实验八、蛋黄卵磷脂的制备　.ppt

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1、实验八、蛋黄卵磷脂的制备实验八、蛋黄卵磷脂的制备 专业综合实验专业综合实验2 化学与环境工程学院化学与环境工程学院一、实验目的一、实验目的1、了解并掌握鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理、了解并掌握鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理和方法。和方法。教学重点：教学重点：1、鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理和方法。、鸡蛋黄卵磷脂的制备工艺原理和方法。教学方法：讲授、实际指导。教学方法：讲授、实际指导。教学时数：教学时数：8学时。学时。教学过程教学过程:三、实验原理三、实验原理卵磷脂最早发早发现于卵磷脂最早发早发现于1844年，由法国学者葛布利（年，由法国学者葛布利（Gobley）从蛋黄中分离出来，故而得名。卵磷脂是构成

2、生物体细胞膜的重从蛋黄中分离出来，故而得名。卵磷脂是构成生物体细胞膜的重要成分之一，广泛存在于动植物体内。虽然许多食物中都含有一要成分之一，广泛存在于动植物体内。虽然许多食物中都含有一定的卵磷脂，其中大豆、卵黄和动物肝脏中的卵磷脂含量较高。定的卵磷脂，其中大豆、卵黄和动物肝脏中的卵磷脂含量较高。卵磷脂既是一种重要且安全的食品乳化剂，有事一种保健食品。卵磷脂既是一种重要且安全的食品乳化剂，有事一种保健食品。此外还广泛应用于临床上心脑血管及肝、肿瘤等疾病的治疗，及此外还广泛应用于临床上心脑血管及肝、肿瘤等疾病的治疗，及作为药物载体。作为药物载体。卵磷脂为两性分子，既具有脂溶性，又具有亲水性。其等卵

3、磷脂为两性分子，既具有脂溶性，又具有亲水性。其等电点约为电点约为ph6.7。卵磷脂外观为浅黄色至浅棕色粉末或半。卵磷脂外观为浅黄色至浅棕色粉末或半透明黏稠状液态物质，有清淡柔和的风味和香味。卵磷脂透明黏稠状液态物质，有清淡柔和的风味和香味。卵磷脂可溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂中，也能溶于水成为可溶于乙醇、甲醇、氯仿等有机溶剂中，也能溶于水成为胶体状态，但不溶于丙酮，且不同的磷脂在有机溶剂中溶胶体状态，但不溶于丙酮，且不同的磷脂在有机溶剂中溶解度不同，故可用有机溶剂来提取分离卵磷脂。但单纯用解度不同，故可用有机溶剂来提取分离卵磷脂。但单纯用溶剂萃取制备卵磷脂是所得产品纯度不高，如果在萃取过溶剂

4、萃取制备卵磷脂是所得产品纯度不高，如果在萃取过程中加入酸、碱或盐类物质，利用金属离子或酸、碱对卵程中加入酸、碱或盐类物质，利用金属离子或酸、碱对卵磷脂分子的选择性，可以获得较高纯度的卵磷脂。磷脂分子的选择性，可以获得较高纯度的卵磷脂。本实验使用有机溶剂从鸡蛋卵黄中提取卵磷脂、利用金本实验使用有机溶剂从鸡蛋卵黄中提取卵磷脂、利用金属盐沉淀纯化卵磷脂，并对卵磷脂的质量进行分析。属盐沉淀纯化卵磷脂，并对卵磷脂的质量进行分析。二、实验材料、试剂与仪器二、实验材料、试剂与仪器1、材料：、材料：新鲜鸡蛋、卵磷脂对照品。新鲜鸡蛋、卵磷脂对照品。2、试剂：、试剂：乙醇（乙醇（95%）、无水乙醇、丙酮、石油醚、

5、氯化锌、氯仿、）、无水乙醇、丙酮、石油醚、氯化锌、氯仿、甲醇、碘，均为分析纯。甲醇、碘，均为分析纯。3、仪器：、仪器：紫外可见分光光度计、旋转蒸发仪、真空干燥箱、恒温磁紫外可见分光光度计、旋转蒸发仪、真空干燥箱、恒温磁力搅拌器、离心机、力搅拌器、离心机、GF250硅胶板（硅胶板（10cm20cm）、薄层）、薄层色谱展开缸、玻璃毛细管（内径色谱展开缸、玻璃毛细管（内径0.91.1mm，壁厚，壁厚0.100.15mm，管长，管长100mm）等。）等。三、实验实验方法与步骤三、实验实验方法与步骤 1、蛋黄的收集、蛋黄的收集采用放置于冰箱保存的新鲜鸡蛋。打蛋是要注意保采用放置于冰箱保存的新鲜鸡蛋。打蛋

6、是要注意保证蛋黄的完整性，分离蛋黄，备用。证蛋黄的完整性，分离蛋黄，备用。2、卵磷脂的提取、卵磷脂的提取取取100g鸡蛋卵黄于烧杯中，加入鸡蛋卵黄于烧杯中，加入200ml95%乙醇，乙醇，置磁力搅拌器室温下搅拌置磁力搅拌器室温下搅拌1h，3000r/min离心分离离心分离10min，将沉淀物再加入，将沉淀物再加入95%乙醇，重复以上步骤乙醇，重复以上步骤3次。收集上清液，次。收集上清液，45下减压蒸馏至近干，用少量石下减压蒸馏至近干，用少量石油醚溶解，得石油醚溶液，于石油醚溶液中加入适量油醚溶解，得石油醚溶液，于石油醚溶液中加入适量丙酮，分离出沉淀物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超丙酮，分离出沉淀

7、物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超过过1.5cm，40左右减压真空干燥左右减压真空干燥24h，得淡黄色，得淡黄色的卵磷脂粗品，准确称量，记录。的卵磷脂粗品，准确称量，记录。3、卵磷脂的纯化、卵磷脂的纯化将将2.5g粗卵磷脂溶于粗卵磷脂溶于25ml无水乙醇中，加入相当无水乙醇中，加入相当于卵磷脂质量于卵磷脂质量10%的的Zncl2的水溶液的水溶液3ml，室温下搅，室温下搅拌拌0.5h，得金属盐卵磷脂络合物沉淀，过滤，收集，得金属盐卵磷脂络合物沉淀，过滤，收集沉淀物。加入冰冷丙酮沉淀物。加入冰冷丙酮50ml洗涤沉淀物，搅拌洗涤沉淀物，搅拌1h，过滤，收集沉淀物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超过滤，收集沉淀

8、物，置搪瓷盘中摊平，厚度不易超过过1.5cm，40左右减压真空干燥左右减压真空干燥24h，可得淡黄，可得淡黄色蜡状的精制卵磷脂，准确称量，记录。色蜡状的精制卵磷脂，准确称量，记录。4、卵磷脂的检测、卵磷脂的检测（1）薄层层析分析）薄层层析分析 将卵磷脂样品与对照品分别配成将卵磷脂样品与对照品分别配成2%的氯仿溶液，的氯仿溶液，用用GF250硅胶板进行层析，展开剂为氯仿：甲醇：硅胶板进行层析，展开剂为氯仿：甲醇：水（水（65：25：4），层析完毕后，取出薄板，干燥，），层析完毕后，取出薄板，干燥，用碘蒸汽显色，观察并拍照。用碘蒸汽显色，观察并拍照。（2）紫外分光光度法测定）紫外分光光度法测定 将自制的卵磷脂样品溶于无水乙醇中，浓度将自制的卵磷脂样品溶于无水乙醇中，浓度为为0.1%，用紫外分光光度计扫描其在，用紫外分光光度计扫描其在190400nm的吸收光谱，卵磷脂的紫外最大吸收峰的吸收光谱，卵磷脂的紫外最大吸收峰应在应在215nm左右的波长处。左右的波长处。