第10章抗生素类药物的分析.ppt

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1、NSCH3CH3COOHOHN1234567RCO母核（6-氨基青霉烷酸）第二节第二节 内酰胺类抗生素内酰胺类抗生素 青霉素类青霉素类NSOHNCOOKCH3CH3OCCH2结构与性质结构与性质一、一、NaNa与碱金属与碱金属(Na+、K+)成盐，易溶于水成盐，易溶于水（一）羧基（一）羧基 酸性酸性与有机碱与有机碱(普鲁卡因普鲁卡因)成盐，难溶于水成盐，难溶于水 普鲁卡因普鲁卡因青霉素青霉素C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OCCH2NH2NSO1234567（二）手性（二）手性C 旋光性旋光性 87654321NOS(5%头孢唑啉钠溶液头孢唑啉钠溶液 1824)20

2、D 头孢菌素类头孢菌素类 C6 C7青霉素类青霉素类 C3 C5 C6 （三）共轭体系（三）共轭体系 UV NSO头孢菌素类头孢菌素类 母核有共轭体系母核有共轭体系 青霉素类青霉素类 母核无明显母核无明显UV 多数有苯环取代基多数有苯环取代基 NOS（四）（四）内酰胺环内酰胺环 水溶液水溶液 不稳定不稳定 干燥纯净干燥纯净 稳定稳定 不稳定性因素不稳定性因素四元环张力大四元环张力大 酰胺键易水解酰胺键易水解 （某些金属离子）（某些金属离子）（温度）（温度）失效失效降解降解青霉素类青霉素类酸、碱、青霉素酶酸、碱、青霉素酶某些氧化剂某些氧化剂例例青霉素的降解反应青霉素的降解反应青青霉霉素素青霉噻唑

3、酸青霉噻唑酸H2O/OH青霉素酶青霉素酶青霉酸青霉酸H2OpH2100青霉噻唑酰青霉噻唑酰基羟胺酸基羟胺酸NH2OH青霉烯酸青霉烯酸pH4青霉胺青霉胺CO2青霉醛青霉醛HgCl2失效失效降解降解头孢菌素类头孢菌素类酸、碱、胺类酸、碱、胺类内内酰酰胺胺酶酶 二、二、K+、Na+反应反应（一）（一）鉴别鉴别 焰色焰色鲜黄色鲜黄色 +醋酸氧铀锌醋酸氧铀锌黄黄 Na+焰色焰色紫色紫色 +0.1%四苯硼钠四苯硼钠+Ac 白白 K+（二）呈色反应（二）呈色反应1.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应-内酰胺类内酰胺类NaOH HClNOHH内内酰酰胺胺类类呈色呈色羟羟肟肟酸酸衍衍生生物物Fe3+/3H+NSONSCO

4、HNHOHH2NOH HClNSCHNHOFe3+3OH+Fe3+/3（红、棕、褐）（红、棕、褐）2、与与H2SO4-HNO3反应反应亮黄亮黄红棕红棕黄色黄色头孢噻肟钠头孢噻肟钠头孢噻吩钠头孢噻吩钠头孢氨苄头孢氨苄 HNOSOH头孢菌素类头孢菌素类NH2CONSOHNCOOHCH3CH3CH23.茚三酮茚三酮反应反应蓝紫色蓝紫色氨基氨基茚三酮茚三酮 -氨基氨基-氨基、伯胺氨基、伯胺某些羟基胺类某些羟基胺类酮式酮式烯醇式烯醇式茚三酮茚三酮茚三酮茚三酮缩合缩合蓝紫色蓝紫色+H2OCNCH2RC OH2RCHH2NCOOH2OHCCOCOCOHNH2CCOCOCOCOHCNCCOCOCOCOHCHR

5、NCCOCOCO4.双缩脲反应双缩脲反应-内酰胺类内酰胺类 CONH紫紫内酰胺类内酰胺类碱性酒石酸铜碱性酒石酸铜 （开环分解）（开环分解）2OHCONH2CuCOHNCCH3COONaCH3SNHNCH3CH3COONaCSNOHOHOOCH2NH2CH2HH蓝紫色蓝紫色（三）沉淀反应（三）沉淀反应1.遇酸遇酸白白青霉素青霉素青霉素钠青霉素钠青霉素钾青霉素钾 H2.有机胺盐反应有机胺盐反应重氮化重氮化-偶合反应偶合反应 青霉素青霉素普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素 H重氮化重氮化-偶合反应偶合反应红红 芳伯氨基芳伯氨基C2H52NCH2CH2OOCNSOHNCOOHCH3CH3OC

6、H+C2H52CH2NH2H2NCOOCH2CH2N普鲁卡因普鲁卡因普鲁卡因青霉素普鲁卡因青霉素NCH2CH2OOC2C2H5N+Cl-N2C2H5COOCH2CH2NNH2HClNaNO2 光谱法光谱法（四）（四）1、UV法法A,Emin,max,%1cm1 光光谱谱图图样品、分解产物样品、分解产物nm339HA 苯唑青霉烯酸苯唑青霉烯酸苯唑青霉素苯唑青霉素Cu2+头孢氨苄头孢氨苄 max=262nm青霉素青霉素V钠钠 A280nm/A264nm=1.301.50NOCONHCH3NOSCH3CH3COONaNOCHCH3OCOCNHNCHHCCH3CH3SHCHCOOHCu2+pH3.8氯

7、唑青霉素氯唑青霉素 341 0.682双氯青霉素双氯青霉素 342 0.653苯唑青霉素苯唑青霉素 339 1.328max%1cm1E(nm)ml/g50 2、IR法法117401815 cmVOC116901710 cmVOC-内酰胺环内酰胺环酰胺酰胺色谱法色谱法（五）（五）1、TLC法法对照品对照法对照品对照法和斑点颜色和斑点颜色比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件fR2、HPLC法法Rt比较比较供试品供试品对照品对照品相同条件相同条件三、三、含量测定含量测定 IINaOH头孢菌素族头孢菌素族青霉素族青霉素族（水解）（水解）H碘量法碘量法（一）（一）1.原理原理水解产物水解产

8、物 OSNaNaIOSNaI定量过量定量过量剩余剩余-内酰胺类内酰胺类ChP反应分两步进行：反应分两步进行：1.水解反应水解反应 (按化学计算量进行按化学计算量进行)2.氧化氧化-还原反应还原反应 (无固定的量关系，受温度、无固定的量关系，受温度、PH值和时间值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定定)NSC H3C H3C OOHOH NR C OR C OHH NC OON aC H3C H3SNCOON aI24+5H2O+2H C lN aOHCC H3C H3SO3HC HN H2C OOHC HN H C O

9、RC OOH2+2N aC l+8H I第一步第一步第二步第二步V样空样空V样样对照液对照液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 V对空对空V对对2.方法方法供试液供试液+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴+碱碱+酸酸+缓冲液缓冲液+碘液碘液+回滴回滴 空白试验空白试验A、消除样品已降解产物的干扰、消除样品已降解产物的干扰B、消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰、消除样品中其他消耗碘的杂质的干扰C、消除碘挥发造成的误差、消除碘挥发造成的误差 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定空白空白样品样品I2Na2S2O3I-I2 采用标准品平行对照测

10、定采用标准品平行对照测定A、可消除温度、可消除温度、pH、操作、环境等条件的影响、操作、环境等条件的影响B、使本法测定结果与微生物检定法一致、使本法测定结果与微生物检定法一致3.条件条件（1）弱酸性）弱酸性 pH4.5碱碱 I2 IO3-+I-酸酸 普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀普鲁卡因与碘在酸性条件下会产生复盐沉淀（2）温度）温度 2426温度温度38 未水解的供试品亦消耗碘未水解的供试品亦消耗碘（3）水解时间）水解时间以水解以水解20分钟后的分钟后的耗碘量最大耗碘量最大（4）反应时间）反应时间反应反应20分钟后，分钟后，耗碘量随时间的变化耗碘量随时间的变化较小，可减小含量测定的误差

11、。较小，可减小含量测定的误差。4.特点特点（1）灵敏度高）灵敏度高样品样品:碘碘 =1:8（2）反应条件、实验操作要求高）反应条件、实验操作要求高V对对、V对空对空V样样、V样空样空1份含量份含量加试剂次序、反应时间、滴定速度相同加试剂次序、反应时间、滴定速度相同4I28I-5.计算计算原料原料%WWVVVV对照品对照品）（）（含量含量样样对对对对对空对空样样样空样空 汞量法汞量法（二）（二）1.原理原理SHROH 青霉素族青霉素族（水解）（水解）HgRS）（青霉素族青霉素族ChP Hg .pH2.方法方法 总总样样VNOHgHNONaOH 醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液pH4.6滴定滴定水解水解

12、降降空空醋酸盐缓冲液醋酸盐缓冲液VNOHg pH4.6滴定滴定样样品品 以未经水解的样品作空白测定以未经水解的样品作空白测定3、讨论讨论（1）以第二次滴定突跃为终点以第二次滴定突跃为终点 电位法指示终点电位法指示终点 （2）反应摩尔比反应摩尔比 1:1（3）空白试验空白试验 消除已降解产物干扰消除已降解产物干扰（4）优点优点 不需标准品不需标准品%WFTV%WFTV%空空空空样样样样含量含量4、计算计算%FTWVWV%）（含量含量空空空空样样样样 精密称取含水量为精密称取含水量为0.5%的青霉素钠的青霉素钠0.0502g，按药典方法测，按药典方法测定总青霉素含量时，用去硝酸汞滴定液定总青霉素含

13、量时，用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)6.97ml。另精密称取上述样品另精密称取上述样品0.5013g，按药典方法测定降解物含量时，按药典方法测定降解物含量时，用去硝酸汞滴定液用去硝酸汞滴定液(0.02009mol/L)1.33ml。以干燥品计算，求样。以干燥品计算，求样品中青霉素的含量。品中青霉素的含量。(去硝酸汞滴定液的理论浓度为去硝酸汞滴定液的理论浓度为0.02mol/L)homework（三）（三）1、原理原理青霉噻唑酸青霉噻唑酸青霉素类青霉素类NaOH（钠盐）（钠盐）OHNaClHClNaOH （剩剩余余）-内酰胺类内酰胺类ChPNSCH3CH3COONaOHNRCONS

14、CH3CH3COONaCHNONaORCO 定定量量过过量量NaOH2、方法方法2H ONaOHHCl 定量过量内酰胺类供试液回滴3、讨论讨论（1）水解前先中和溶剂和样品水解前先中和溶剂和样品（2）加热时避免吸收加热时避免吸收CO2 CONaNaOHCO不能使酚酞变红不能使酚酞变红（3）空白试验校正空白试验校正(消除消除Na2CO3干扰干扰)（4）特点特点 简便快速，不适用于有残留酯的产品简便快速，不适用于有残留酯的产品nmCupHA 青霉烯酸青霉烯酸青霉素族青霉素族（水解）（水解）可见可见-紫外分光光度法紫外分光光度法（四）（四）1、酸水解法（铜盐法）酸水解法（铜盐法）（1）原理）原理稳定剂

15、稳定剂JP青霉素族青霉素族%WWAA标准品标准品含量含量样样标标标标样样 （2）计算）计算2、硫醇汞盐法硫醇汞盐法（1）原理）原理青青霉霉烯烯酸酸硫硫醇醇汞汞盐盐青青霉霉素素族族 HgCl（咪唑）（咪唑）nmmax 青霉素族青霉素族ChPHgClCH3CH3COONaSNHCONCH2NHCOCH3NSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 HgCl咪唑咪唑nmmax（2）方法）方法对照品法对照品法%WWAA%对照品对照品样样标标标标样样 计算计算标标样样咪唑咪唑硼酸缓冲液硼酸缓冲液标准液标准液供试液供试液AAHgCl 2pH 9（3）讨论）讨论a.咪唑催化的水解产率高，硫醇汞盐

16、稳定（咪唑催化的水解产率高，硫醇汞盐稳定（3h）b.侧链有侧链有-NH2时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发时，需加醋酐先将其乙酰化后才能发生上述反应生上述反应NSOHNCOOCH3CH3OCCH2NH2NaNSOHNCOONaCH3CH3OCCH2NHCOCH3 OCHCH pH9（4）特点）特点A、简便快速、简便快速B、用标准品对照，重现性良好，、用标准品对照，重现性良好，RSD1%第三节第三节 氨基糖苷类抗生素氨基糖苷类抗生素苷苷苷元苷元糖糖缩合缩合 氨基糖苷氨基糖苷苷元苷元氨基糖氨基糖缩合缩合 链霉素链霉素 双氢链霉素双氢链霉素 新霉素新霉素 卡那霉素卡那霉素庆大霉素庆大霉素 巴龙霉素巴龙霉素链霉素链霉素链霉胍链霉胍+链霉糖链霉糖+N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺 苷元苷元糖糖链霉双糖胺链霉双糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺NH CNHNH2HOOHOHNHCH2NNHOOCH3OHCHOOOCH2OHOHOHNHCH3链霉胍链霉胍链霉糖链霉糖N-甲基甲