实验23 琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶.ppt
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2、酶同工酶乳酸脱氢酶同工酶的一级结构和等电点不同,乳酸脱氢酶同工酶的一级结构和等电点不同,在一定的电泳条件下,使其在支持介质上分离。然在一定的电泳条件下,使其在支持介质上分离。然后利用酶的催化反应进行显色:后利用酶的催化反应进行显色:HNADH9.8pH8.8 LDNAD丙丙酮酮酸酸乳乳酸酸L L实验原理实验原理 NADPMSH2PMS2HNADHHINTHPMS2INT2PMSH实验实验23 琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶1巴比妥缓冲液(巴比妥缓冲液(pH 8.6,离子强度,离子强度0.075)20.082mol/L巴比妥巴比妥-盐酸缓冲液(盐酸缓冲液
3、(pH 8.2)310mmol/L乙二胺四乙酸二钠乙二胺四乙酸二钠 45g/L缓冲琼脂糖凝胶缓冲琼脂糖凝胶 58g/L缓冲琼脂糖凝胶缓冲琼脂糖凝胶 6显色试剂显色试剂7固定漂洗液固定漂洗液 试剂与器材试剂与器材 实验实验23 琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶1制备琼脂糖凝胶玻片制备琼脂糖凝胶玻片 2加样加样 用微量加样器加约用微量加样器加约40l血清于槽内。血清于槽内。3电泳电泳 电压电压75V100V,电泳,电泳30min40min。4显色显色 5固定和漂洗固定和漂洗操作步骤操作步骤 实验实验23 琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法测
4、定乳酸脱氢酶同工酶1目视观察目视观察 在碱性介质中,在碱性介质中,LD同工酶电泳条带同工酶电泳条带由正极到负极依次为:由正极到负极依次为:LD1、LD2、LD3、LD4和和LD5。按各区带呈色的深浅,比较。按各区带呈色的深浅,比较LD各同工酶各同工酶区带呈色强度的关系。区带呈色强度的关系。2光密度计扫描光密度计扫描 用光密度计在用光密度计在570nm波长下扫波长下扫描,求出各同工酶区带吸光度所占百分比。描,求出各同工酶区带吸光度所占百分比。结果观察结果观察 实验实验23 琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶琼脂糖凝胶电泳法测定乳酸脱氢酶同工酶3在不具备光密度仪扫描条件下,如果需要进行在不具备光



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