实验二.药物中特殊杂质的检查.ppt.ppt

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1、实验二：实验二：药物中特殊杂质的检查药物中特殊杂质的检查一般杂质：一般杂质：自然界中分布较广，在多种药物的生成和贮存过程中容自然界中分布较广，在多种药物的生成和贮存过程中容易引人的杂质，如氯化物，硫酸盐，铁盐，重金属，砷盐等。易引人的杂质，如氯化物，硫酸盐，铁盐，重金属，砷盐等。特殊杂质：特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质，如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素如阿司匹林中的游离水杨酸、异烟肼中的游离肼、甾体激素中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典正文各药中的其他甾体。特殊杂质检查方法收载在中国药典

2、正文各药品的质量标准中。品的质量标准中。药品中的杂质药品中的杂质本次实验内容本次实验内容阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查1氢化可的松中有关物质的检查氢化可的松中有关物质的检查 2盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查 3一、阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查一、阿司匹林肠溶片中游离水杨酸的检查 ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+生产工艺：生产工艺：COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,7075 C。(CH3CO)2OOCOCH3贮藏水解：贮藏水解：COOHOCOCH3(CH3CO)2OH2SO4,7075 C。

3、OCOCH3ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+ONaCO2加压，ONaCOONaOHCOOHH+OOCOOHOHH2OOO1、杂质来源、杂质来源 阿司匹林无游离酚羟基，不与阿司匹林无游离酚羟基，不与Fe3+作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇作用，而水杨酸则可与之反应生成紫堇色，可检出色，可检出1g的游离水杨酸。的游离水杨酸。水杨酸对照液水杨酸对照液阿司匹林阿司匹林硫酸铁铵硫酸铁铵对照液颜色对照液颜色 供试液颜色供试液颜色实验原理实验原理比色法：比色法：合格合格+Fe3+H2OFeOH紫堇色紫堇色2010版用版用HPLC法法实验步骤实验步骤1、样品前处理、样品前处理 取本品取本品

4、30片（片（0.025g/片），研细，用乙醇片），研细，用乙醇15ml分次研磨，并分次研磨，并移入移入50ml量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤量瓶中，充分振摇，用水稀释至刻度，摇匀，立即滤过，取续滤液。过，取续滤液。2.00mL续滤液续滤液水稀释至水稀释至50mL3mL硫酸铁铵硫酸铁铵4.50mL0.01%水杨酸标液水杨酸标液3mL 乙醇乙醇1.00mL酒石酸酒石酸溶液溶液水稀释至水稀释至50mL3mL硫酸铁铵硫酸铁铵50ml纳氏纳氏比色比色管管比较颜色，不得更深（比较颜色，不得更深（1.5%）样品管样品管对照管对照管1.在阿司匹林中游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液在阿司匹林中

5、游离水杨酸的检查中，制备供试品溶液所用的比色管须经干燥后使用，且供试品须用乙醇溶解所用的比色管须经干燥后使用，且供试品须用乙醇溶解后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。后才可加水稀释至刻度，否则供试品难以溶解。2.游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用现配，避免阿游离水杨酸检查时，供试品溶液要临用现配，避免阿司匹林水解造成的误差。司匹林水解造成的误差。3.进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（进行水杨酸检查时，应在中性或弱酸性溶液（pH46）中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会分中进行。若在强酸性溶液中，生成的紫兰色配合物会分解褪色。解褪色。注意事项：注意事项：二、氢化可的松中有关

6、物质的检查二、氢化可的松中有关物质的检查 OHOOHOCH2OHHHH氢化可的松氢化可的松天然皮质激素天然皮质激素甾体激素中的甾体激素中的有关物质有关物质：1、杂质来源、杂质来源 原料、中间体、异构体、降解产物原料、中间体、异构体、降解产物2、特点、特点 （1）可能存在多个甾体杂质）可能存在多个甾体杂质 （2）结构类似）结构类似 本实验中，氢化可的松中本实验中，氢化可的松中“其他其他甾体甾体”的检查采用的检查采用TLC法（法（自身稀释自身稀释对照法对照法）。）。2010版用版用HPLC法法实验原理实验原理S 溶剂溶解一定比例稀释供试品溶液一定量供试品溶液对照溶液供试品溶液所显供试品溶液所显杂质

7、斑点杂质斑点颜色不颜色不得深于对照溶液的得深于对照溶液的主斑点主斑点方法：方法：供供试试品品溶溶液液对对照照溶溶液液杂质杂质主药主药不合格不合格杂质杂质四氮唑比色法：四氮唑比色法：肾上腺肾上腺皮质激皮质激素药物素药物四氮唑盐四氮唑盐OH紫色斑点紫色斑点实验步骤实验步骤1.供试品溶液和对照品溶液的制备供试品溶液和对照品溶液的制备 取本品，加氯仿取本品，加氯仿-甲醇（甲醇（9:1）制成每）制成每1ml中含中含3.0mg的溶液，的溶液，作为供试品溶液。精密量取适量，加氯仿作为供试品溶液。精密量取适量，加氯仿-甲醇（甲醇（9:1）制成每）制成每1ml中含中含60mg的溶液，作为对照品溶液。的溶液，作为

8、对照品溶液。2.检查检查 吸取上述两种溶液各吸取上述两种溶液各5l（毛细管高度约（毛细管高度约1.5cm），），分别分别点于同一点于同一硅胶硅胶G薄层板上，以二氯甲烷薄层板上，以二氯甲烷-乙醚乙醚-甲醇甲醇-水（水（385：60：30：2）为展开剂，展开后，晾干，在）为展开剂，展开后，晾干，在105干燥干燥10min，放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显放冷，喷以碱性四氮唑蓝试液，立即检视。供试品溶液如显杂质斑点，不得多于杂质斑点，不得多于3个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，个，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。不得更深。三、盐酸普鲁卡因中对氨基苯甲酸的检查三、盐酸普鲁卡

9、因中对氨基苯甲酸的检查 1、杂质来源：、杂质来源：水解产生对氨基苯甲酸，进一步脱羧、氧化成有色杂质，水解产生对氨基苯甲酸，进一步脱羧、氧化成有色杂质，使注射剂颜色变黄、疗效下降、毒性增加。使注射剂颜色变黄、疗效下降、毒性增加。NH2COOHNH2NH2COOCH2CH2N(C2H5)2H2O-CO2OOO检查方法检查方法 ：TLC法法（杂质对照法）（杂质对照法）1、杂质对照法、杂质对照法：对照品：对氨基苯甲酸对照品：对氨基苯甲酸供试品：供试品：盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 薄层板：硅胶薄层板：硅胶H板板 展开剂：苯展开剂：苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇（甲醇（14：1：1：4）显色剂：对二甲氨基

10、苯甲醛显色剂：对二甲氨基苯甲醛 杂质斑点与对照品主斑点比较，不得更深。杂质斑点与对照品主斑点比较，不得更深。供供试试品品杂杂质质对对照照品品杂质杂质主药主药合格合格实验原理实验原理2010版用版用HPLC法法杂质已知且有杂质对照品杂质已知且有杂质对照品实验步骤实验步骤 吸取盐酸普鲁卡因供试液和对氨基苯甲酸对照液各吸取盐酸普鲁卡因供试液和对氨基苯甲酸对照液各10l（毛细管高度约（毛细管高度约2.0cm），分别点于同一含有羧甲基纤维素），分别点于同一含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的钠为粘合剂的硅胶硅胶H薄层板上。以苯薄层板上。以苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇（甲醇（14：1：1：4）为展开剂，展开后

11、，晾干，用对二甲氨基苯甲醛）为展开剂，展开后，晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml，加入冰醋酸，加入冰醋酸5ml制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质制成）喷雾显色，供试品溶液如显与对照品相应的杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深。薄层色谱操作要点薄层色谱操作要点薄层板的制备薄层板的制备点样点样展开展开斑点确定斑点确定G板和板和H板的制备板的制备玻璃板洗净，吹干，待用。玻璃板洗净，吹干，待用。G板板：玻璃背面先贴上标签（：玻璃背面先贴上标签（G板），取硅胶板），取硅

12、胶G粉粉5g，加，加18毫毫升水，向同一个方向研磨混合，去除表面气泡，从中心倒入洁升水，向同一个方向研磨混合，去除表面气泡，从中心倒入洁净玻璃板，研钵棒助涂布均匀净玻璃板，研钵棒助涂布均匀(快速快速)，拍板，转向，再拍板，拍板，转向，再拍板，平推，勿动！，晾干，用前烘干活化。平推，勿动！，晾干，用前烘干活化。H板板：玻璃背面先贴上标签（：玻璃背面先贴上标签（H板），取硅胶板），取硅胶H粉粉5g，加，加18毫毫升升CMC-Na，同上法制板，平推，勿动！，同上法制板，平推，勿动！制板完让老师看板，认可后方能离开。每人一个制板完让老师看板，认可后方能离开。每人一个G板一个板一个H板板薄层板的制备薄层

13、板的制备点样点样展开展开斑点确定斑点确定1、点样工具为、点样工具为点样毛细管点样毛细管2、点样时，宜分次点加，每次、点样时，宜分次点加，每次点加后，待其自然干燥。点加后，待其自然干燥。3、点样基线距底边、点样基线距底边2.0cm，样点，样点一般为圆点，直径一般为圆点，直径2mm4mm，点间距离可视斑点扩散情况以不点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般约为影响检出为宜，一般约为1.5cm2.0cm。薄层色谱操作要薄层色谱操作要点点2cm不要划线，不要划线，以免破坏硅以免破坏硅胶表面，毛胶表面，毛细管轻触表细管轻触表面，不要捅面，不要捅破硅胶。破硅胶。薄层板的制备薄层板的制备点样点样展开展

14、开斑点确定斑点确定预饱和预饱和展开中展开中1、先放入板，再加展开剂、先放入板，再加展开剂15mL，浸没，浸没0.5-1cm，样品点不得浸，样品点不得浸入展开剂。入展开剂。2、薄层板先置于盛有展开剂的色谱缸中饱和、薄层板先置于盛有展开剂的色谱缸中饱和3-5min，使得展，使得展开剂蒸汽，缸内大气，薄层达到平衡，避免边缘效应开剂蒸汽，缸内大气，薄层达到平衡，避免边缘效应3、待展开至、待展开至10cm15cm，取出，晾干，按规定方法检测。，取出，晾干，按规定方法检测。4、层析缸必须密闭，否则影响分离效果。相邻两组互换层析、层析缸必须密闭，否则影响分离效果。相邻两组互换层析缸，实验完毕，展开剂应回收。缸，实验完毕，展开剂应回收。