药品生产相关的微生物基础知识.ppt

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1、2023年年12月月13日日2023年年12月月13日日第一部分第一部分微生物基础知识简介微生物基础知识简介2023年年12月月13日日 人类生活的环境充斥人类生活的环境充斥着大量微生物着大量微生物 海拔海拔100英里（约英里（约160公里）以上公里）以上 海平面以下海平面以下600英尺英尺（约（约182米）的地方都米）的地方都可以发现微生物的踪可以发现微生物的踪迹迹 1英里英里=5,280英尺或英尺或1.609公里公里2023年年12月月13日日微生物无处不在微生物无处不在气源性微生物革兰氏阳性菌较气源性微生物革兰氏阳性菌较多多它们可形成芽孢，难以杀灭它们可形成芽孢，难以杀灭因此，药品生产需

2、要因此，药品生产需要HVAC水源性则革兰氏阴性菌居多水源性则革兰氏阴性菌居多不会生成孢子不会生成孢子但会形成细菌内毒素但会形成细菌内毒素耐热性差耐热性差G+G-2023年年12月月13日日葡萄球菌2023年年12月月13日日乳酸杆菌2023年年12月月13日日 芽孢杆菌2023年年12月月13日日 青霉是种真菌，属于子囊菌。有的能产生青霉素，救了无数人的命。产生无性孢子。2023年年12月月13日日酵母菌2023年年12月月13日日根霉（Rhizopus)是种真菌，属于接合菌。能产生无性孢子菌丝体的直径约12 um黑的是孢子囊 2023年年12月月13日日爱滋病病毒2023年年12月月13日日

3、 禽流感病毒SARS病毒是一类新发现的冠状病毒2023年年12月月13日日2023年年12月月13日日种类种类基本特点基本特点细菌细菌0.5 5 m，生长态时不耐热，部，生长态时不耐热，部分分能形成耐热芽孢能形成耐热芽孢真菌真菌5 m 50 m，形成芽孢随空气扩，形成芽孢随空气扩散，不耐热散，不耐热病毒病毒小于小于0.1 m，一般不耐热，一般不耐热，0.22m过滤不了过滤不了2023年年12月月13日日大小大小真菌真菌 5 m 50 m细菌细菌 0.5 5 m主要成员主要成员酵母、霉菌酵母、霉菌细菌细菌细胞组成细胞组成酵母是单细胞，其它为多细胞酵母是单细胞，其它为多细胞均为单细胞均为单细胞细胞

4、质细胞质成份成份遗传物质遗传物质(DNA)被双层核膜包裹被双层核膜包裹(真真核核)，并且还有如线粒体、叶绿体及，并且还有如线粒体、叶绿体及高卡基体等被膜包裹的细胞器。高卡基体等被膜包裹的细胞器。遗传物质遗传物质(DNA)祼露并游离于细胞质祼露并游离于细胞质内内(原核原核)，并且不含有其它有膜细胞，并且不含有其它有膜细胞器。器。繁殖方式繁殖方式有性（如大型真菌或无性如酵母），有性（如大型真菌或无性如酵母），霉菌则二者兼有霉菌则二者兼有无性（裂殖）无性（裂殖）孢子孢子霉菌产生分生孢子（生长繁殖，类似霉菌产生分生孢子（生长繁殖，类似于植物的种子于植物的种子)，虽不耐热，但会飘，虽不耐热，但会飘浮于空

5、气中而难以消除。浮于空气中而难以消除。酵母不会产生孢子。酵母不会产生孢子。主要只有两个属产生孢子（内生孢主要只有两个属产生孢子（内生孢子），又名芽孢：子），又名芽孢：Bacillus-芽孢杆菌属和芽孢杆菌属和Clostridium-梭菌属梭菌属，细菌芽孢属于，细菌芽孢属于休眠体，一个细菌细胞产生一个芽孢休眠体，一个细菌细胞产生一个芽孢生长条件生长条件20-25oC,3-5天天30-35 oC,1-2天天杀灭程度杀灭程度不耐热，但难用消毒剂消毒（因孢子不耐热，但难用消毒剂消毒（因孢子处于漂浮状态）处于漂浮状态）生长态菌不耐热（极个别除外），但生长态菌不耐热（极个别除外），但形成芽孢后耐热。形成芽

6、孢后耐热。2023年年12月月13日日 细菌一般结构包括细胞壁、细胞膜、细菌一般结构包括细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核，特殊结构包括荚膜、细胞质、细胞核，特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢。鞭毛、菌毛、芽孢。然而，细菌的芽孢，然而，细菌的芽孢，并不是繁殖的手段，而是休眠体。并不是繁殖的手段，而是休眠体。2023年年12月月13日日 革兰氏阳性菌：气源性，身体上部，呼吸革兰氏阳性菌：气源性，身体上部，呼吸道道 革兰氏阴性菌：则是水源性的，细胞结构革兰氏阴性菌：则是水源性的，细胞结构不同不同 生物指示剂生物指示剂(BI)均为革兰氏阳性菌，灭菌均为革兰氏阳性菌，灭菌用用BI为非致病菌。为非致病菌。2

7、023年年12月月13日日成熟芽孢孢子壁母细胞孢子壁的形成生长态细胞摘自摘自 http:/www.microbe.org/microbes/spores.asp内生孢子产生于内生孢子产生于 GramGram+细菌细菌:芽孢杆菌属芽孢杆菌属BacillusBacillus梭菌属梭菌属ClostridiumClostridium仅含核酸及少量萌发必需物仅含核酸及少量萌发必需物皮层含皮层含DPADPA和和CaCa2+2+复合物复合物能抵御各种恶劣环境能抵御各种恶劣环境可休眠上百万年可休眠上百万年真菌孢子因不具上述特性而真菌孢子因不具上述特性而不耐热不耐热2023年年12月月13日日 当某些细菌遇到不

8、良生存环境条件时，当某些细菌遇到不良生存环境条件时，为保护自身，在细胞内形成一外壁厚为保护自身，在细胞内形成一外壁厚而坚硬的体眠体，该体眠体即称芽孢而坚硬的体眠体，该体眠体即称芽孢（SporeSpore）或孢子。）或孢子。由于其对不良环境的耐受性远高于生由于其对不良环境的耐受性远高于生长态细胞，常被用于挑战灭菌工艺，长态细胞，常被用于挑战灭菌工艺，以确认被灭菌物品无菌的可靠性。以确认被灭菌物品无菌的可靠性。2023年年12月月13日日 主要产生于主要产生于Gram+细菌的两个属细菌的两个属 芽孢杆菌属芽孢杆菌属 Bacillus 梭菌属梭菌属 Clostridium 能抵御各种恶劣环境，可存活

9、上百万年，因能抵御各种恶劣环境，可存活上百万年，因为它为它 有厚的皮层结构有厚的皮层结构 仅含核酸及少量萌发必需物仅含核酸及少量萌发必需物 含水量极低含水量极低 休眠体，内生孢子，不可再生（每个细胞只休眠体，内生孢子，不可再生（每个细胞只产生一个芽孢）；真菌孢子属于分生孢子，产生一个芽孢）；真菌孢子属于分生孢子，不具上述特性。不具上述特性。2023年年12月月13日日 耐热耐热u80 下长期存活下长期存活u100 下有相当高的存活率下有相当高的存活率u100 以上死亡过程符合一级动力学以上死亡过程符合一级动力学方程方程 影响芽孢耐热性的因素影响芽孢耐热性的因素 芽孢存在的介质芽孢存在的介质 受

10、热时的湿度受热时的湿度2023年年12月月13日日 对特定灭菌工艺具有一定耐受性并能用于定对特定灭菌工艺具有一定耐受性并能用于定量测定灭菌效力的微生物制剂（量测定灭菌效力的微生物制剂（USP32）特点特点 芽孢芽孢 用于制备生物指示剂的微生物应具有相当用于制备生物指示剂的微生物应具有相当的耐受性、稳定性、易培养、及非致病性的耐受性、稳定性、易培养、及非致病性 应用于被验证产品、灭菌工艺、生产工艺应用于被验证产品、灭菌工艺、生产工艺 符合有关法规的要求符合有关法规的要求2023年年12月月13日日2023年年12月月13日日 1、有关法规、规定、制度 药品法、GMP、规章制度，无菌操作有关制度、

11、规定、工艺规程及岗位操作法等;2、无菌基本概念 无菌产品定义、污染物及污染源（微粒、微生物、热源等）3、无菌控制方法要点 环境控制及监测方法，空气净化技术，水的净化，物料进入无菌区的要求和程序，人员进入无菌区的要求和程序，消毒剂和消毒方法等2023年年12月月13日日 4、岗位标准操作程序（SOP）训练 各种岗位标准操作程序的训练，如洗瓶机的操作，洗胶塞机的操作，设备清洗方法，场地清洗方法，无菌灌装岗位的操作（包括洗手方法，无菌工作服穿着要求，无菌操作程序及技巧，天平使用规则，称量复核程序，灌装的计算，调整及复核等）5、组长岗位职责 人员管理，无菌操作的准备程序，组织清场、换批、复核计量，生产

12、记录检查等2023年年12月月13日日 6、机修人员无菌概念的培训 生产工艺和设备的无菌要求，生产流水线的准备及故障排除、试车、保养及维修等 7、无菌操作岗位的文件管理 物料清单，无菌记录，清洁记录，设备运行维修记录，生产指令单，各岗位（洗瓶、洗塞、称量、灌装等）操作记录，批生产记录等2023年年12月月13日日 1、干净与洁净：干净：肉眼所见，是宏观。洁净：微粒、菌落，是微观。2、一般区：是指洁净区之外，未规定有空气洁净度级别要求，但有卫生要求的区域。2023年年12月月13日日 3、洁净室（区）：需要对尘粒及微生物数量进行控制的房间（区域）。其建筑结构、装备及其使用均具有减少该区域内污染源

13、的介入、产生和滞留的功能。（全封闭的结构，人员、物料出入门必须分别设置并有各自的净化用室和设施，人员、物料进入洁净室必须经过净化。生产布局要顺应工艺流程，尽量减少迂回、往返；进入洁净间的工艺用水必须符合规定，无菌间不得引入饮用水；进入洁净间的空气必须经过净化并符合规定。）2023年年12月月13日日 4、污染：当一个产品存在有不需要的物质时，它即受到污染。2023年年12月月13日日 包括肉眼可见与不可见的白点、纤维、微粒等 来源：尘埃、衣物洁具、金属粒子、制剂制备中的粉尘、人体2023年年12月月13日日 5.7%来自地面行驶的车辆，34%来自采掘、炼钢、水泥制造和磨面等工业性粉尘，57%来

14、自燃料的燃烧如锅炉、机动车、火力发电厂，其他如土地干燥产尘、表面腐蚀等。2023年年12月月13日日场所 0.5粉尘计数浓度（个/）市中心 1535 107市郊 820 107田野 48 107香烟烟雾 50 107/ML（大多0.5 发尘量（万发尘量（万/分钟）分钟）普通的确良 9173 粗孔尼龙绸 0546 尼龙绸 0546 纯涤纶 1164 绵纶丝纺织 4173 棉双面卡 6033 洁具使用过程中脱落大量的纤维、颗粒。2023年年12月月13日日 洁净间有机械动作的设备运行中会产生大量金属粒子，特别是大容量注射剂的压盖机。2023年年12月月13日日 制剂制备中的粉碎、过筛、混合、制粒、

15、整粒、压片、颗粒分装、胶囊填充、某些轻质原料的称量等工序均可以产生大量粉尘。2023年年12月月13日日 人体皮屑情况 部位 数量（个）皮肤表面 175平方米 皮肤更替 5天一次 脱落尘粒 71亿/天2023年年12月月13日日 动作或状态 发生率（万/分钟）（0.3-1.0）不动 10 手臂和头轻微活动 50手臂、手、头部都动作 100坐下、起立 250行走（60米/分钟）500行走（90米/分钟）750行走（130米/分钟）1000跳跃 150030002023年年12月月13日日 一朵花开放时可以产生几十万到上千万个花粉，是严重的过敏源。花种 1朵花开放时的花粉数 粒径/黑松 148万

16、40-60等披花 59万 80-100冬枪 41万欧洲枫 28万2023年年12月月13日日 包括细菌、真菌、病毒。微生物广泛存在于空气、水、土壤和人的身上。2023年年12月月13日日 场所 浮游菌浓度（个/）火车站 4.97 104 商业区 4.4 104 公 园 6.98 103 植物园 1.05 1032023年年12月月13日日 部位 数量（个）手 100-1000/平方厘米 前额 1000-10万/平方厘米 头皮 100万/平方厘米 腋窝 1万-1000万/平方厘米 鼻分泌物 1000万/克 唾液 10亿/克2023年年12月月13日日 1、空气：空气本身并不产生污染，但空气是污染最主要、最危险的携带者。2、水：纯水本身并不产生污染，但无论怎样仔细的蒸馏或过滤，总会含有一定量的可溶性的有机物和盐类，这些可溶性物质就是微生物生长的养料。工艺用水：饮用水、纯化水、注射用水2023年年12月月13日日 3、表面：与制剂室有关的表面是指设备、设施、容器、地板、墙壁等有关物体的表面。由于空气中的湿度，所有表面都包上一层含水的薄膜。这层薄膜由于静电吸引而饱含尘埃微粒与微生物，许多时候，