细胞周期素A2检测试剂盒说明书.docx

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1、细胞周期索A2检测试剂盒说明书实验原理：本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中血清素/血清胺(ST)水平。用纯化的血清素/血清胺(ST)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入血清素/血清胺(ST),再与HRP标记的血消素/血清胺(ST)抗体结合，形成抗体-抗原-的标抗体梵合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的血清索/血清胺(ST)呈正相关。用假标仪在4SOam波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中血清素/血清胺(SD浓度。试剂盒性能：1.灵敏度：Z山小的检测浓度小于1号标准品。稀释

2、度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数尺值为Oqqo2特异性：不与其它细胞因子反应。3.重且性：板内、板间变异系数均小于工O%标本要求：1 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-2。C保存，但应避免反完冻融2 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物陶的(HRP)活性。样本处理及要求，1.血清：全血标本请于室温放置2小时或4C过夜后于工Og离心2。分钟，取上清即可检测，或将标本放于-WC或-8OC保存，但应避免反复冻融。2血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本采集后30分钟内于2-8。ClRog离心20分钟，或将

3、标本放于-3七或-8OcC保存，但应避免反复冻融，3 .组织匀浆：用预冷的PBS9QlM,pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果)，称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比，比如Ig的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反熨冻融。将匀浆液于50g离心分钟，取上清检测。4 .细胞培养物上清或其它生物标本：网离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-2。C或-80C保存，但应避免

4、反豆冻融。试剂盒组成：1 3。倍浓缩洗涤液2。MJXI瓶7终止液6knl瓶2酶标试剂6Txl瓶8标准品(160pgkv)O5vx工版3酹标包被板工2孔Xg条q标准品稀释液LSMkl瓶4样品稀择液6恒仅1版1。说明书1份5显色剂A液69仪1瓶12封板膜2张6显色剂B液GMkI/瓶12密封袋2个操作步Ah1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照卜列图表在小试管中进行稀释。80pgml5号标准品150u1的原倍标准品加入150U1标准品稀释液40pgml4号标准品150Ul.的5号标准品加入150U1标准品稀释液20pgml3号标准品150Ul.的4号标准品加入150U1标准品稀释液

5、10pgml2号标准品IoOUl的3号标准品加入150U1标准品稀释液5pgml1号标准品150U1的2号标准品加入150U1标准品稀释液2 .加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酣标试剂，其余各步操作相同、标准孔、待测样品孔。在陶标包被板上标准品准确加样次74,待测样品孔中先加样品稀释液4OpJ,然后再加待测样品10pJ（样品最终稀释度为S倍）。加样将样品加于旃标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3 .温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸缩水30倍稀释后备用S洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置3。秒后弃去，如此重复S次

6、，拍干.6.加酶：每孔加入酶标试剂Sop空向孔除外。7温育：操作同3.8洗涤：操作同5.Q.显色:每孔先加入显色剂AsoKL再加入显色剂85。丛，轻轻震荡混匀，37C避光显色1。分钟.2。终止：每孔加终止液SonL终止反应（此时蓝色立转黄色）。2,测定：以空白孔调零，45On波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。计*以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的。D值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实

7、际浓度。注意事项：1 .试剂自从冷藏环境中取出应在室温平衡15-3。分钟后方可使用，陶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不膨响结果。3 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在S分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做熨孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的。D值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（八倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数HS）o5 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6 .底物请避光保存。7 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以随标仪读数为准.8 .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。q本试剂不同批号组分不得混用。保存条件及有效期：1 .试剂盒保存：2-8C。2 .有效期：6个月