清总胆固醇测定方法（酶法）与临床意义 实验原理：血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸，游离胆固醇在胆固醇氧化酶的作用下生成 4-胆甾烯酮和过氧化氢，过氧化氢在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成红色醌类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。上述三个酶的催化作用呈连锁反应，实验中把三个酶按比

10、例混合在一起，便于使用。本方法特异性好，灵敏度 高，既可用于手工操作，也可进行自动化分析。胆固醇酯酶 胆固醇酯+H2O-胆固醇+脂肪酸 胆固醇氧化酶 胆固醇+1/2O2+H2O-4-胆甾烯-3-酮+H2O2 过氧化物酶 2H2O2+4-氨基安替比林+酚-醌亚胺+4H2O实验试剂：基础液：100ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（pH6.7）中含胆酸钠129mg,4-氨基安替比林16mg，苯酚132mg，TritonX-100 0.2ml。酶试剂应用液：临用前取商品三酶（胆固醇酯酶，胆固醇氧化酶，过氧化物酶）合剂1ml，加基础液30ml混匀即得。胆固醇标准液（5.17mmol/L）：精确称取胆固醇

11、200mg，用纯无水乙醇溶解，用乙醇定容至100ml。分装，4摄氏度保存，临用时取出。胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性。Triton X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)是一种非离子型表面活性剂（或称去污剂），它的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来。实验操作：取试管3支，按下表操作：测定管标准管空白管血清（ul）50 _ _胆固醇标准液（ul）_ 50 _蒸馏水（ul）_ _ 50酶试剂应用液（ml）1.5 1.5 1.5 混匀后置于37摄氏度水浴中保温15分钟，用空白管调零，在500nm波长处测吸光度。计算 血清总胆固醇（mmol/L）=A测定/A标准 5.17 参考值:3.05.20mmol/

12、L;危险阈值：5.206.20mmol/L；高胆固醇血症：=6.20mmol/L临床意义:1.TC增高 常见于动脉粥样硬化，原发性高脂血症（如家族性高胆固醇血症，家族性apoB缺陷症，多源性高胆固醇血症，混合性高脂蛋白血症等），糖尿病，肾病综合症，总胆管阻塞，甲状腺功能减退，肥大性骨关节炎，老年性白内障和牛皮癣。2.TC降低 常见于低脂蛋白血症，贫 血，败血症，甲状腺功能亢进，肝 疾病，严重感染，营养不良，肠道吸 收不良和药物治疗过程中的溶血性 黄疸及慢性消耗性疾病，如 癌症晚期等。注意事项：1.若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。2.血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。补充：1.酶法测定胆固醇的前二步反应特异性高，而指示反应（第三步反应）特异性则较差，干扰 反应往往发生在指示反应。2.试剂中两种酶胆固醇酯水 解酶和胆固醇氧化酶的质量十 分重要。必须能有效地水解胆固 醇酯，对胆固醇的氧化必须完 全。否则会造成结果偏低。