医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法.docx

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1、医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法1、测试方法本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。仪器1.培养皿：一般采用90mmX15mm规格的培养皿。2 .培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)或沙氏培养基(SDA)或用户认可并经验证了的培养基。3 .恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。4 .高压蒸汽灭菌器。测试步骤1 .测试前培养皿表面必须严格消毒。2 .将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开

2、培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。3 .静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上；动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h04 .全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。5 .采用大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)配制的培养皿经采样后，在3035培养箱中培养，时间不少于2d；采用沙氏培养基(SDA)配制的培养皿经采样后，在20C25C培养箱中培养，时间不少于5d。6 .每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。菌落计数1.用肉眼对培养皿上所有的菌落直接计数、标记或在菌落计数器上点计，然后用510倍放大镜检查，有否遗漏。2 .若平板上有2个或2个以上的

3、菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。注意事项1.测试用具要作灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。3 .采取一切措施防止人为对样本的污染。4 .对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。5 .由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落与培养基沉淀物的区别，必要时用显微镜鉴别。6 .采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。2、测试规则测试条件在测试之前,要对洁净室（区）相关参数进行预先测试，这类测试将会提供测试沉降菌的环境条件，例如：这种预先测试或可包括：a）温度和相对湿度的测试。洁净

4、室（区）的温度和相对湿度应与其生产及工艺要求相适应（无特殊要求时，温度在18C26C,相对湿度在45%65%为宜），同时应满足测试仪器的使用范围；b）室内送风量或风速的测试，或压差的测试；C）高效过滤器的泄漏测试。测试状态静态和动态两种状态均可进行测试。静态测试时，室内测试人员不得多于2人。沉降菌测试前，被测洁净室（区）由使用者决定是否需要预先消毒。测试报告中应标明测试时所采用的状态和室内测试人员数。测试时间1.在空态或静态a测试时，对单向流洁净室（区）而言，测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于IOnlin后开始。对非单向流洁净室（区），测试宜在净化空气调节系统正常运行时间不少于30mi

5、n后开始。在静态b测试时，对单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过IOmin自净后开始；对非单向流洁净室（区），测试宜在生产操作人员撤离现场并经过20min自净后开始。2.在动态测试时，则须记录生产开始的时间以及测试时间。沉降菌菌落数计算1 .采样点数量及其布置（1）最少采样点数目沉降菌测试的最少采样点数目可参照GB/T16292-2010o（2）采样点的位置沉降菌的采样点位置可参照GB/T16292-2010oa.工作区采样点位置离地0.8111.5m左右（略高于工作面）；b.可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。采样点布置的规则见附录A。2 .最少培养皿数在满足最少采样

6、点数目的同时，还宜满足最少培养皿数，见表1。洁净度级别最少培养皿数（90mm）1001410000210000023000002采样次数每个采样点一般采样一次。采样注意事项1.对于单向流洁净室（区）或送风口，采样器采样口朝向应正对气流方向；对于非单向流洁净室（区），采样口向上。3 .布置采样点时，至少应尽量避开尘粒较集中的回风口。4 .采样时，测试人员应站在采样口的下风侧，并尽量少走动。5 .应采取一切措施防止采样过程的污染和其他可能对样本的污染。6 .培养皿在用于检测时，为避免培养皿运输或搬动过程造成的影响，宜同时进行对照试验，每次或每个区域取1个对照皿，与采样皿同法操作但不需暴露采样，然后

7、与采样后的培养皿（TSA或SDA）一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。记录测试报告应包含以下内容：1 .测试者的名称和地址,测试日期；2 .测试依据；3 .被测洁净室（区）的平面位置（必要时标注相邻区域的平面位置）；4 .有关测试仪器及其测试方法的描述：包括测试环境条件，采样点数目以及布置图，测试次数，或可能存在的测试方法的变更，测试仪器的检定证书等；若为动态测试，则还应记录现场操作。5 .人员数量及位置，现场设备运转数量及位置等。6 .测试结果，包括所有统计计算资料。结果计算1 .用计数方法得出各个培养皿的菌落数。2 .每个测点的沉降菌平均菌落数的计算,见式（1）。rMl+Mt+*MeM

8、一,Y-R式中I平均篇我，M1I号培养IIflliW教，Mt2号堵葬,苜落0hM.号培养常政，R培，jftr.结果评定1.每个测点的沉降菌平均菌落数必须低于所选定评定标准中的界限。3 .在静态测试时，若某测点的沉降菌平均菌落数超过评定标准，则应重新采样两次，两次测试结果均合格才能判为符合。日常监控对于沉降菌的监控，宜设定纠偏限度和警戒限度，以保证洁净室（区）的微生物浓度受到控制。应定期检测以检查微生物负荷以及消毒剂的效力，并作倾向分析。静态和动态的监控都可以采用该方法。对于沉降菌的取样频次,如果出现下列情况应考虑修改,在评估以下情况后,也应确定其他项目的检测频次：1 .连续超过纠偏限度和警戒限

9、度；2 .停工时间比预计延长；3 .关键区域内发现有污染存在；4 .在生产期间,空气净化系统进行任何重大的维修；5 .日常操作记录反映出倾向性的数据；6 .消毒规程的改变；7 .引起生物污染的事故等；8 .当生产设备有重大维修或增加设备时；9 .当洁净室（区）结构或区域分布有重大变动时。谪冷室（区）果棒点布置A.1洁净室区）采样点布置宜力求均匀避免采样点在局部区域过于。藐.下列多点采样的采样点布置图示可作参考（见图A.】）A.2100锻单向漉区域泊冷工作台或局邮空气冷化设*的采样点宜布置在正对气施方向的工作面上气漉形式可参考图A.2.图A.3.B二二二一IXXEXlmini图fflA.3直单向虢的气St彩式