细胞培育用到的仪器设备使用注意事项.docx

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1、细胞培育用到的仪器设备使用注意事项组织细胞培育室除一般试验室的一般常规设备外，尚有一些特别需要的设备。基本可分为两大类：第一类为常用的基本仪器设备；第二类为较高级的特别设备；而且这些不同种类的仪器设备在实在使用时又需要注意一些注意事项，其基本实在情况如下。1、常用的基本设备(1)仪器:a)显微镜：倒置显微镜一一是组织细胞培育室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于把握细胞的生长情况并察看有无污染等。一一若有条件，尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微镜、荧光显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，以便随时察看、记录、摄影细胞生长情况。a）培育箱：体外培育的细胞和体内细胞一样，需要在恒定

2、的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37（,温差变化一般不应超过士0、5,细胞在温度上升2。C时，持续数小时即不能耐受，40以上将很快死亡.因此需要有能掌控温度的培育箱，如具有较高灵敏度的恒温培育箱及C02培育箱。恒温培育箱一一应选隔水式或晶体管自控温培育箱，此类培育箱灵敏度高，温度掌控较稳定。一般的恒温培育箱价格较便宜，其缺点是只宜于作密闭式培育。C02培育箱目前多数的细胞培育室已广泛使用。C02培育箱的优点是能够供应进行细胞培育时所需要的确定量的C02（常用浓度为5%）,易于使培育液的PH保持稳定，适用于开放或半开放培育。培育细胞的器皿可用培育皿、培育板或培育瓶；当使用培育瓶时，可将瓶盖

3、略微漩松，使培育瓶内与外界保持通气状态。由于这种培育方法培育器皿内部与外界相通，培育箱内空气必需保持清洁，应定期以紫外线照射或酒精消毒。同时培育箱应放置盛有无菌蒸得水的水槽，防止培育液蒸发,使箱内相对湿度始终保持为100%。c）干燥箱：用于细胞培育箱的有些器械、器皿需要烘干后才能使用，玻璃器皿等须干热消毒.干热消毒时，电热干燥箱升温较高，一般需达到160。C以上。通常使用鼓风式电热干燥箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100。C时，停止鼓风，应避开包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后，不能立刻打开箱门以免骤

4、冷而导致玻璃器皿损坏，应等候温度自然下降至100C以下方可开门。d）水纯装扮置：细胞培育对水的质量要求较高，细胞培育以及与细胞培育工作相关的液体的配制用水必需事先严格纯化处理。水纯化时可接受离子交换装置或蒸储器。离子交换纯水尚不能有效去除有机物，因此用水时尚需再次蒸偷。进行细胞培育时配制各种培育液及试剂等均需使用三次蒸偏水：即使是用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸俯水。目前国内使用较多的是自动双重纯水蒸储器(石英管加热)，使用便利，安全、蒸修速度快(1600mlh)o使用注意:Oa不可接受一般自来水蒸储，以免蒸储器内很快结成水垢影响蒸僧效果；同时，还需视蒸储器内存水垢程度定期彻底清洗蒸锵器

5、.Ob正确的使用方法是将经金属蒸僧器蒸僧的蒸储水加入玻璃蒸储器内进行再次蒸储。一般配制培育液的用水应在配液前蒸储，不宜使用存放数日的三蒸水，以免影响培育用水的质量。目前市场上供应的是含有各种级别和类型的接受一种或多种纯化方法相结合的使一般水纯化为纯水和超纯水的纯水系统可供选择。例如：设计快捷的可以挂壁、也可为台式，也可以有储水箱、也可直接用分液枪的纯水装置；还可依据各类试验用水需求选择配备有效杀菌或去除DNA酶、RNA酶、蛋白酶等，甚至可有效去除掉热源、内毒素的超滤型纯水器。e)冰箱：细胞培育室必需配备Oa一般冰箱或冷藏柜一一储存培育液、生理盐水、Hanks液试剂等培育用的物品及短期保存组织标

6、本OOb低温冰箱(一20()、超低温冰箱。用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等。细胞培育室的冰箱应属专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。f）细胞冷冻储存器：储存器常用的是液氮容器。依据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小,取放使用便利及液氮挥发量（经济）三种因素.液氮容器的大小可自25L500L,可以储存Iml的安甑250-15000个左右。液氮温度可低达一196（,使用时应防止冻伤。由于液氮不断挥发，应注意察看存留液氮情况，适时定期补充液氮，避开挥发过多而致细胞受损。目前，国内各类试验室已广泛使用新型的细胞

7、冷冻储存器。市场所供应的各种新型的细胞冷冻储存器具有性能优异，使用便利等特点,例如：一一可通过先进的电子掌控器实现冻存自动化并监测液氮水平和样品温度，确保样品温度始终处于设定温度点；一一可配备先进的报警系统，分别警报液氮液面、温度、电池、电压、电源等失常情况：一一同时具备热气体旁路系统，防止高于一130。C的暖空气进入液氮罐，从而更有效地保护样品，防止升温.另外，多种规格的先进液氮运输，供应罐系列不仅移动便利，还可通过连接管给储存罐补充液氮，提高工作效率，保证样品安全。g）离心机：进行细胞培育时，常规需要进行制备细胞悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用离心机.Oa一般可常规配

8、置4000rpm的国产台式离心机，例如细胞沉降，使用80100g的离心机即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。Ob另外，可依据需要添置其他类型如大容量或可调整温度的离心机等Oc若需特别用途,例如某些细胞的分别制备需梯度离心，则需另行配置试验所需的具备其他特别功能的离心机。h）天平：常用的有扭力天平、精密天平及各种电子天平。分析天平的感量为0、InIg、0、Olmg和0.OOlmgo依据称取物质的量和称量精度的要求，选择适合级别的天平。要求精密称定时，当取样量大于100mg选用感量为0.Img天平，在10010mg选用感量为0.Olmg天平，小于Ionlg选用感量为0、001Ing天平。i）消

9、毒器:直接或间接与细胞接触的物品均需消毒灭菌处理。2、特别设备细胞培育试验室除了应配备上述的常用基本设备以外，如有条件，可添置一些特别或先进的设备仪器，以便更有效、更精准明确、更深入地进行试验室工作。例如：（1）酶联免疫检测仪一一可用于进行免疫学测定及细胞毒性、药物敏感性检测等。（2）超低温冰箱（-85）便于储存某些试剂及标本。（3）旋转培育器一一用于某些特别细胞或需要收获大量细胞的培育。（4）荧光显微镜-进行荧光染色样本的察看。（5）流式细胞仪一一可更精准明确及快速检测细胞。（6）用于检测细胞培育条件的各种仪器，例如专门为快速分析细胞培育基中紧要或关键营养成分、代谢产物及气体含量设计的多功能细胞培育分析仪、手提式C02浓度测定仪等。