水产养殖环境（水体、底泥）中大环内酯类抗生素的测定 液相色谱-串联质谱法.docx

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1、ICSCCS点击此处添加CCS号B43湖南省地方标准DB43/TXXXX-XXXX水产养殖环境（水体、底泥）中大环内酯类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法DeterminationofmacroIideantibioticsinwaterandsedimentfromaquacultureenvironmentbyIiquidchromatography-tandemmassspectrometry（征求意见稿）2024 -XX-XX 发布2024-XX-XX实施湖南省市场监督管理局发布目次前言II1范围12规范性引用文件13术语和定义14方法原理15试剂与材料16仪器与设备27样品38测定步骤

2、39结果计算和表述610检测方法的灵敏度、准确度和精密度6附录A（资料性）8种大环内酯类药物中英文通用名称、化学分子式和CAS号8附录B（资料性）标准溶液特征离子质量色谱图9,1z.*刖百本文件按照GB/T1.1-2020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由湖南省农业农村厅提出。本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。本文件起草单位：湖南省水产科学研究所、农业农村部渔业产品质量检验测试中心（长沙）。本文件主要起草人：万译文、杨霄、何咏、李小玲、谢仲桂、曾春芳、索纹纹、陈湘艺、刘伶俐、雷琴

3、、肖维、洪波、尹升福、谢玉昆、黄向荣、黄华伟。水产养殖环境（水体、底泥）中大环内酯类抗生素的测定液相色谱-串联质谱法1范围本文件规定了水产养殖环境（水体、底泥）中大环内酯类抗生素测定的液相色谱-串联质谱测定方法。本文件适用于水产养殖环境（水体、底泥）中脱水红霉素、罗红霉素、克拉霉素、竹桃霉素、吉他霉素、交沙霉素、泰乐菌素、替米考星的测定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB17378.

4、5海洋监测规范第5部分：沉积物分析HJ494水质采样技术指导SL187水质采样技术规程3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4方法原理水试样中的目标物经HLB固相萃取柱富集和净化，底泥试样中的目标物经氨化乙脯提取，PSA和以吸附剂净化。净化后的溶液用带有电喷雾离子源的液相色谱-串联质谱仪测定，内标法定量。5试剂与材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯；水应为符合GB/T6682规定的一级水。耳1试剂5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。5.1.2乙躺（CH3CN）：色谱纯。5.1.3甲酸（HCOoH）：色谱纯。5.1.4氯化钠（NaC1）。5.1.5氨水(NH3H2O)o5.1.6无水硫酸

5、镁(MgSOI)5.1.7乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA)。R0溶液配制5.2.10.1%甲酸水溶液：取甲酸0.5mL,用水稀释至500mL。5.2.2甲酸-乙脐溶液：取乙睛30mL,用0.1%甲酸水溶液稀释至100mLo5.2.31%氨化乙俯：取氨水5mL,用乙胞稀释至500niL。41标准品5.3.1大环内酯类抗生素：脱水红霉素、罗红霉素、克拉霉素、竹桃霉素、吉他霉素、交沙霉素、泰乐菌素、替米考星含量均295.0%,具体内容见附录A。5.3.2内标：罗红霉素-Dt含量295.0%,具体内容见附录A。14标准溶液配制5.4.1标准储备液(100gL)：取大环内酯类抗生素标准品各约10mg,

6、精密称定，用甲醇溶解并稀释至100nIL,配制成浓度均为100ug/mL的标准储备液。4C避光保存，有效期3个月。5.4.2内标储备液(100gmL)：取罗红霉素-标准品约10mg,精密称定，用甲醉溶解并稀释至100L,配制成浓度均为100ug/mL的标准储备液。避光保存，有效期3个月。5.4.3混合标准工作液(1.0gmL)：分别精密量取标准标准储备液各1mL,于100mL容量瓶中，用甲静稀释至刻度，配制成浓度为LOug/mL的混合标准中间液。4避光保存，有效期1个月。5.4.4内标标准工作液(LOugmL)：精密量取内标标准储备液1mL,于100mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配制成浓度为

7、LOgmL的混合标准中间液。4C避光保存，有效期1个月。55材料5.5.1HLB固相萃取柱：500mg/6mL。5.5.2PSA(N-丙基乙二胺)吸附剂：粒径40HIIl63Hnl或相当者。5.5.3(十八烷基键合硅胶)吸附剂：粒径40Um63或相当者。5.5.4微孔滤膜：0.45Hnl玻璃纤维滤膜和0.22Hm尼龙滤膜。6仪器与设备A1液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源。69分析天平：感量0.01g和0.00001goA1冷冻干燥机。AA涡旋混合器。hS高速离心机：转速2100OOrmi11o6A超声波清洗器。A1固相萃取装置。AA氮吹仪。AQ旋转蒸发仪。6MPH计。7样品71样品采集水

8、样采集应符合SL187的要求。底泥样品采集应符合HJ494的要求。70试样制备采集的水样经0.45玻璃纤维滤膜过滤后，置于样品瓶中，在（TC避光保存。采集的底泥样品经冷冻干燥机冷冻干燥后，剔除石块和植物体等异物，用研钵研磨后过60目（孔径0.25mm）网筛，在04避光保存。71空白试样制备选取不含大环内酯类抗生素的同类样品，按照7.2的方法制备。8测定步骤A1提取8.1.1水量取100nlL（准确至0.5mL）试样，用甲酸调节PH至6.0（0.2）,加入50UL内标标准工作液，再加入0.1g乙二酸四乙酸二钠，混合均匀。无需提取，待净化。8.1.2底泥称取2g（准确至0.02g）试样于50L离心

9、管中，加入2此水润湿，加入1%氨化乙膨10mL,涡旋混合1min,超声提取10min,加入氯化钠2g,涡旋混合1min,6000r/min离心8min,取上清液并转移至20mL具塞刻度试管中，残渣用10mL1%氨化乙膻重复提取一次,合并上清液,用乙脐定容至20mL,混匀，备用。R）净化8.2.1水HLB固相萃取柱依次用5mL甲醇、5mL水活化。取水样过柱，控制流速不超过5mL/min。待水样全部通过小柱后，用10mL水淋洗，减压抽干，用8mL甲醇洗脱。收集洗脱液，45C下氮气吹至近干。用1.00mL甲酸-乙脐溶液溶解残渣，过0.22IInI尼龙游膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。移取10.OOm

10、L上述备用液至50InL离心管中，加入无水硫酸镁600mg,PSA吸附剂100mg,Gs吸附剂40mg,涡旋振荡1min,10000r/min离心5min,转移上清液至50mL茄形瓶中，45C下减压浓缩至近干，用2.OOmL甲酸-乙胞溶液溶解残渣，取上清液过0.22IIm尼龙滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。A1底泥试样含水率测定应符合GB17378.5的要求。R4标准曲线制备精密量取混合标准工作液、内标标准工作液适量，用甲酸-乙腑溶液配制成大环内酯类抗生素浓度为0.5Ug/L、1Ug/L、5Hg/L、10Ug/L、20ug/L和50g/L的系列混合标准工作液，其中内标溶液的浓度均为50gL,

11、供液相色谱-串联质谱仪测定。以待测物和内标物特征离子质量色谱峰峰面积比为纵坐标、对应的待测物和内标物标准溶液浓度比为横坐标，绘制标准曲线，求得回归方程和相关系数。fi弓测定8.5.1 液相色谱参考条件a）色谱柱：Ci8（1002.1mm,粒径2.6m）,或相当者；b）流动相：A为乙腾，B为0.1%甲酸水溶液，梯度洗脱条件见表1；c）进样量：5L;d）流速：0.3mL/min；e）柱温：40o表1流动相梯度洗脱条件时间(min)(%)B(%)010901.010907.085158.085158.1109010.010908.5.2 质谱参考条件a）离子源：电喷雾离子源；b）扫描方式：正离子扫描

12、；c）检测方式：多反应监测（MRM）；d）喷雾电压：5.5kV：e）脱溶剂气温度：550：f）多反应监测母离子、子离子、去簇电压和碰撞能量见表2。表2多反应监测母离子、子离子、去簇电压和碰撞能量化合物名称母离子m/z子离子m/z去簇电压V碰撞能量eV脱水红霉素716.5558.4,10024158.110040罗红霉素837.5679.510632158.110642克拉霉素748.4158.r,8838590.38829竹桃霉素688.4544.410725158.110738吉他霉素772.4174.3u7243109.37260交沙霉素828.4174.19043109.39060泰乐菌

13、素916.4174.r,8150772.28145替米考星869.5696.411258174.111257罗红霉素-D；844.5158.110642注：为定量离子。8.5.3定性测定在相同测试条件下,试样中待测物的保留时间与标准工作液中待测物的保留时间一致,偏差在2.5%以内，且试样中待测物定性离子的相对丰度与浓度相当的标准溶液对应的定性离子的相对丰度一致。其允许偏差应符合表3的要求。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度，%502050102010允许的相对偏差，%+202530508.5.4定量测定按8.5.1和8.5.2设定仪器条件，取标准工作溶液、试样溶液、空白试样溶

14、液等体积进样测定，外标法定量。标准工作溶液和试样溶液中目标物的响应值均应在仪器检测线性范围内。大环内脂类抗生素标准溶液特征离子质量色谱图参见附录及R6空白实验按照与上述测定步骤相同的条件进行空白试样（7.3）的测定。9结果计算和表述水中待测物含量按式（1）计算。计算结果须扣除空白值，保留两位有效数字。XL2（1）vO式中：%试样中待测物的含量，单位为微克每升（ugL）；G从标准工作曲线得到的待测物溶液浓度，单位为微克每升（ugL）；V试样最终定容体积，单位为毫升CmD；V.试样体积，单位为毫升（mL）；底泥中待测物含量按式（2）计算。计算结果须扣除空白值，保留两位有效数字。X2=吁广、（2）N眩XnIX（I-W）式中：%试样中待测物的含量，单位为微克每千克（ugkg）;%试样提取液体积，单位为亳升（mL）；V2准确移取的备用液体积，单位为亳升（mL）；m试样质量，单位为克（g）;if试样含水率，单位为质量分数（）。10检测方法的灵敏度、准确度和精密度101灵敏度本方法在水产养殖环境水体中8种大环内酯类抗生素的检出限均为0.00