气相色谱柱使用过程中的注意事项色谱柱如何操作.docx

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1、气相色谱柱使用过程中的注意事项色谱柱如何操作a.气相色谱柱在领取安装及使用过程中应避开碰撞、猛烈震动、小角度弯曲致使断裂。b.安装气相色谱柱时，从隔垫中拔出柱子（见3.5.2h）并穿过石墨密封垫后，为防止污染，要用柱切割器除去柱两端各24厘米，并保持切口平整。再依照不同的色谱仪要求伸进进样口、检测器合适的长度，拧紧螺丝。注意螺丝不要拧太紧，防止挤碎石墨密封垫，堵塞进样口。c.安装柱子时注意不要把柱子的任何部位和柱温箱接触，以免造成柱子损伤。d.切勿在没有通载气的情况下使用柱子，防止固定液流失、氧化。e.切勿在使用中实际温度超过柱子的最高使用温度，一般要低于柱子的最高使用温度20。C以下。f.避

2、开无机或矿物酸碱进入色谱柱，积累在色谱柱前端，破坏固定相，造成固定液流失，影响分别效果。包括：盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、氢氧化钠、氢氧化钾等。g.切勿任意用溶剂冲洗色谱柱，事先必需确认色谱柱是健合、交联的固定相才可以冲洗，否则会严重损坏这一色谱柱。例如：SE系列色谱柱就是非健合、交联的固定相，SE-30,SE54等。h.色谱柱一经使用，就具有方向性，切勿在安装柱子时把其进样口端与检测器端接反。i.从仪器上取下的气相色谱柱应放入其相对应的盒子中，把隔垫插在柱子两端，要避开碎屑进入柱子，并放到原来的储存柜中。j.项目结束后，对色谱柱应进行适当的老化处理，再归存色谱柱。柱子可以分为：加压，常压，减压。

3、压力可以加添淋洗剂的流动速度，削减产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的,但是时间也最长，比如天然化合物的分别，一个柱子几个月也是有的。减压柱能够削减硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必需同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。加压柱是一种比较好的方法，与常压柱仿佛，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。压力的供应可以是压缩空气，双连球或者小

4、气泵（给鱼缸供气的就行）。特别是在简单分解的样品的分别中适用。压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分别效果。个人觉得加压柱在一般的有机化合物的分别中是比较适用的。关于柱子的尺寸，应当是粗长的可以。柱子长了，相应的塔板数就高。柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分别的难度。试想假如柱子十厘米,而样品就有二厘米，那么分别的难度可想而知，或许要用很低极性的溶剂渐渐冲了。而假如样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较简单得到完全分别了。当然接受粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说或许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后

5、也就减小了部分挥霍）。现在见到的柱子径高比一般在1：5-10,书中写硅胶量是样品量的3040倍，实在的选择要实在分析。假如所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.20.4,杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm20cm的柱子）；假如相差不到0.1,就要加大柱子，我觉得可以加添柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。关于无水无氧柱，适用于对氧，水敏感，易分解的产品。可以湿柱，也可以干柱。不过在样品之前至少要用溶剂把柱子饱和一次，由于溶剂和硅胶饱和时放出的热量有可能是产品分解，终归要分别的是敏感的东东，当心不为过。也是由于分别的东西

6、比较敏感，所以接收瓶确定要用可密封的，遵奉并服从schlenk操作。至于是加压、常压、减压，随需而定。由于是schlenk操作，所以点板是个问题，假如样品是显色的，恭喜了，不用点板，直接看柱子上的色带就行了。假如样品无色，只好准备几十个schlenk瓶，一瓶一瓶的点，不过几次之后就知道样品在哪，也就可以省些了。像我以前过一根无水无氧柱，需要六个schlenk,现在只一个就能把所要的全收集到。无水无氧柱中用的比较多的是用氧化铝作固定相。由于硅胶中有大量的羟基暴露在外，很简单是样品分解，特别是金属有机化合物和含磷化合物。而氧化铝可以做成碱性、中性和酸性的，选择余地比较大，但是比硅胶要贵些。听说有个

7、方法，就是用石英做柱子，然后用HF254做固定相，这样在柱子外面用紫外灯一照就知道产品在哪里了，没有验证过。关于湿法、干法上样。湿法省事，一般用淋洗剂溶解样品，也可以用二氯甲烷、乙酸乙酯等，但溶剂越少越好，不然溶剂就成了淋洗剂了。很多样品在上柱前是粘乎乎的，一般没关系。可是有的上样后在硅胶上又会析出，这一般都是比较大量的样会显现，是由于硅胶对样品的吸附饱和，而样品本身又是比较好的固体才会发生，这就应当先重结晶，得到大部分的产品后再柱分，假如不能重结晶那就不管它了，直接过就是了，样品随着淋洗剂流动会溶解的。有些样品溶解性差，能溶解的溶剂又不能上柱（比如DMF,DMSO等，会随着溶剂一起走，显色是

8、一个很长的脱尾），这时就必需用干法上柱了。样品和硅胶的量有一种说法是，我觉得是越少越好，但是要保证在旋干后，不能看到明显的固体颗粒（那说明有的样品没有吸附在硅胶上）。溶剂的选择。当然是较为便宜，最安全，最环保的了。所以大多选用石油醒，乙酸乙酯。文献中有写用正己烷的，太贵了，除非特别需要不要用不然银子哗哗的，流的比淋洗剂还快，不过由于极性很小，有时还是非它不可。乙醴也可以用，但是就是简单睡觉，注意保持清醒别让溶剂流干了，那样柱子也就不爽了。二氯甲烷也有用的，但是要知道，它和硅胶的吸附是一个放热过程，所以夏天的时候常常会在柱子里产生气泡，天气冷的时候会好一些。甲醇，据说能溶解部分的硅胶，所以产品假

9、如想过元素分析的话要留神，应当经过后继处理，比如说重结晶等。其他的溶剂用的相对较少，要依个人的不同需要选择了。由于某些原因，用到的淋洗剂多是大包装的（便宜嘛），我们这里是用10升或25升的塑料桶装的,就要注意这些工业品的纯度是较低的。常常能够从送来的大桶底部看到有色的杂质，其他的杂质就可想而知了，所以在比较严格的柱分时就要对溶剂重蒸。当然过原材料时就可以免去这一步了，反正下面还有提纯的方法。另外溶剂在过柱子后可以也回收使用，一方面环保，另一方面也能节省部分经费，缺点是要消耗确定的人工。这里要注意的是，一般在过柱同时进行的是减压旋蒸，石油酸和乙酸乙酯的比例由于挥发度的不同会导致极性的变化，一般会

10、使得极性变大，在梯度淋洗时比较合适，正好极性越来越大了。在过完柱子后，溶剂最后回收要接受常压，由于在减压旋蒸时会有部分低沸点的杂质一起出来，常压时就会削减这种现象，假如杂质和你下面要过的样品有反应那就惨了。关于操作问题。1装柱。柱子下面的活塞确定不要涂润滑剂，会被淋洗剂带到产品中的,可以接受四氟节门的。干法和湿法装柱觉得没什么区分，只要能把柱子装实就行。装完的柱子应当要适度的紧密（太密了淋洗剂走的太慢），确定要均匀（不然样品就会从一侧斜着下来）。书中写的都是不能见到气泡，我觉得在大多数情况下有些小气泡没太大的影响，一加压气泡就全下来了。当然假如你装的柱子总是有气泡就说明需要多练习了。但是柱子更

11、忌讳的是开裂，甭管竖的还是横的，都会影响分别效果，甚至作废！2加样。用少量的溶剂溶样品加样，加完后将下面的活塞打开，待溶剂层下降至石英砂面时，再加少量的低极性溶剂，然后再打开活塞，如此两三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗剂，一开始不要加压，等溶样品的溶剂和样品层有一段距离（24cm就够了），再加压，这样避开了溶剂（如二氯甲烷等）夹带样品快速下行。3淋洗剂的选择。感觉上要使所需点在rf0.20.3左右的比较好。不要认为在板上爬高了分的比较开，过柱子就用那种极性，假如rf在0.6,即使相差0.2也不简单在柱子上分开，由于柱子是一个多次爬板的状态，可以通过公式的比较：0.6/0.8一次的分别

12、度，确定不如（0.2/0.3）的三次方或四次方大。4样品的收集。用硅胶作固定相过柱子的原理是一个吸附与解吸的平衡。所以假如样品与硅胶的吸附比较强的话，就不简单流出。这样就会发生,后面的点先出，而前面的点后出。这时可以接受氧化铝作固定相。另外，收集的试管大小要以样品量而定，特别是小量样品，假如用大试管，可能一根就收到了三个样品，WUWUo假如都用小试管那工作量又太大。5最后的处理。柱分后的产品，由于使用了大量的溶剂，其中的杂质也会累积到产品中，所以假如想送分析，可以用少量的溶剂洗涤一下，由于大部分的杂质是溶在溶剂里的，一洗基本就没了，必要时进行重结晶。色谱柱的安装：（1）拆开柱包装盒，确认色谱柱

13、的类型、尺寸、出厂日期以及柱内贮存的溶剂。（2）拧下柱两端接头的密封堵头放回包装盒供备用。（3）按柱管上标示的流动相流向，将色谱柱的入口端通过连接管与进样阀出口相连接（如条件允许，建议在柱前使用保护柱）；柱的出口与检测器连接。连接管是外径为1.57mi内径为0.10.3mm的不锈钢管。连接管的两端均有空心螺钉及密封用压环。在接管时确定要设法降低柱外死体积。连接管通过空心螺钉、压环后尽量用力插到底，然后顺时针拧紧空心螺钉，直到拧不动为止，再用扳手连续顺时针拧1/41/2圈，切记不要用力过大。如色谱柱通过流动相加压后有漏液现象，请用报手连续顺时针拧1/4圈，直至不漏液为止。色谱柱的储存:1 .防止缓冲溶液和水溶液流动相产生微生物，做到流动相用多少配多少，或在水流动相中加200PPm的叠氮钠以抑制细菌成长（确定当心其毒性和潜在的爆炸性）；或在流动相中加20%的有机改性剂，也可抑制微生物生长，有机改性剂还有助于流动相脱气。2 .尽可能将色谱柱贮存于100%有机溶剂（乙晴比较好）中，避开在缓冲溶液中保存。3 .使用缓冲溶液后的色谱柱，应用1520倍柱体积的不含缓冲剂的同种水有机溶剂流动相冲洗色谱柱，后换成100%有机溶剂储存。4 .避开用纯洁水冲洗键合致密的C18柱。5 .将色谱柱的两端用堵头拧好，以免柱床填料干裂。