移植免疫及其免疫检测.ppt

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1、移移 植植 免免 疫疫19541954年年1212月月2323日，世界日，世界上第一例成功器官移植上第一例成功器官移植手术在美国波士顿进行手术在美国波士顿进行19601960年，吴阶平教授开年，吴阶平教授开展了国内首例肾移植。展了国内首例肾移植。后排左起为后排左起为约瑟夫约瑟夫E E默里默里、约翰、约翰梅梅瑞尔和哈特维尔瑞尔和哈特维尔哈里森医师哈里森医师前排为接受手术的孪生兄弟前排为接受手术的孪生兄弟 机体接受其他个体的细胞，组织或器官后，机体接受其他个体的细胞，组织或器官后，机体与移植物相互作用所产生的免疫应答。机体与移植物相互作用所产生的免疫应答。宿主抗移植物反应宿主抗移植物反应（host

2、 versus graft rejection，HVGR）移植物抗宿主反应移植物抗宿主反应（graft versus host rejection，GVHR）供者供者(donor)移植物移植物(graft)受者或宿主受者或宿主(recipient or host)移植免疫：移植免疫：按供受者之间的关系：按供受者之间的关系：自体移植自体移植同系移植同系移植同种异基因移植同种异基因移植异种移植异种移植按移植物的来源：按移植物的来源：尸体供移植尸体供移植活体供移植活体供移植recipient移植的分类：移植的分类：（一）主要组织相容性抗原（一）主要组织相容性抗原组织相容性：组织相容性：组织器官移植时

3、，供受者相互接受的程度。组织器官移植时，供受者相互接受的程度。组织相容性抗原组织相容性抗原/移植抗原：移植抗原：存在于组织细胞表面的决定存在于组织细胞表面的决定组织相容性组织相容性的同的同种异型表位。种异型表位。引起强排斥引起强排斥主要组织相容性抗原主要组织相容性抗原引起弱排斥引起弱排斥次要组织相容性抗原次要组织相容性抗原第一节第一节 引起排斥反应的靶抗原引起排斥反应的靶抗原主要组织相容性复合体主要组织相容性复合体（major histocompatibility comlex，MHC）指编码指编码主要组织相容性抗原主要组织相容性抗原的一组的一组紧密连锁的基因群。不仅在控制移植紧密连锁的基因群

4、。不仅在控制移植排斥反应中起重要作用，而且在免疫排斥反应中起重要作用，而且在免疫应答和免疫调节中起重要作用。应答和免疫调节中起重要作用。HLA复合体与复合体与HLA分子分子/系统系统HLA复合体复合体1.1.定位：定位：2.2.结构：结构：HLAHLA类基因区类基因区HLAHLA类基因区类基因区HLAHLA类基因区类基因区HLA分子分子触发移植排斥的抗原：触发移植排斥的抗原：类分子类分子尤以尤以HLADR最重要最重要,其次其次B、A、DQ、DP（二）次要组织相容性抗原（二）次要组织相容性抗原（mHAmHA）（三）其他组织相容性抗原（三）其他组织相容性抗原1.ABO1.ABO抗原系统：抗原系统：

5、*供者与受者供者与受者ABOABO血型不配合血型不配合 受者血清抗体与移植物血管内皮细胞表受者血清抗体与移植物血管内皮细胞表面的面的ABOABO抗原结合抗原结合 血管内皮细胞损伤和血管内凝血血管内皮细胞损伤和血管内凝血2.2.组织特异性抗原：组织特异性抗原：移植排斥强度：皮肤肾肝脏移植排斥强度：皮肤肾肝脏第二节第二节移植排斥反应的种类及发生机制移植排斥反应的种类及发生机制一、宿主抗移植物反应（一、宿主抗移植物反应（HVGR）（一）超急性排斥反应（一）超急性排斥反应 移植物血液循环恢复后数分钟至移植物血液循环恢复后数分钟至1 12 2天内发天内发生的不可逆的生的不可逆的体液体液排斥反应。排斥反应

6、。原因：受者体内预存抗供者的原因：受者体内预存抗供者的AbAb：供、受者间供、受者间ABOABO等血型不符；等血型不符；受者血液中含有抗供者白细胞，血小板的受者血液中含有抗供者白细胞，血小板的AbAb；非免疫因素：如灌流冲洗不彻底等。非免疫因素：如灌流冲洗不彻底等。（二）急性排斥反应（二）急性排斥反应最常见最常见 移植后移植后1周周3个月内发生的排斥个月内发生的排斥（一）直接识别（一）直接识别(direct recognition)：受者受者T T细胞细胞TCRTCR特异性特异性识别识别供者供者APCAPC表面的表面的同种异型同种异型MHCMHC抗原。抗原。T T细胞细胞MHCMHC抗原抗原

7、受者受者 供者供者（2 2）间接识别）间接识别(indirect recognition)：机制：机制：等同于普通等同于普通外源性外源性AgAgCD4CD4T T*特点：特点：出现较晚，强度弱出现较晚，强度弱（三）慢性排斥反应（三）慢性排斥反应 发生于移植后数月、甚至数年，是影响发生于移植后数月、甚至数年，是影响移植器官长期存活的主要障碍。移植器官长期存活的主要障碍。二、移植物抗宿主反应二、移植物抗宿主反应 (GVHR)(GVHR)移植物中淋巴细胞，识别受者的同种异移植物中淋巴细胞，识别受者的同种异型抗原，诱发针对受者的排斥反应。型抗原，诱发针对受者的排斥反应。发生条件：发生条件：移植物中含一

8、定数量成熟的淋巴细胞移植物中含一定数量成熟的淋巴细胞(T(T细胞细胞)；供、受者间组织相容性差供、受者间组织相容性差;宿主的免疫功能状态低下。宿主的免疫功能状态低下。常见于：常见于：骨髓、胸腺、脾等移植或大量输血后骨髓、胸腺、脾等移植或大量输血后机制：机制：供者供者CD4CD4+T T细胞识别宿主细胞识别宿主MHCMHC抗原抗原临表：临表：炎症性疾病，皮疹、腹泻、肺炎等。炎症性疾病，皮疹、腹泻、肺炎等。Graft versus host disease一、血清学分型法一、血清学分型法（Serological Typing）HLA-A、B、C、DR、DQ抗原可用血清学抗原可用血清学方法鉴定，故称

9、为方法鉴定，故称为SD抗原（抗原（Serological defined antigen）方法：方法：TerasakiTerasaki等改良的等改良的微量补体依赖的细微量补体依赖的细胞毒试验（胞毒试验（CDC test）该方法简便易行、结果可靠、重复性好，被该方法简便易行、结果可靠、重复性好，被美国国立卫生研究院（美国国立卫生研究院（NIHNIH）认可）认可,成为国际通成为国际通用的标准技术用的标准技术第三节第三节 HLA的分型的分型原理：原理：用一系列已知用一系列已知抗抗HLA的标准分型的标准分型血清血清与与待测淋巴待测淋巴细胞细胞混合混合，借助，借助补体补体的生物学作的生物学作用介导细胞裂

10、解，用介导细胞裂解，死亡的细胞可被死亡的细胞可被染料着色。染料着色。待测待测淋巴淋巴细胞细胞标准标准抗血清抗血清补体补体二、细胞分型法（二、细胞分型法（Cellular TypingCellular Typing）HLA-HLA-类抗原中的类抗原中的D D、DPDP抗原过去采用细胞抗原过去采用细胞分型法检测，故又称分型法检测，故又称LDLD抗原抗原（lymphocyte defined antigen）以以混合淋巴细胞培养混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture，MLC）为基本技术的）为基本技术的HLAHLA分型法。分型法。两个个体淋巴两个个体淋巴细胞体外培养细胞体外

11、培养LDLD抗原相同抗原相同,不发生刺激不发生刺激LDLD抗原不相容抗原不相容,相互刺激转化相互刺激转化可分为可分为 单向单向MLC双向双向MLC-判断待检细胞的判断待检细胞的HLA型型别别/LC反应强度的指标反应强度的指标-异体器官移植前的异体器官移植前的HLA配型配型三、分子生物学分型法三、分子生物学分型法 P388P388基本原则：基本原则：供者与受者间供者与受者间HLAHLA尽可能相符，以降尽可能相符，以降低移植物组织抗原的免疫原性低移植物组织抗原的免疫原性 非特异性抑制受者的免疫应答非特异性抑制受者的免疫应答 诱导受者对移植物的特异性免疫耐受诱导受者对移植物的特异性免疫耐受第四节第四

12、节 排斥反应预防与治疗排斥反应预防与治疗（一）选择合适的供者（一）选择合适的供者多数情况下只检测多数情况下只检测HLA-A、B、DR不同的器官移植对不同的器官移植对HLA配型的要求有所不同配型的要求有所不同 骨髓等对骨髓等对HLA配型要求很高配型要求很高 肾、心脏、胰腺等，肾、心脏、胰腺等，HLADR配型重要配型重要 肝、肺肝、肺/心移植主要要求心移植主要要求ABO血型配合，不血型配合，不作作HLA配型对移植后果无明显影响。配型对移植后果无明显影响。1.HLA配型配型 常用方法是常用方法是CDC test、MLC2.2.HLAHLA交叉配型交叉配型与检测预存抗体与检测预存抗体（1 1）淋巴细胞

13、交叉配合试验）淋巴细胞交叉配合试验 无论抗体是针对无论抗体是针对类还是类还是类类HLAHLA，只要，只要细胞毒性超过细胞毒性超过10%10%，则表明受者体内已有细，则表明受者体内已有细胞毒性抗体，应另选供者；若小于胞毒性抗体，应另选供者；若小于10%10%则为则为阴性，表明供受者匹配。阴性，表明供受者匹配。（2 2）T T细胞淋巴细胞毒性交叉配型细胞淋巴细胞毒性交叉配型 无论反应水平高低，均为移植的禁忌症无论反应水平高低，均为移植的禁忌症（3 3）B B细胞淋巴细胞毒性交叉配型细胞淋巴细胞毒性交叉配型（4 4）自身交叉配型）自身交叉配型（肾常规项目）（肾常规项目）受者血清供者细胞受者血清供者细

14、胞（二）移植物与受体的预处理（二）移植物与受体的预处理1.1.对移植物进行预处理对移植物进行预处理 移植术前应充分清除移植物中的过客白移植术前应充分清除移植物中的过客白细胞，以减轻排斥反应细胞，以减轻排斥反应2.2.受体的准备受体的准备 移植前应用一定的免疫抑制剂可有效的移植前应用一定的免疫抑制剂可有效的提高器官移植的成功率。提高器官移植的成功率。（三）免疫抑制措施（三）免疫抑制措施1.1.免疫抑制剂的应用免疫抑制剂的应用 抑制代谢药物和激素抑制代谢药物和激素：常用的是硫唑嘌呤：常用的是硫唑嘌呤和环磷酰胺。和环磷酰胺。抑制抑制T T细胞活化的药物细胞活化的药物 ：环孢菌素：环孢菌素A(CsAA

15、(CsA)抗体及其他生物制剂抗体及其他生物制剂 ：针对免疫细胞表：针对免疫细胞表面抗原的单克隆抗体可用于抑制相应免疫面抗原的单克隆抗体可用于抑制相应免疫细胞活化及功能细胞活化及功能2.2.免疫耐受的诱导免疫耐受的诱导（一）体液免疫水平检测（一）体液免疫水平检测相关的免疫指标主要有相关的免疫指标主要有ABOABO血型抗体、其他血型抗体、其他血型抗体、血型抗体、HLAHLA抗体、抗供者组织细胞抗抗体、抗供者组织细胞抗体、血管内皮细胞抗体等。体、血管内皮细胞抗体等。常用各种交叉配型、常用各种交叉配型、CDCCDC试验等进行检测。试验等进行检测。第四节第四节 排斥反应的免疫检测排斥反应的免疫检测（二）

16、细胞免疫水平检测（二）细胞免疫水平检测包括参与细胞免疫的有关细胞数量、功能和包括参与细胞免疫的有关细胞数量、功能和细胞因子水平的检测细胞因子水平的检测1.1.外周血外周血T T细胞及其亚类的计数细胞及其亚类的计数2.4hT2.4hT细胞转化试验细胞转化试验 取受者取受者PBMCPBMC加入标记物直接培养加入标记物直接培养4 4小时掺小时掺入法测其转化率，以预报急性排斥反应危象入法测其转化率，以预报急性排斥反应危象3.NK3.NK细胞活性测定细胞活性测定4.4.血清细胞因子的测定血清细胞因子的测定（三）补体水平的检测（三）补体水平的检测 补体的数量及活性与急性移植排斥反应补体的数量及活性与急性移植排斥反应的发生有密切关系的发生有密切关系（四）急性时相反应物质的检测（四）急性时相反应物质的检测 C C反应蛋白（反应蛋白（CRPCRP）、）、IL-1IL-1、IL-6IL-6、TNF-TNF-等是发生炎症的标志性分子等是发生炎症的标志性分子移植免疫及其免疫检测移植免疫及其免疫检测教学要求：教学要求：1.1.掌握移植免疫的概念及移植排斥反应的基本掌握移植免疫的概念及移植排斥反应的基本类型；类型