乳腺疾病的实验室检查.docx

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1、乳腺疾病的实验室检查乳腺疾病的实验室检查除了对炎症起监测作用的血细胞计数、红细胞沉降率以及反映患者内分泌情况的各种激素以外主要就是对乳腺肿瘤的各种生物学标记的检测。肿瘤标记物可在肿瘤患者的组织、体液和排泄物中检出，主要用于：肿瘤高危人群的普查；原发性肿瘤的检测；肿瘤的鉴别诊断；肿瘤的疗效观察和预后判断；肿瘤复发和转移的监测；判断肿瘤的发展程度。目前所用的肿瘤标记物虽然还未达到高特异性、高灵敏度的理想状态，但是合理和正确的使用仍有很大临床价值。一、乳腺癌相关肿瘤标记物(一)肿瘤相关抗原1.癌胚抗原(CEA)是从结肠腺癌中发现的一种富含糖类的酸性糖蛋白。由于该抗原也存在于26个月胎儿小肠、肝、胰腺

2、等组织中，故称之为癌胚抗原。与CEA相关抗原和抗体发生交叉反应的物质有30余种，而且大部分存在于正常组织中。因此，CEA监测的特异性极差。所有胃肠道恶性肿瘤CEA均可增高，此外，肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、胰腺癌、肝癌等也可见增高。非肿瘤性疾病，如肠炎、肝硬化、胰腺炎、支气管炎以及大量吸烟均可见增高。CEA在乳腺癌早期的诊断意义并不理想，但在临床分期In期、IV期、淋巴结转移及远处转移时可有明显升高，连续监测血清中CEA的含量高低变化可以预示病变恶化或消退的情况，所以在监测乳腺癌治疗后发生转移、复发方面具有重要的指导意义。目前临床常用的体液中CEA的监测方法都是利用抗原一抗体复合物的原理。2 .糖链

3、抗原15-3(CA15-3)是一种分子量约400000的糖蛋白，分子结构尚未完全清楚。1984年，Hikens等自人乳脂肪球膜上糖蛋白MAM-6制成小鼠单克隆抗体(115-D8)；同年，Kufu等自肝转移乳腺癌细胞膜制成单克隆抗体(DF-3),因其能由这些抗体所识别，故被命名为CAI5-3。CAl5-3是乳腺癌的标志物之一，主要用于乳腺癌的诊断。30%50%的乳腺癌患者血清CA15-3增高，80%有转移灶患者增高。以CAl5-3血清浓度30Uml为判断线，6%12%工期乳腺癌患者增高，19%22%11期乳腺癌患者增高，37%55%In期乳腺癌患者增高，63%100%IV期乳腺癌患者增高。11期

4、、III期和IV期乳腺癌与乳腺良性疾病后的患者之间CAl5-3水平差异有显著性。因此，CAl5-3对乳腺癌的早期诊断意义不大，但对乳腺癌的分期有鉴别意义。研究表明：CAI5-3是监测乳腺癌患者术复发的最佳指标，尤其对原发性和转移性病变，当CA15-3100Uml时，可肯定有转移。发现癌转移的敏感性比癌胚抗原(CEA)和组织多肽抗原(TPA)更高，比临床发现癌转移早几个月。1998年陈智周等研究表明，如果以30Uml为判断线，则正常受试者和良性乳腺疾病患者的假阳性率为0,不同病期的乳腺癌患者总阳性率为50.8%,肝转移和骨转移的时阳性率为100%。血清CAI5-3升高与肿瘤的发展进程有关，其含量

5、下降与治疗反应密切有关，它能准确反应肿瘤负荷，是乳腺癌追踪和随访的良好指标。3 .组织多肽特异性抗原(TPSA)是1957年发现的癌胎儿性蛋白，TPSA单链多肽存在于癌组织细胞质膜及细胞质小胞体内，可从癌细胞系培养的上清液中检出。TPSA是一种普通的肿瘤标志，无器官特异性。TPSA与某些细胞分裂素、细胞骨架蛋白有广泛的同源性，当细胞分裂时，其浓度增高。TPSA水平可以反映细胞的增殖活性，随着乳腺癌的分期不同，TPSA的灵敏性不一，I、11期为057%,III、IV期为35%82%,与病情进展呈正相关，应用TPSA与CA15-3联合检测乳腺癌可预示其病情轻重。4 .糖链抗原125(CA125)是

6、1981年Bast等从人卵巢浆液囊腺癌细胞系0V-CA433做抗原免疫小鼠，通过淋巴细胞杂交而获得的单克隆抗体OC125识别而称为CA125,因其主要在卵巢癌中发现，又称卵巢癌相关抗原。CA125是一种糖蛋白，分子量200000,加热至100C,CA至5活性破灭。乳腺癌患者血清CA125可见增高，但CA125不能单独适用于早期诊断和反映病程。与CA15-3联合，或再加上CEA显著提高灵敏性，但特异性会有所下降。三者均阳性者可视为晚期乳腺癌，对选择必要的辅助治疗有应用价值。5 .黏蛋白样癌相关抗原（MCA）正常上皮细胞含少量黏蛋白样癌相关抗原，但在乳腺细胞中则大量存在。MCA是由单克隆抗体b-1

7、2所识别；MCA的抗原决定簇也可被CA15-3所用抗体DF3和115D8所识别。MCA是一种糖蛋白，糖链短而多，分子量为350000。60%转移性乳腺癌增高。MCA特异性大于CA15-3,但灵敏度远小于CA15-3o早期乳腺癌MCA的血清水平与良性乳腺疾病并无明显差异，MCA主要对晚期乳腺癌（III期、IV期）的诊断有用。在接受治疗的病人中，MCA阳性率可较好反映肿瘤进展及治疗效果。6 .组织蛋白酶D（CathD）CathD是一种酸性溶酶体蛋白酶，其正常功能是在溶酶体的酸性PH环境下分解蛋白质。CathD在正常乳腺组织中含量较低，癌细胞中分泌增加。CathD可以刺激癌细胞生长和溶解基底膜细胞外

8、基质和结缔组织，促使癌细胞的浸润和转移。CathD在乳腺癌组织中表达，且高表达于恶性程度高的乳腺癌组织中，其浓度与肿瘤组织学分级呈正相关，与肿块大小及淋巴结转移也呈明显正相关。在乳腺癌患者检测CathD的方法主要是针对肿瘤组织。一是测定肿瘤组织匀浆的CathD含量，二是用免疫组织化学的方法观察肿瘤及间质细胞内CathD的表达情况，两种都与肿瘤侵袭、转移及预后有关。7 .其他抗原(1)糖链抗原72-4：是用乳腺癌肝转移的癌细胞膜成分免疫小鼠，所得单克隆抗体B72.3所识别的肿瘤相关糖蛋白抗原,称为肿瘤相关糖蛋白-72(TAG-72)oCA72-4也是胃肠道和卵巢的肿瘤标志物，分子量大于10000

9、00o乳腺癌患者血清CA72-4显著增高，手术切除后可下降到正常范围。(2)糖链抗原27-29(CA27-29):是一种高分子量的黏蛋白，是乳腺上皮表达的高分子量糖蛋白，是muc-1基因表达产物。血液循环中CA27-29抗原是一种异质分子，因其制成的单克隆抗体B27-29而得名。原发性乳腺癌患者血清CA27-29浓度明显增高，临床上将其用做乳腺癌诊断与复发监测标志物。(3)糖链抗原549(CA549):是乳腺上皮表达的高分子量糖蛋白，因此而制成的单克隆抗体是BC4E549,故得名。CA549对乳腺癌的诊断灵敏度较高，有学者建议将其用做乳腺癌诊断与跟踪的常规监测标志物。(二)其他肿瘤标记物1.铁

10、蛋白(Ft)是水溶性铁储存蛋白，1965年从恶性肿瘤细胞株中分离出来。Ft在体内分布极为广泛，主要作用是储存铁，因而在机体需要合成含铁物质时作为铁的供体，从而参与细胞内代谢、细胞增殖和免疫调控。当铁的储存和释放失衡时，即可引起Ft发生相应的变化血清Ft升高的程度与肿瘤活动和临床分期有关。越到晚期，病情越严重，血清Ft值越高。乳腺癌患者血清Ft均值与正常妇女血清Ft均值有明显差异。研究证明，血清Ft值增高可能是癌肿产生的一种铁蛋白异构体。血清铁测定有利于疗效监测的实验室评价。2 .Y-谷氨酰转肽酶(GGT)和碱性磷酸酶(ALP)GGT主要存在于肾、前列腺、胰、肝、脾、肠、脑等组织中，而ALP在人

11、体肝、肾、骨骼组织中含量较多。GGT和ALP都是肝胆疾病中阳性率较高的酶，可以反映肝实质损伤和肝胆管的梗阻情况。肝脏是乳腺癌首先转移的器官之一，GGT和ALP都可作为是检测乳腺癌患者有无肝转移较灵敏的标志物。3 .催乳素(PRL)由垂体前叶嗜酸性细胞分泌。分子量为22000,由198个氨基酸组成，主要作用是促进乳汁分泌。PRL分泌节律：入睡后1L5小时逐渐升高，至晨5时达高峰，清晨醒后逐渐降低，至中午达最低水平。乳腺癌患者血清PRL水平增高。PRL可刺激BCI-2基因表达、作用上调。PRL及其受体在乳腺癌中广泛表达(95%)。Beck等研究证明，PRL的这种作用可由其拮抗药、完全抑制。由此说明

12、，PRL在某种程度上可通过调节BCI-2基因而介导对抗细胞凋亡的作用。4 .降钙素(CT)由甲状腺滤泡旁细胞分泌，又称甲状腺降钙素(TCT)oCT是由32个氨基酸组成的肽，分子量为3500。血中钙、磷、镁升高可刺激C细胞分泌。胃泌素、胰高血糖素、肠促胰酶素也可促进其分泌，主要生理作用是抑制破骨细胞活性，减少溶骨作用，从而降低血钙、磷的浓度，影响骨代谢。乳腺癌患者血清CT可增高。CT能诱导乳腺癌细胞产生cAMP,从而抑制乳腺癌细胞增长。这是由于乳腺癌的细胞上有CT受体，CT与其受体特异性结合后影响乳腺癌细胞内第二信使CAMP的水平，并通过调节c-foscjun和甲状旁腺相关蛋白等基因的表达，进而

13、发挥抑癌作用。乳腺癌患者机体处于急性时相反应期，机体在其免疫监护调控下，为抑制乳腺癌细胞的生长，甲状腺C细胞将应激性分泌CT,从而导致血浆中CT水平最高。5,促肾上腺皮质激素(ACTH)是垂体前叶激素之一，是肾上腺皮质生长和分泌的主要调节者，分泌呈昼夜节律变化。ACTH由39个氨基酸组成，分子量为4500,其中126氨基片段有生物活性，而2739段基片段无活性。前13个氨基酸是维持最低活性所必需。ACTH和促进肾上腺皮质合成皮质醇，也促进分泌雄激素和雌激素，对醛固酮作用较弱，可促进脂肪细胞脂解、肌肉细胞摄取氨基酸和葡萄糖，刺激胰岛B细胞分泌胰岛素和垂体分泌生长激素。上午89时最高，晚上12时最

14、低。血清AeTH超过200ngL提示异位分泌，乳腺癌患者增高。Ray等用免疫组化研究表明，15%乳腺浸润性导管癌患者ACTH明显增高，认为乳腺癌的病理过程可能与ACTH或ACTH样肽有关。6.其他可在乳腺癌时升高的物质人胎盘催乳素、甲状旁腺相关蛋白、人绒毛膜促性腺激素。二、性激素受体乳腺癌是性激素相关的肿瘤之一。早在100多年前，人们就认识到性激素在乳腺癌的发生和演进过程中的重要作用。随着人们进一步证实了雌激素和孕激素是通过雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)发挥生物学作用，检测乳腺癌中存在的雌激素受体和孕激素受体便对乳腺癌的治疗和预后判断就起着重要的作用。正常乳腺上皮细胞存在ER和PR,当

15、细胞发生癌变时，ER和PR可全部或部分保留，也可以全部或部分丢失。如果癌细胞仍保留受体，该乳腺癌的生长和增殖仍受内分泌调控，称激素依赖性乳腺癌，占全部乳腺癌的50%60%；如果乳腺癌丢失了受体，则该乳腺癌的生长和增殖不再受内分泌调控，称非激素依赖性乳腺癌。事实上,临床治疗中不能简单地把乳腺癌分为激素依赖性和非激素依赖性，任意乳腺癌都可能存在依赖性和非依赖性两种克隆的细胞亚群。（一）雌激素受体1 .ER的理化性质ER是一种糖蛋白，分子量在3500090000,沉降系数为38S,ER生物活性极不稳定，受热容易破坏，某些溶剂如甲醛、丙酮、乙醇对受体的活性也有破坏作用。其生化特性有四个方面：其特异性强

16、，ER只能与雌二醇及其结构相似的物质结合；较高的结合常数，亲和力强，血液中的雌激素只要达到10-9克分子浓度就能与受体结合；有限的结合容量，受体饱和达到容量限度后，结合与离解呈动态平衡；与生理活动密切相关，激素与受体结合后，在体内发挥各种激素效益。2 .ER的功能ER在体内的定位和作用机制有以下三种模式。二步法学说：即雌激素进入细胞后，先与胞质中的ER结合，结合后的激素受体复合物进人细胞核，在核内该复合物与染色质结合影响DNA转录，从而产生新的蛋白质，影响细胞的生理功能；“一步模式”，即“核模式”，认为受体均位于核内，雌激素通过胞质直接进入胞核，与核内的ER结合，进而影响细胞的生理功能；“平衡模式”，ER同时存在于胞质和胞核两部分，雌激素进入细胞后，与两部分的ER结合并使之活化。核内的可溶性ER复合物与染色质结合