血浆蛋白和尿微量蛋白检测及其临床应用　.ppt

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1、n血浆蛋白的组成十分复杂，目前还不知道血浆蛋白的确切种类和数量。保守地估计组成性血浆蛋白约有500种，它们多为糖蛋白,血浆蛋白是血浆固体成份中含量最多、组成复杂、功能广泛的一类化合物。占血浆固体成份90%左右,目前已经研究的血浆蛋白质有300多种,分离出的纯品约100来种，除免疫球蛋白外，主要由肝细胞合成。血浆蛋白执行着人体的许多生物功能，在人类健康与疾病中有着重要的意义，人类很多疾病可引起血浆和体液中的蛋白质性质和含量的改变，因此，测定和分析血浆和体液中的蛋白质变化在临床上有重要价值。n尿微量蛋白是指用常规定性或定量方法难以检出的一些蛋白质。尿微量蛋白的检测对早期原发肾脏病及其他相关疾病引发

2、的早期肾脏病变的诊断和治疗 有着非常重要的价值，尿微量蛋白的检测为临床上监测肾脏及某些其他器官功能状态，提供了可靠指标。目前已检出的尿微量蛋白种类、数量较多，其各自的理化特性、合成部位、生理功能都不尽相同。我们科目前已开展检测的有：尿白蛋白（AIb）、尿转铁蛋白（TRF）、尿IgG、尿轻链（、）、尿2微球蛋白（2M）、尿1微球蛋白（1 M）、尿NAG等。n一、血浆蛋白和尿微量蛋白测定方法的进 展n二、各种血浆蛋白和尿微量蛋白检测的临 床应用n一、血浆蛋白和尿微量蛋白测定方法的进展n（一）比色法、比浊法n（二）电泳分离法n（三）免疫测定法n（一）比色法、比浊法n早期人们用比色法、比浊法测定人体血

3、浆和体液中的蛋白质，如用双缩脉法、溴甲酚绿法测定血浆中的总蛋白、白蛋白等，用磺基水杨酸测定尿液中的蛋白质，这二种方法的优点是操作简单，重复性好，试剂稳定，成本低。但灵敏度和特异性较低，适用于测定人体中的常量蛋白。而对于人体中含量少的微量蛋白和一些特殊蛋白用上述方法就无法进行检测。n（二）电泳分离法n电泳法分离法，最初以滤纸作为支持物，后来发展为醋酸纤维膜、琼脂糖凝胶、聚丙烯胺凝胶作为支持物，对血清和体液中的蛋白质进电泳分离，早期的滤纸和醋酸纤维膜作支持物可将血清蛋白分为白蛋白，1球蛋白、2球蛋白、球蛋白和-球蛋白等。现在用聚丙烯胺作为支持物的电泳方法，可分离 100 种以上的血清蛋白质，可对尿

4、液中的蛋白质进行分离。电泳法优点是可较好地分离血清和体液中蛋白，其缺点是操作繁琐 ，试验时间长。n（三）免疫测定法n1 免疫扩散法 n其存在较多缺点，如操作繁琐，试验需要时间较长（18-48小时），定量精确度差等。n2 免疫电泳法 n虽有较高的分辩力，但蛋白质在图谱上定位困难，且不能定量，临床应用范围不广，仅用于异常蛋白成分检测。n3 免疫浊度法 免疫浊度测定免疫浊度测定Ag Ab 免疫比浊测定免疫比浊测定 免疫浊度法是利用抗原、抗体在缓冲液中反应，形成抗原-抗体免疫复合物颗粒，此复合物颗粒分子量较大，在缓冲液形成沉淀析出，使反应液产生浊度，在抗体过量的前提下，通过光束时，悬浮的免疫复合物颗粒

5、所产生的透射、散射光速率变化强弱与抗原浓度成正比。速率峰值经微电脑处理转换成抗原浓度。特点是敏感、精确、快速、和简便。n免疫浊度法根据检测器的位置及接收光信号的性质分为：n透射比浊法n散射比浊法n透射比浊法和散射比浊法检测示意图测定原理测定原理 速速 率率 散散 射射 法法 定定 时时 动动 态态 二 各种血浆蛋白和尿微量蛋白检测的 临床应用我科的西门子特定蛋白仪可我科的西门子特定蛋白仪可检测项目检测项目ADnase B Albumin1-Antitrypsin1-acid-glycoprotein2-macroglobulinApo A-IApo A-IIApo BApo EASLAT-II

6、I2-microglobulin血清血清/血浆血浆:C1-inhibitorC3C4CeruloplasminFerritinFibrinogenFibronectinHaptoglobinHemopexinIgAIgEIgGIgG-subclasses 1-4IgMIg-light chain,kappaIg-light chain,lambdaLp(a)MyoglobinPlasminogenPrealbuminRetinol binding proteinRFTotal proteinTransferrin测试项目测试项目Albumin1-microglobulin2-macroglob

7、ulin2-microglobulinIgGIg-light chain,kappaIg-light chain,lambdaTotal protein Transferrin尿液尿液AlbuminIgAIgGIgMTotal proteinCSF 60个测试项目个测试项目IgApIgMpIgEs血清血清/血浆血浆涵盖最广泛的临床检测指标涵盖最广泛的临床检测指标 :我科已开展的血浆和体液特定蛋白项目我科已开展的血浆和体液特定蛋白项目:nIgA、IgG、IgM、K-轻链、L-轻链、C3、C4、Cystatin C、ALB、TRF、IgG、1-M、2-M、TP、NAG、apoA-I、apoB、Lp

8、(a)、肌红蛋白、肌钙蛋白I、肌钙蛋白T、HCY、纤维蛋白原、hsCRP、RF、ASO、CRP、AAG、CER、PA、RBP等。感染性疾病n在炎症和组织坏死时，血浆某些蛋白质会出现特征性的变化，称为急性时相反应。这些指标比传统的炎症指标如发热、白细胞升高及分类异常、血沉加速能更早期反映炎症和和感染情况。另外，急性时相反应蛋白增加的持续时间不一样，因此，有助于准确判断炎症的发展过程。n急性时相反应蛋白急性时相反应蛋白n急性时相反应蛋白定义为发生感染情况下浓度改变超过25%.n一些急性时相反应蛋白的浓度会减少，但大多数会增高。急性时相蛋白急性时相蛋白敏感性比较敏感性比较 CRP 特性特性CRP 临

9、床应用临床应用CRP 参考范围参考范围CRP 炎症炎症-抗生素治疗抗生素治疗2001801601401201008060401 2 3 4 5 6 7 8 9 10CRP mg/LCRP 20mg/LDAY 炎症C 反应蛋白抗生素治疗CRP 炎症：手术后炎症：手术后-无并发症无并发症30.025.015.010.05.00.00 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10CRP mg/LCRP 炎症：手术后炎症：手术后-并发症并发症30.025.015.010.05.00.00 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10CRP mg/L WBC X10*20.018.016.014.012.010

10、.08.0+39体温体温3837*+CRP 白细胞体温血清淀粉样蛋白血清淀粉样蛋白A(SAA)n免疫系统激活的一个标志物n不像，在肝脏合成SAA 作为急性异体排斥反应的标志物作为急性异体排斥反应的标志物第一次排异发生在手术后第2天，SAA出现一个峰值。第二次排异症状出现之前，SAA又一次升高。使用抗胸腺球蛋白治疗后，排异反应得到控制，CRP变化不明显。心血管疾病心血管疾病nhsCRPnAPOA1nAPOBnLPanHCYhsCRPn心血管疾病风险因子心血管疾病风险因子n 3 mg/L 高度风险高度风险CRP 单独还是和其他危险因子一起做？单独还是和其他危险因子一起做？n肌钙蛋白（肌钙蛋白（Tr

11、oponin）是心肌坏死的标志物）是心肌坏死的标志物 n 短期的预示短期的预示n CRP 反映冠心病的潜在的炎症过程反映冠心病的潜在的炎症过程n 长期的预示长期的预示n CRP 和肌钙蛋白是独立的、外加的危险预测项目和肌钙蛋白是独立的、外加的危险预测项目n 对不稳定心绞痛的病人应将对不稳定心绞痛的病人应将CRP n 和肌钙蛋白和肌钙蛋白 I 或或 T 结合起来结合起来CRP检测检测-作为初级风险评估作为初级风险评估CRP的预后价值：在不稳定心绞痛病人中预测存活率的预后价值：在不稳定心绞痛病人中预测存活率一年累计存活率：一年累计存活率：CRP 3CRPn治疗性地改变生活方式n停止吸烟n控制体重n

12、减少食物中脂肪和胆固醇含量n增加体育锻炼 n 肾脏疾病肾脏疾病肾脏疾病肾脏疾病肾脏疾病 肾脏疾病肾脏疾病 降低肾脏损害的早期指标肾脏损害的早期指标n尿微量蛋白nCystatin C 12,000肾小管损伤27,000肾小管损伤（肾小管重吸收功 能的标志物）白蛋白67,000肾小球损伤（早期/标志电荷屏 障功能受损）转铁蛋白80,000肾小球损伤（选择性）IgG150,000肾小球损伤（非选择性）720,000肾后性损伤尿液中特定蛋白标记物尿液中特定蛋白标记物尿液中特定蛋白标记物尿液中特定蛋白标记物肾小球性滤过增加白蛋白、转铁蛋白、IgG肾小管性重吸收降低溢出性血浆水平增高正常的尿蛋白模式正常的

13、尿蛋白模式n试纸条检测蛋白阴性肾小球蛋白尿肾小球蛋白尿肾小管蛋白尿肾小管蛋白尿肾小球肾小球-管性混合蛋白尿管性混合蛋白尿肾前性蛋白尿肾前性蛋白尿n只要不存在肾小球损伤，n试纸条蛋白检测通常是阴性的。肾后性蛋白尿肾后性蛋白尿 一种内生性非糖基化单链带正电的蛋白质 由120个氨基酸组成，分子量为13.360KD 属半胱氨酸蛋白酶抑制剂大家族内的成员之一 等电点为9.3 所有的有核细胞都能稳定地产生Cystatin C 广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中，其中包括血液、尿液、脑脊液 泪液、胸腹水、精囊液和唾液 经肾小球滤过，在肾小管内全部降解Cystatin C Cystatin C 儿童儿童 8

14、0 yn=42n=212n=258n=51n=214n=1840.00.51.01.52.02.53.03.54.0N Latex Cystatin C(mg/L)(Box-and-Whisker 图形显示图形显示 10th、25th、50th、75th 和和 90th 白分位白分位)Price&Newman,London/UK0.40.60.81.01.21.41.61.8n=124n=134n=124n=1340.40.60.81.01.21.41.61.8(Box-and-Whisker Plots showing 10th,25th,50th,75th and 90th percentiles)Cystatin C N Latex Cystatin C Reference RangesCystatin C n