组织无机磷含量测定试剂盒说明书.docx

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1、组织无机磷含测定试剂盒说明书微法100T/96S注意，正式消定之前选择2-3个Bi期差异大的样本做预测定.测定意义，无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等等，此外促进碳水化合物的合成、转化和转运.刑定原理：指蓝与磷酸根生成66Onm有特征吸收峰的物殖，通过测定66Onm光吸收，即可计算无机磷含量。自督仪益和用品离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸憎水。试剂组成和配置:试剂一：液体IoOmLXI瓶，4T保存。试剂二：液体5mLxl瓶，4匕保存。试剂三：粉剂Xl瓶，4C避光保存。临用前配制，加入IO

2、mL蒸网水，充分溶解后加入试剂二（全部），混匀.标准品：液体*1支.无机磷提取：按照组织质量g）：试剂一体积（mL）为1：570的比例（建议称取约0.1g组织，加入ImL试剂一）进行冰浴匀浆.10000rpm,4离心Iomin,取上清，置冰上待测。黑定：1.分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到660nm,蒸慎水调零。2.打开水浴锅，调节温度到40C。3.空白管：取0.5mLEP管，依次加入100L蒸憎水，100L试剂三，混匀后置于40C水浴保温Ionlin,室温冷却Iomin后于66Onm测定吸光度，记为A空白管4.标准管：取0.5mLEP管，依次加入10L标准液，90L蒸憎水，100

3、HL试剂三，混匀后置于40e水浴保温Iomin,室温冷却IOmin后于66Onm测定吸光度，记为A标准管。5.测定管：取0.5mLEP管，依次加入10L上清液，90L蒸憎水，100L试剂三，混匀后置于401C水浴保温IOmin,室温冷却Iomin后于66Onm测定吸光度，记为A测定管。注意I空白管和标准管只需测定一次。组版无机磷含量计算：1）按照蛋自含量计算无机磷含量（molmgpro）=C标准液X（A测定管一A空白管）+（A标准管一A空白管）xV总+Cpr=1（A测定管一A空白管）（A标准管一A空白管）Cpr（2）按照样本质量计算无机磷含量（molg鲜重尸9标准液X（A测定管一A空白管）+（A标准管一A空白管）xV总W=IX（A测定管一A空白管）（A标准管一A空H管户WC标准液：Immol/L；V总：上清液总体积，ImL力.001L：W：样品质量，g。注意事项r1.试剂三需临用前配制，并且当天使用完毕。2.40min内完成比色。3.最低检出限为K）UmOl/L。