高效液相色谱法简介.ppt

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1、9/28/2023高效液相色谱法高效液相色谱法高效液相色谱法（high performance liquid high performance liquid high performance liquid chromatographychromatographychromatographyHPLCHPLCHPLC）9/28/2023GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及 高聚物的样品不可检测高聚物的样品不可检测 占有机物的占有机物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的样品，：

2、溶解后能制成溶液的样品，不受样品挥发性和热稳定性的限制不受样品挥发性和热稳定性的限制 分子量大、难气化、热稳定性差及高分子分子量大、难气化、热稳定性差及高分子 和离子型样品均可检测和离子型样品均可检测 用途广泛，占有机物的用途广泛，占有机物的80%9/28/20232流动相差别流动相差别vGC：流动相为惰性气体：流动相为惰性气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用 vHPLC：流动相为液体：流动相为液体流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、改善分离度增加了因素，对分离起很大作用改善分离度增加了因素

3、，对分离起很大作用流动相种类较多，选择余地广流动相种类较多，选择余地广流动相极性和流动相极性和pHpH值的选择也对分离起到重要作用值的选择也对分离起到重要作用 选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相 可以增大分离选择性可以增大分离选择性9/28/2023(3)气相色谱一般都在较高温度下进行的，而高效液相色谱法则经常可在室温条件下工作。高效液相色谱法的仪器设备费用昂贵，操作严格，这是它的主要缺点。9/28/2023四、四、四、四、四、四、影响色谱峰扩展及色谱分离的因素影响色谱峰扩展及色谱分离的因素影响色谱峰扩展及色谱分离的因素影响色谱峰扩展及色谱分离

4、的因素影响色谱峰扩展及色谱分离的因素影响色谱峰扩展及色谱分离的因素9/28/2023第一节第一节第一节第一节第一节第一节 高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪高效液相色谱仪9/28/2023液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（2 2 2）9/28/2023液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（3 3 3）9/28/2023液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（4 4 4）9/28/20239/28/2023流程及主要部件流程及主要部件流程及主要部件流程及主要

5、部件流程及主要部件流程及主要部件 process and main assembly of HPLCprocess and main assembly of HPLCprocess and main assembly of HPLC1.1.流程流程9/28/20232.2.2.主要部件主要部件主要部件主要部件主要部件主要部件(1)高压输液系统：一般由贮液器、高压泵、脱气、高压输液系统：一般由贮液器、高压泵、脱气、梯度洗脱装置梯度洗脱装置高压泵为主要部件之一，压力：150350105 Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是

6、高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性9/28/2023(2)(2)(2)进样装置进样装置进样装置进样装置进样装置进样装置 流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：9/28/2023(3)(3)(3)高效分离柱高效分离柱高效分离柱高效分离柱高效分离柱高效分离柱色谱柱是高效液相色谱仪的心脏，要求分离度高、柱容量大、色谱柱是高效液相色谱仪的心脏，要求分离度高、柱容量大、分析速度快，高性能的色谱柱与固定相本身性能、柱结构、装分析速度快，高性能的色谱柱与固定相本身性能、柱结构、装填和使用技术有关。填和使用技术有关。柱体为直型不锈钢管，

7、内径柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长，柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。标准柱型：内径标准柱型：内径4.6或或3.9mm，长度为，长度为15-30cm不锈钢柱，填料不锈钢柱，填料5-10 m mm，柱效，柱效7000-10000塔板数。塔板数。9/28/2023(4)(4)(4)检测系统检测系统检测系统检测系统检测系统检测系统 a.紫外检测器紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：特点：灵敏度高；灵敏度高；线形范围高；线形范围高；流通池可做的很小（流通池可做的很小（1mm

8、10mm，容积，容积 8L）；）；对流动相的流速和温度变化不敏感；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。可用于梯度洗脱。9/28/2023b.b.b.b.b.b.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器(PDAD,photodiode array detector)(PDAD,photodiode array detector)(PDAD,photodiode array detector)(PDAD,photodiode array detector)(PDAD,

9、photodiode array detector)(PDAD,photodiode array detector)紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；光电二极管阵列检测器：光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，能快速同时检测从200900nm范围的全谱信息。计算机快速处理，三维立体谱图。9/28/2023c.c.c.示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器（differential refractive index detectordifferential refractive index detectordifferential r

10、efractive index detector）除紫外检测器之外应用最多的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比；特点：通用型检测器；通用型检测器；灵敏度低；灵敏度低；对温度敏感；对温度敏感；不能用于梯度洗脱不能用于梯度洗脱 9/28/2023示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器示差折光检测器9/28/2023d.d.d.荧光检测器荧光检测器荧光检测器荧光检测器荧光检测器荧光检测器（fluorescence detectorfluorescence detectorfluorescence detector）特点：特点：

11、选择性检测器；高灵选择性检测器；高灵敏度、高选择性；敏度、高选择性；适用对象适用对象：对多环芳烃，维：对多环芳烃，维生素生素B、黄曲霉素、卟啉类化、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；、甾类化合物等有响应；9/28/2023 通用型检测器，用于检测挥发性低于流动相的通用型检测器，用于检测挥发性低于流动相的任何样品。任何样品。可用于梯度洗脱可用于梯度洗脱 对温度变化不敏感对温度变化不敏感f.f.f.蒸发激光光散射检测器（蒸发激光光散射检测器（蒸发激光光散射检测器（蒸发激光光散射检测器（蒸发激光光散射检测器（蒸发激光光散射检测器（ELSD,ELS

12、D,ELSD,Evaporation Laser scatter detectorEvaporation Laser scatter detectorEvaporation Laser scatter detector）9/28/2023g.g.g.质谱检测器质谱检测器质谱检测器质谱检测器质谱检测器质谱检测器（mass spectroscopymass spectroscopymass spectroscopy）h.电化学检测器：电导检测器、安培检测器等电化学检测器：电导检测器、安培检测器等9/28/2023（一）、（一）、（一）、（一）、（一）、（一）、液液液液液液-固吸附色谱固吸附色谱固吸

13、附色谱固吸附色谱固吸附色谱固吸附色谱 固定相固定相：固体吸附剂，如极性的硅胶和氧化铝，非极性的 苯乙烯-二乙烯苯基共聚物和石墨化炭黑微球，较常使用的是510m的硅胶吸附剂；流动相流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。基本原理基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸；适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；缺点缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾；9/28/2023 1.1.环境中有机氯农药残留量分析环境中有机氯农药残留量分析 固定相：薄壳型硅胶(37 50mm)流动相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色谱柱：50cm2.5mm(内径)检测器：差示

14、折光检测器 可对水果、蔬菜中的农药残留量进行分析。9/28/2023（二）、（二）、（二）、（二）、（二）、（二）、液液液液液液-液分配色谱液分配色谱液分配色谱液分配色谱液分配色谱液分配色谱liquid-liquid partition chromatographyliquid-liquid partition chromatographyliquid-liquid partition chromatography 固定相与流动相均为液体（互不相溶）；基本原理基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；正相色谱：固定相-亲水性填料；流动相-疏水性溶剂或混合物 反向色谱：固定相-疏水性填料；流动相-

15、亲水性溶剂或混合物 正相与反相的出峰顺序相反；固定相固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；化学键合固定相化学键合固定相：（将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱,ODS），氰基柱（正相）。9/28/2023（3 3 3）化学键合固定相）化学键合固定相）化学键合固定相）化学键合固定相）化学键合固定相）化学键合固定相 化学键合固定相:目前应用最广、性能最佳的固定相；a.硅氧碳键型：硅氧碳键型：SiOC b.硅氧硅碳键型：硅氧硅碳键型：SiOSi C 稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广；c.硅碳键型：硅碳键型

16、：SiC d.硅氮键型：硅氮键型：SiN9/28/20239/28/20232.2.2.2.2.2.稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析稠环芳烃的分析 稠环芳烃多为致癌物质。固定相：十八烷基硅烷化键合相 流动相：20%甲醇-水 100%甲醇 线性梯度淋洗，2%/min 流 速：1mL/min 柱 温：50 C 柱 压：70 104 Pa 检测器：紫外检测器9/28/2023（三）、（三）、（三）、（三）、（三）、（三）、离子交换色谱离子交换色谱离子交换色谱离子交换色谱离子交换色谱离子交换色谱ion-exchange chromatographyion-exchange chromatographyion-exchange chromatography 固定相固定相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂；流动相流动相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液；基本原理基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在形式等有关。亲和力大，保留时间长；阳离子