医疗健康抗肿瘤效应细胞制备流程和质量控制.docx

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1、医疗健康几种抗肿瘤效应细胞的制备流程、规范化操作和质量控制第一节体细胞生物质制品质量控制和规范化管理根据中国生物制品规程要求，对医学血液生物制品成品质量控制一般应该从成品的安全性、有效性和稳定性三个方面考虑，根据本实验室的实际情况，现制定以下有关体细胞免疫治疗项目的质量控制和规范化管理细则，并在今后的工作中不断总结经验，进一步完善质量控制和规范化管理。一、实验室环境管理生物治疗实验室是符合生物制品要求的局部IOO级，工作区1000级、整体10000级的空气层流净化实验室，室内的尘埃粒子和细菌含量都必须符合GMP标准。（一）每天专人监控实验室内空气的层流过滤风速改变，气压的稳定性、空调机的运转、

2、湿度、温度等。（二）每天专人检查每间实验室的压力，各1000级工作室压力保持着2426kPam仪器室压力保持在1620kPam3,缓冲室压力保持在1014kPam3,物品进出口室的压力保持在610kPam21,各室应保持一定的压力差。（三）实验室每天保持三次紫外线消毒，时间设定在早上7：00-7：45、中午13：00-13：45、晚上20：00-20：45,每周评估紫外灯紫外线强度，每月检查紫外空气净化器滤网尘埃积聚情况，出现问题及时清洗或者更换。（四）保持实验室整齐清洁，实验结束后及时清理实验用品，并按医院控感有关规定分类处理医疗废物和废液。（五）每周大清洁一次（包括门、窗、天花板、地板、墙

3、壁、仪器表面、桌椅柜里外等）,用2.0%过氧乙酸溶液彭萨消毒。（六）每周进行一次实验室空气的细菌培养检测，将检测结果归档保存。（七）每半年请生物工程公司协助监测实验室层流系统机器仪表运作情况、空气粒子浓度及滤网尘埃积聚情况，及时更换滤网。二、试剂材料的管理（一）细胞培养用的无血清培养液（如A1.M-V培养液）必须是有质量合格证的产品，符合临床使用的要求。（二）在细胞的培养过程中，必须使用自体血清或者自体血浆：不允许使用导体血清或者是血浆。如果特殊情况下需使用导体血清和血浆时，应有医务处的批准下，使用市级以上血站提供的健康人AB型血清，需具有相关检测报告，确保不含外源因子（细菌、真菌、支原体、病

4、毒、内毒素等）（三）分离淋巴细胞用的FiCo1.I溶液必须使用符合临床要求的合格产品。（四）I1.2等细胞因子必须使用国家食品药品监督管理局批准的用于临床，具有有效批准文号的产品，并遵守国家相关部门制定的管理系统：对于确实要用的无临床使用或临床治疗级的细胞因子，须提供详细的产品质量合格证书，包括供应商/制造商提供的产品说明，质量合格证明、使用说明和质量控制等。（五）抗生素须使用国家食品药品监督管理局批准的用于临床，具有有效批准文号的产品。（六）抗凝剂使用临床注射用的肝素钠。（七）生理盐水均为临床注射用的0.9%生理盐水。三、消耗材料的管理所有用于细胞培养的培养瓶、培养袋、离心管、玻璃瓶等均为符

5、合生物制品要求，不含致热源的一次性用品，其余耗材（如玻璃毛细吸管、胶囊）应由专人浸泡、清洗烘干后送本院供应科高压消毒后才能使用。工作人员每次启用物品应严格核对消毒日期，不得使用超过消毒有效日期的器皿物品，未启用的消毒品，如超过有效期必须重新消毒，方可使用。四、仪器管理用于细胞制备用的仪器如超净工作台、离心机、Co2培养箱和显微镜应指定专人管理,定期检修、清洁和消毒。（一）超净工作台必须保持无菌状态，每天保持三次紫外线消毒，时间设定在早上7：0007：45、中午13：00-13：45、晚上20：00-20：45；物品放置要整齐，方便操作，实验结束后用75%医用酒精擦拭。（二）CCh培养箱定期紫外

6、线消毒，托盘用75%医用酒精擦拭，湿化盆内1：IOOOONaN3溶液需每周更换。五、工作人员的管理（一）生物治疗研究室技术人员必须通过岗前培训，考核合格后方可进入无菌室操作。（二）生物治疗研究室技术人员必须健康无传染性疾病，进入生物治疗实验室前必须严格执行消毒程序，进入生物治疗实验室必须换上室内鞋、按无菌要求清洁消毒双手、戴无菌口罩和包帽，更换实验室专用的无菌工作衣：制备细胞过程中必须戴上无菌手套和严格执行无菌操作规程。（三）非工作人员未经实验室领导同意不得进入无菌室，无菌室钥匙由专人保管。（四）实验工作人员必须严格执行细胞制备的有关程序，不得擅自修改细胞制备操作规程，操作过程中应详细如实地做

7、好实验记录，制备人员对本次实验操作过程负责。六、细胞制备和回输管理（一）每次细胞制备前的采血工作由实验室提供采血瓶（含抗凝剂），并由实验室专人协助和监督病房护士的采血过程，整个过程严格执行无菌操作。（二）培养的细胞制品必须进行质量检测：1 .细胞收集前一周和48h抽样送本院检验科进行细菌和真菌培养检查，回输前Ih进行内毒素检测，定期抽样检测支原体，对长期培养的细胞要进行支原体的检测，确保细胞成品不含外源因子，包括细菌、真菌、内毒素和支原体等。2 .回输前进行细胞活性检测，用台盼蓝染色，在显微镜下，计数活细胞和死细胞的数目，回输细胞的存活率必须大于95%,经冻存后复苏的细胞存活率大于80%。在抽

8、5060m1.外周血基础上，每次回输的C1.K细胞数量应不低于1.0x10叫每次回输的DC细胞数量应不低于3.0x106；每次回输的D-CIK细胞数量应不低于1.OX1.OQ每次回输的NK细胞数量不低于2.0109；每次回输的DC-T细胞数量不低于1.0x107.定期抽样检测所培养细胞的表型；回输的CIK细胞中；CD3-CD56-的细胞不低于10%；回输的DC细胞中；CD80,CD83,CD86均为阳性：回输的D-CIK细胞中；CD3CD8+不低于50%；回输的NK细胞中CD56十阳性的细胞不低于70%；回输的DC-T细胞中；CD3+CD8+不低于50%。（三）每批细胞制品必须留样封存，保存时间不低于3个月，并为制品的质量控制提供完整资料。（四）回输细胞之前必须严格核对病人的姓名、性别、年龄、住院号等资料，确保各项资料准确无误由专人送病房。（五）细胞制品在送病房时应与病区护士共同核对无误，双方签名以示负责，并提醒病房在规定时间内及时回输完。七、质量控制记录的保存与管理如实做好详细实验记录，对每一步质量控制和终制剂的检查结果要有专门的实验记录本记录，并山的当事人签字，建立实验记录本保存档案，并由专人妥善管理。