DNS比色法测定淀粉含量 （鲜样）03（新）.docx
DNS比色法测定淀粉含量1、实验原理：本文利用淀粉是多糖聚合物的特点,经酸将淀粉转化为还原糖，3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。2、仪器、试剂与样品2.1、 仪器：紫外可见分光光度计，电子天平，电热恒温水浴锅，冰箱，烘箱，100mk250m1.2000mk的容量瓶,棕色试剂瓶，量筒（大、小），烧杯若干,小试管7个锥形瓶2.2、 试剂：（I）0.1%葡萄糖标准液：准确称取100mg分析纯的葡萄糖（预先在105°C干燥至恒重）,用少量蒸馀水溶解后定容至100ml,冰箱保存备用。（2） DNS试剂：酒石酸钾钠18.2g,溶于50ml蒸锵水中加热，于热溶液中以此加入3、5一二硝基水杨酸0.03gNaOH2.1g,苯酚0.05g搅拌至溶液冷却后用蒸你水定容至100OrnI贮存于棕色试剂瓶中保存。（注意：3、5一二硝基水杨酸和NaOH的加入时间一定要很近，或者是先加入NaOH,否则会产生难容的沉淀导致失败，溶液加热温度不宜超过50）（3） 2.5%HCl溶液：取1.1.6ml浓盐酸（35%38%）定量溶于200Oml容量瓶中（4） 20%氢氧化钠：称取20g氢氧化钠溶于100ml蒸馀时中。（5）碘碘化钾溶液：5g碘,10g碘化钾溶于100m1.蒸馈水中（6）酚酸指示剂：称取0.1g的酚Hfc溶于250ml的70%的酒精中.2.3、 样品：定边实验田的五组马铃薯样品、横山实验田的五组马铃薯样品。3、实验步骤：（1） 0.1%葡萄糖溶液作标准曲线：分别量取标准溶液0,0.2,0.4,0.6,0.8z1.0,1.2,IA1.6,1.8和2.0ml,置于大试管中,吸取蒸馅;水分别补充至2.0ml,再各加1.5mlDNS试剂。置沸水浴中加热5min,取此用流动冷水冷却后各加21.5ml蒸储水，混合均匀。置紫外可见分光光度计上以52Onm波长测其吸光度，以葡萄糖浓度为横坐标，光密度值为纵坐标绘制出标准曲线，经回归统计求出其回归方程附：葡萄糖标准曲线的制定：分别按下表顺序加入各种试剂：数量管号123456含糖量(gml)0.050100150200250葡萄糖液（ml）0.00.10.20.30.40.5蒸储水（ml）0.50.40.30.20.10.0DNS试剂(ml)0.50.50.50.50.50.5加热均在沸水浴（1000C）中加热5min冷却立即用流动冷水冷却蒸储水（ml）444444吸光度（520）（2）马铃薯还原糖的提取：准确称取IOg新鲜的马铃薯样品，加5ml的蒸储水捣碎成匀浆,用少量的蒸储水洗入100ml的锥形瓶中，混匀，于50C水浴中保温30min,不时搅拌，使还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移到100ml的离心管中，于4000rmin下离心5min,沉淀用20ml蒸储水洗一次，再离心，将两次离心的上清液合并，用蒸储水定容至100mI,混匀，做为还原糖待测液。（3）马铃薯总糖的水解和提取：准确称取Iog新鲜的马铃薯样品，置100ml的锥形瓶中，加入50ml2.5%盐酸，置于沸水中加热水解2h.取1-2滴水解液于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液，检查水解是否完全。如已水解完全，则不显蓝色。待锥形瓶中的水解液冷却后，加入1滴酚酬指示剂，以20%氢氧化钠中和至微红色，过滤，再用少量蒸储水冲洗锥形瓶及滤纸,将滤液全部收集在100ml的容量瓶中，定容至刻度，混匀。再精确吸取Ioml定容过的水解液，移入另一个100ml的容量瓶中，定容混匀，作为淀粉待测液。（4）马铃薯样品的测定：取上述制备好的淀粉水解备用液和还原糖待测液各0.5m1.置于大试管中,再加0.5m1.蒸储水。以Im1.蒸储水作样品空白,分别再加入0.5m1.DNS试液,按测定标准曲线方法测定吸光度值,重复三次，通过回归方程计算马铃薯水解淀粉备用液的糖含量。样品中含糖量的测定：分别按下表加入各种试剂:号空白还原糖淀才分123456样品量（ml）0.00.50.50.50.50.50.5蒸馈水（ml）1.00.50.50.50.50.50.5DNS试剂(ml)0.50.50.50.50.50.50.5加热均在沸水浴中加热5min冷却立即用流动冷水冷却蒸储水（ml）3.53.53.53.53.53.53.5吸光度（520）4、计算查曲线所得还原糖量（mg）×V0V还原糖（）二×100%m（mg）式中，Vo为提取液总体积100mI；V为测定时取用体0.5ml；m为样品质量100Omg查曲线所得还原糖量（mg）×V0V×n淀粉（）=×0.9×100%m（mg）式子，VO为提取液总体积100mI；V为测定时取用体积0.5ml；m为样品质量500mg;n为稀释倍数10
