保健食品功能检验与评价方法（2023年版）有助于维持血糖健康水平.docx

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1、保健食品功能检验与评价方法（2023年版）有助于维持血糖健康水平I .1试验项目II .1动物实验分为方案一（胰岛损伤高血糖模型）和方案二（胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型）两种1.1.1.1 方案一（胰岛损伤高血糖模型）1.1.1.1.1 体重1.1.1.1.2 空腹血糖1.1.1.1.3 糖耐量1.1.1.2 方案二（胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型）体重1.1.1.2.2空腹血糖1.1.1.2.3糖耐量1.1.1.2.4 胰岛素1.1.1.2.5 总胆固醇1.1.1.2.6 甘油三酯1.2 人体试食试验1.2.1 空腹血糖1.2.2 餐后2小时血糖1.2.3 糖化血红蛋白（HbAle）或糖化血清

2、蛋白1.2.4 总胆固醉1.2.5 甘油三酯1.3 试验原则1. 3.1动物实验和人体试食试验所列指标均为必做项目。1.2.2 根据受试样品作用原理不同，方案一和方案二动物模型任选其一进行动物实验。1.2.3 除对高血糖模型动物进行所列指标的检测外，应进行受试样品对正常动物空腹血糖影响的观察。1.1.1 3.4人体试食试验可在临床治疗的基础上进行。1.3.5 应对临床症状和体征进行观察。1.3.6 在进行人体试食试验时，应对受试样品的食用安全性作进一步的观察。1.4结果判定1.4.1 动物实验：方案一：空腹血糖和糖耐量二项指标中一项指标阳性，且对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品有助于

3、维持血糖健康水平动物实验结果阳性。方案二：空腹血糖和糖耐量二项指标中一项指标阳性，血脂（总胆固醇、甘油三酯）无明显升高，且对正常动物空腹血糖无影响，即可判定该受试样品有助于维持血糖健康水平动物实验结果阳性。1.4.2 人体试食试验：空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血红蛋白（或糖化血清蛋白）血脂四项指标均无显著升高，且空腹血糖、餐后2小时血糖两项指标中一项指标阳性，对机体健康无不利影响，可判定该受试样品具有有助于维持血糖健康水平的作用。有助于维持血糖健康水平检验方法1动物实验1.1 实验动物选用成年动物，选用小鼠（262g）或大鼠（18020g）单一性别，每组1015只。1.2 材料1.2.1 试

4、剂四氧喀咤（C4H2N2O4h0,分子量160.08）或链服佐菌素、地塞米松磷酸钠注射液、葡萄糖或医用淀粉、血糖测定试纸或试剂盒，胰岛素、甘油三酯、总胆固醇测定试剂盒1.2.2 高热能饲料猪油10%、蔗精15%、蛋黄粉15%、酪蛋白5%、胆固醇L2%、胆酸钠0.2%、碳酸氢钙0.6%、石粉0.4%、鼠维怖!料52.6%1.2.3仪器血糖仪、全自动生化仪、可见光分光光度计、酶标仪、天平。1.3 剂量分组及受试样品给予时间实验设三个剂量组和一个模型对照组，以人体推荐量的IO倍（小鼠）或5倍（大鼠）为其中的一个剂量组，另设二个剂量组，高剂量一般不超过30倍，必要时设空白对照组。同时设给予受试样品高剂

5、量的正常动物组。受试样品给予时间30天，必要时可延长至45天。1.4 实验方法1.4.1 正常动物降糖实验选健康成年动物按禁食35小时的血糖水平分组，随利LM1个对照组和1个剂量组。对照组给予溶剂，剂量组给予高剂量浓度受试样品，连续30天，测空腹血糖值（禁食同实验前）比较两组动物血糖值。1.4.2 高血糖模型降糖实验方案一1.4.2.1 胰岛损伤高血糖模型1.4.2.1.1 原理四氟喘噬（或链服佐菌素）是种细胞毒剂，可选择性地损伤多种动物的胰岛S细胞，造成胰岛素分泌低下，引起实验性糖尿病。1.4.2.1.2 造模方法购入成年动物，适应3-5天后，随机取15只动物禁食3-5小时，测空腹血糖，作为

6、该批次动物基础血糖值。随后动物禁食24小时（自由饮水），注射四氧陶定（用前新鲜配制）造模，小鼠45-50mgkgBW.ivWcl25-13OmgkgBW.ip,大鼠50-80mgkgBW.iv或120160mgkgBW.ip.57天后动物禁食35小时，测血糖，血糖值10-25mmolL为高血糖模型成功动物。1.4.2.1.3 高血糖模型动物降糖实验选高血糖模型动物按禁食35小时的血糖水平随机分组，设1个模型对照组和3个剂量组（组间差不大于LImmOl/L）剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予溶剂，连续30天，测空腹血糖值（禁食同实验前）比较各组动物血糖值及血糖下降百分率。（实验前血糖值一

7、实验后血糖值）血糖下降率%=X100%实验前血糖值1.4.2.1.4 高血糖模型动物糖耐量实验剂量分组及受试样品给予时间同142.1.3。各组动物禁食3-5小时，测定给葡萄糖或医用淀粉前（即0小时）血糖值，剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，1520分钟后各组经口给予葡萄糖2.0gkgBW或医用淀粉3-5gkgBW,测定给葡萄糖后各组0.5、2小时的血糖值或给医用淀粉后1、2小时的血糖值，观察模型对照组与受试样品组给葡萄糖或医用淀粉后各时间点（0、0.5、2小时）血糖值及血糖曲线下面积的变化。（0小时血糖+0.5小时血糖）0.5（2小时血糖+0.5小时血糖）X1.5血糖曲线下

8、面积=+22方案二1.4.2.2胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型（任选其一）1.4.2,2.1地塞米松诱导胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型1.4.2.2.1.1 原理糖皮质激素具有拮抗胰岛素生物效应的作用，可抑制靶组织对葡萄糖的摄取和利用，促进蛋白质和脂肪的分解及糖异生作用，导致糖、脂代谢紊乱，胰岛素抵抗，诱发实验性糖尿病。1.4.2.2.1.2 试验方法购入健康雄性大鼠（15020g）普通维持料适应饲养35天，禁食34小时，取尾血，测定空腹即给葡萄糖前（0小时）血糖值，给2.5gkgBW葡萄糖后测定0.5、2小时血糖值，作为该批次动物基础值。以0、0.5小时血糖水平分5个组，即1个空白对照组、1个模型

9、对照组和3个剂量组，每组15只。空白对照组不作处理，3个剂量组灌胃给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，连续35天。各组给予维持饲料饲养，1周后模型对照组和3个剂量组更换高热能饲料，喂饲2周后，模型对照组和3个剂量组在高热能饲料基础上分别给予地塞米松0.8mgkgBW腹搭谢（0.008%地塞米松注射量ImUlOOg体重）每Hl次，连续JO-12天。试验结束，各组动物禁食34小时，检测空腹血糖、糖耐量、血清胰岛素及胆固醇、甘油三脂水平。1.4.2.2.1.3观察指标1.4.2.2.13.1空腹血糖、糖耐量各组动物禁食3-4小时，测定空腹血糖即给前萄糖前（0小时）血糖值，剂量组给予不同浓

10、度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，空白对照组不作处理，1520分钟后各组经口给予葡萄糖25gkgBW,测定给葡萄糖后各组0.5、2小时的血糖值，若模型对照组0.5小时血糖值21OmmOl/L,或模型对照组0.5小时、2小时任一时间点血糖升高或血糖曲线下面积升高，与空白对照组比较，差异有显著性，判定模型糖代谢紊乱成立，在此基础上，观察模型对照组与受试样品组空腹血糖、给葡萄糖后（0.5、2小时）血糖及0、0.5、2小时血糖曲线下面积的变化。（实验前血糖值一实验后血糖值）血糖下降率=X100%实验前血糖值（0小时血糖+0.5小时血糖）X0.5（2小时血糖+0.5小时血糖）1.5血糖曲线下面积=+

11、221.4.2.2.13.2胆固醇、甘油三脂各组动物禁食34小时，检测血清胆固醇、甘油三脂，若模型对照组血清胆固醇或甘油三酯明显升高，与空白对照组比较，差异有显著性，判定模型脂代谢紊乱成立，在此基础上，观察模型对照组与受试样品组血脂变化。1.4.2.2.1.3.3胰岛素各组动物禁食34小时，检测血清胰岛素，模型对照组与空白对照组比较胰岛素抵抗指数无明显下降，且动物糖/脂代谢紊乱成立，判定胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型成功。观察模型对照组与受试样品组胰岛素抵抗情况。血糖X胰岛素胰岛素抵抗指数=胰岛素225e血搐-22.51.4.2.2.2四氧啥咤诱导胰岛素抵抗糖/脂代谢紊乱模型1.4.2.2.2.1

12、 原理高热能饲料喂饲基础上，辅以小剂量四氧嗡咤（GHzNzQl氏0,分子量160.08）造成糖/脂代谢紊乱，胰岛素抵抗，诱发实验性糖尿病。1.4.2.2.2.2 造模方法购入健康雄性大鼠（15020g）普通维持料适应除35天，禁食34小时，取尾血，测定给葡萄糖前（即0小时）血糖值，给2.5gkgBW葡萄糖后0.5、2小时血糖值，作为该批次动物基础值。以0、0.5小时血糖水平分5个组，即1个空白对照组、1个模型对照组和3个剂量组，每组15只。空白对照组不作处理，3个剂量组灌胃给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂，酸33天。各组给予维持料饲养1周后模型对照组和3个剂量组更换高热能饲料，嚅

13、周后模型对三l和3个剂量禁食24时（不禁水）给予四氧啥咤103-105mgkgBW腹腔注射，注射量ImWOOg体重。注射后继续给予高热能饲料喂饲3一5天。试验结束，各组动物禁食3-4小时，检测空腹血糖、糖耐量、血清胰岛素及胆固醉、甘油三脂水平。1.422.2.3观察指标1.4.2.2.23.1 空腹血糖、糖耐量各组动物禁食34小时，测定空腹血糖即给葡萄糖前（0小时）血糖值，剂量组给予不同浓度受试样品，模型对照组给予同体积溶剂,空白对照组不作处理，15-20分钟后各组经口给予葡萄糖Z5gkgBW,测定给葡萄糖后各组0.5、2小时的血糖值，若模型对照组0.5小时血糖值，IOmmOl/L,或模型对照

14、组0.5小时、2小时任一时间点血糖升高或血糖曲线下面积升高，与空白对照组比较，差异有显著性，判定模型糖代谢紊乱成立，在此基础上，观察模型对照组与受试样品组空腹血糖、给葡萄糖后（0.5、2小时）血糖及0、0.5、2小时血糖曲线下面积的变化。（实验前血糖值一实验后血糖值）血糖下降率=X100%实验前血糖值（0小时血糖+0.5小时血糖0,5（2小时血糖+0.5小时血糖）1.5血糖曲线下面积=+221.4.2.2.23.2胆固醇、甘油三脂各组动物禁食34小时，检测血清胆固醇、甘油三脂，若模型对照组血清胆固醇或甘油三酯明显升高，与空白对照组比较，差异有显著性，判定模型脂代谢紊乱成立，在此基础上，观察模型

15、对照组与受试样品组血脂变化。1.422.2.3.3胰岛素各组动物禁食34小时，检测血清胰岛素，模型对照组与空白对照组比较胰岛素抵抗指数无明显下降，且动物糖/脂代谢紊乱成立，判定胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱模型成功。观察模型对照组与受试样品组胰岛素抵抗情况。血糖X胰岛素胰岛素抵抗指数=胰岛素225e-s22.51.5 数据处理及结果判定一般采用方差分析，但需按方差分析的程序先进行方差齐性检验，方差齐，计算产值，产值尸0.05,结论：各组均数间差异无显著性；F值2即05,P0.05,用多个实验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到正态或方差齐的目的，改用秩和检验进行统计。1.5.1 指标判定1.5.1.1 正常动物降糖试验血糖指标：空腹血糖受试样品剂量组与对照组比较无统计学意义，判定对正常动物血糖无影响。1.5.1.2 高血糖模型降糖试验空腹血糖指标：模型成立的前提下，受试样品剂量组与模型对照组比较，空腹血糖下降或血糖下降百分率升高有统计学意义，判定该受试样品空腹血糖指标结果阳