医院监测检验方法.ppt

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1、 对重点部门的室内空气、物体表面及医护人员手表面的消对重点部门的室内空气、物体表面及医护人员手表面的消毒情况的监测毒情况的监测 对使用中消毒液及灭菌剂的监测对使用中消毒液及灭菌剂的监测 对内镜消毒效果的监测对内镜消毒效果的监测 对各种灭菌器灭菌效果的生物监测对各种灭菌器灭菌效果的生物监测 对医院污水的监测对医院污水的监测 GB15982-1995医院消毒卫生标准 环境类别环境类别范范 围围标标 准准空气空气cfu/ccfu/cm m3 3物体表面物体表面cfu/cmcfu/cm2 2医护人员手医护人员手cfu/cmcfu/cm2 2类类层流洁净手术室、层流洁净病房层流洁净手术室、层流洁净病房1

2、055类类 普通手术室、产房、婴儿室、普通手术室、产房、婴儿室、早产儿室、普通保护性隔离室、早产儿室、普通保护性隔离室、供应室无菌区、烧伤病房、重供应室无菌区、烧伤病房、重症监护病房症监护病房20055类类 儿科病房、妇产科检查室、注儿科病房、妇产科检查室、注射室、换药室、治疗室、供应射室、换药室、治疗室、供应室清洁区、急诊室、化验室、室清洁区、急诊室、化验室、各类普通病房和房间各类普通病房和房间5001010类类传染病科及病房传染病科及病房-1515 不得检出致病微生物，包括：乙型溶血链球菌、不得检出致病微生物，包括：乙型溶血链球菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌等 要求

3、在母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿要求在母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿 室及儿科病房的物体表面及医护人员手上不得室及儿科病房的物体表面及医护人员手上不得 检出沙门氏菌。检出沙门氏菌。采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样前期间采样 采样高度：与地面垂直高度采样高度：与地面垂直高度8080150cm 150cm 布点方法：室内面积布点方法：室内面积30m30m2 2，设一条对角线上取，设一条对角线上取3 3点，即中心一点、两端各距墙点，即中心一点、两端各距墙1m1m处各取一点；处各取一点；室内面积室内面积30m30m2 2，设东、西、南、

4、北中，设东、西、南、北中5 5点，其中点，其中东、西、南、北点均距墙东、西、南、北点均距墙1m1m。3 3采样方法：用采样方法：用9cm9cm直径普通营养琼脂平板在采直径普通营养琼脂平板在采样点暴露样点暴露5min5min。细菌菌落总数检查：将采样好的平板放置于 37培养箱培养后，进行数落计数。结果计算：5000050000平均菌落数（平均菌落数（cfu/cfu/平皿）平皿）空气细菌菌落总数（空气细菌菌落总数（cfu/mcfu/m3 3）=平板面积（平板面积（cmcm2 2）平板暴露时间（平板暴露时间（minmin）采样时间：选择消毒处理后采样时间：选择消毒处理后4h4h内进行采样。内进行采样

5、。采样面积：被采表面采样面积：被采表面100cm100cm2 2，取全部表面；被，取全部表面；被采表面采表面100cm100cm2 2。采样方法：用采样方法：用5 55cm5cm2 2的标准灭菌规格板，放在的标准灭菌规格板，放在被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的被检物体表面，用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子棉拭子1 1支，在规格板内横竖往返各涂抹支，在规格板内横竖往返各涂抹5 5次，次，并随之转动棉拭子，连续采样并随之转动棉拭子，连续采样1 14 4个规格板面个规格板面积，剪去手接触部分，将棉拭子装有积，剪去手接触部分，将棉拭子装有10ml10ml采样采样液的试管中，门把手等小型物体则采

6、用棉拭子液的试管中，门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。直接涂抹物体的方法采样。细菌菌落总数检查：将含有棉拭子的采样液细菌菌落总数检查：将含有棉拭子的采样液充分混匀并进行适当稀释后，取充分混匀并进行适当稀释后，取1ml1ml采样液接采样液接种于无菌平皿中，平行接种两个平皿，然后种于无菌平皿中，平行接种两个平皿，然后倒入营养琼脂倒入营养琼脂151520ml20ml，待凝固后将平板放置，待凝固后将平板放置于于3737培养箱培养，进行数落计数。培养箱培养，进行数落计数。结果计算：平皿上菌落的平均数平皿上菌落的平均数采样液稀释倍数采样液稀释倍数 物体表面细菌菌落总数（物体表面细菌菌落总

7、数（cfu/mcfu/m2 2）=采样面积（采样面积（cmcm2 2）采样时间：在接触病人、从事医疗活动前进行采样。采样面积：采双手，一只手涂擦面积约30cm2，采样面积按平方厘米计算。采样方法：被检人五指并拢，将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一支在双手曲面从指根到指端来回涂擦各两次，并随之转动采样棉拭子，剪去手接触部位，将棉拭子放入装有10ml采样液的试管内送检。细菌菌落总数检查：将含有棉拭子的采样液充分混匀并进行适当稀释后，取1ml采样液接种于无菌平皿中，平行接种两个平皿，然后倒入营养琼脂1520ml，待凝固后将平板放置于37培养箱培养，进行数落计数。结果计算：平皿上菌落的平均数平皿上菌落

8、的平均数采样液稀释倍数采样液稀释倍数 手表面细菌菌落总数（手表面细菌菌落总数（cfu/mcfu/m2 2）=30302 2 1 1、检验依据、检验依据：GB15982-1995医院消毒卫生标准 2 2、卫生标准、卫生标准：要求细菌菌落总数应100cfu/mL，同样不得检出致病菌。此外，在卫生厅印发的监测方案中还提出使用中的消毒剂及灭菌剂应监测其有效成份含量，使其符合使用的标准。采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与无菌器采样时间：采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液械保存液 采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取采样量及方法：在无菌条件下，用无菌吸管吸取1mL1mL被检样液，加入被检样液

9、，加入9mL9mL含中和剂的稀释液中。含中和剂的稀释液中。根据所采的样液不同，应在采样液中加入相应的根据所采的样液不同，应在采样液中加入相应的中和剂，以中和被检样液的残效作用中和剂，以中和被检样液的残效作用 对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤 对于含氯、含碘消毒剂、过氧化物消毒，需在肉对于含氯、含碘消毒剂、过氧化物消毒，需在肉汤中加入汤中加入0.1%0.1%硫代硫酸钠硫代硫酸钠 对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%3%（W/VW/V）吐温）吐温8080和和0.3%0.3%卵磷脂卵磷脂 对于醛类

10、消毒剂，需在肉汤中加入对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%0.3%甘氨酸甘氨酸 对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在肉汤中加入汤中加入3%3%（W/VW/V）吐温）吐温8080 细菌菌落总数检查：将采样液充分混匀并进行适细菌菌落总数检查：将采样液充分混匀并进行适当稀释后，取当稀释后，取1mL1mL采样液接种于无菌平皿中，平行采样液接种于无菌平皿中，平行接种两个平皿，然后倒入营养琼脂接种两个平皿，然后倒入营养琼脂151520ml20ml，待凝，待凝固后将平板放置于固后将平板放置于3737培养箱培养，进行数落计培养箱培养，进行数落计数。数。结果分析：

11、平板上有菌生长，证明被检样液有残结果分析：平板上有菌生长，证明被检样液有残存活菌，若每个平板菌落数在存活菌，若每个平板菌落数在1010个以下，仍可用个以下，仍可用于消毒处理（但不能用于灭菌），若第每个平板于消毒处理（但不能用于灭菌），若第每个平板菌落数超过菌落数超过1010个，说明每毫升被检样液含菌量已个，说明每毫升被检样液含菌量已超过超过100100个，即不宜使用。个，即不宜使用。有效成份含量：有效成份含量：依据卫生部依据卫生部消毒技术规范消毒技术规范20022002年版中的年版中的2.22.2消消毒产品理化检验技术规范进行毒产品理化检验技术规范进行 有效氯含量测定有效氯含量测定 2.2.1

12、.2.12.2.1.2.1 有效碘含量测定有效碘含量测定 2.2.1.2.22.2.1.2.2 过氧乙酸含量测定过氧乙酸含量测定 2.2.1.2.32.2.1.2.3 戊二醛含量测定戊二醛含量测定 2.2.1.2.92.2.1.2.9 需要指出的是，使用中消毒剂及无菌器械保存液需要指出的是，使用中消毒剂及无菌器械保存液的有效成份含量均较低，因此，滴定液的浓度要的有效成份含量均较低，因此，滴定液的浓度要适当降低。适当降低。主要依据：内镜清洗消毒技术操作规范（主要依据：内镜清洗消毒技术操作规范（20042004年年版）第五章版）第五章 卫生标准：卫生标准：消毒后的内镜合格标准为：细菌总数消毒后的内

13、镜合格标准为：细菌总数20cfu/20cfu/件，件，不能检出致病菌；不能检出致病菌；灭菌后的内镜合格标准为：无菌检测合格。灭菌后的内镜合格标准为：无菌检测合格。采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。用无菌注射器抽取菌注射器抽取10ml10ml含相应中和剂的缓冲液，从待含相应中和剂的缓冲液，从待检内镜活检口注入，用检内镜活检口注入，用15ml15ml无菌试管从活检出口无菌试管从活检出口收集，及时送检，收集，及时送检，2 2小时内检测。小时内检测。菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，取菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.5ml0.5ml，加加 入入

14、2 2只直径只直径90mm90mm无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的无菌平皿，每个平皿分别加入已经熔化的45454848营养琼脂营养琼脂15ml15ml18ml18ml，边倾注边摇匀，待琼脂，边倾注边摇匀，待琼脂 凝固，于凝固，于3535培养培养4848小时后计数。小时后计数。结果判断：菌落数结果判断：菌落数/镜镜=2=2个平皿菌落数平均值个平皿菌落数平均值2020。致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取0.2ml0.2ml分别分别接种接种90mm90mm血平皿、中国兰平皿和血平皿、中国兰平皿和SSSS平皿，均匀涂布，平皿，均匀涂布，3535培养培养

15、4848小时，观察有无致病菌生长。小时，观察有无致病菌生长。需要检测的致病菌主要有：溶血链球菌 绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌 沙门氏菌 依据：依据：GB/T 4789.11-2003GB/T 4789.11-2003 食品卫生微生物学检验食品卫生微生物学检验 溶血性链球菌检验溶血性链球菌检验检检 样样葡萄糖肉汤葡萄糖肉汤血平板血平板血平板（分纯培养）血平板（分纯培养）链激酶试验链激酶试验杆菌肽敏感试验杆菌肽敏感试验观察溶血观察溶血革兰氏染色革兰氏染色报报 告告361 24h 36136124h24h 依据：依据：GB7918.4-87GB7918.4-87 化妆品微生物标准检验方法化妆品微生物标准

16、检验方法 绿绿 脓脓 杆杆 菌菌增增 菌菌 培培 养养分分 离离 培培 养养染染 色色 镜镜 检检氧化酶试验氧化酶试验绿脓菌素试验绿脓菌素试验硝酸盐还原产气试验硝酸盐还原产气试验明胶液化试验明胶液化试验4242生长试验生长试验 报报 告告3737培养培养181824h24h 3737培养培养181824h24h 依据：GB7918.5-87 化妆品微生物标准检验方法化妆品微生物标准检验方法 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌增增 菌菌分分 离离染色镜检染色镜检甘露醇发酵试验甘露醇发酵试验血浆凝固酶试验血浆凝固酶试验报报 告告37 1837 1824h24h 37 2437 2448h48h 沙门氏菌：按国标要求，对于母婴同室、沙门氏菌：按国标要求，对于母婴同室、早产儿室、新生儿及儿科病房物表面和医早产儿室、新生儿及儿科病房物表面和医护人员手上，不得检出沙门氏菌。检验方护人员手上，不得检出沙门氏菌。检验方法主要参照法主要参照GB4789.4-2010 GB4789.4-2010 食品安全国家食品安全国家标准标准 食品微生物学检验食品微生物学检验 沙门氏菌检验沙门氏菌检验 1 1、检验依据：、检