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nod1tlr3配体刺激小鼠肝窦内皮细胞诱导hbv抗原特异t细胞增殖华中科技大学硕士学位论文2Chemokine(C-Cmotif)1igandCC1.趋化因子配体TUmOrnecrosisfactoralphaNF肿瘤坏死因子Brogrammedcelldeath1ligand1PD-1.l程序性细胞死亡配体1IntercelIularAdhesionMoleculeICAM-I细胞间黏附分子1VascularCellAdhesionMolecule1VCAM1血管细胞黏附分子1TumornecrosisfactoralphaTNF肿痛坏死因子1.eUkOCyteFunctionAssociatedAntigen1.EA-1淋巴细胞功能相关抗原mitogen-activatedproteinkinasesMPK丝裂原活化蛋白激陶华中科技大学硕士学位论文3N0D1-T1.R3配体刺激小鼠肝窦内皮细胞诱导HBV抗原特异T细胞增殖华中科技高校同济医学院附属协和医院感染病学教研室硕上探讨生：孙潺导师：杨东亮教授摘要目的肝窦内皮细胞细胞(1.iversinusoidalendothelialcells,1.SECs)是肝内主要抗原递呈细胞，可将抗原递呈至T细胞，并诱导多种类型T细胞产生免疫耐受。目前尚缺乏HBV通过1.SECs诱导T细胞免疫耐受的探讨报道。我们的探讨目的在于阐明肝窦内皮细胞在HBV感染获得性免疫应答中的功能，并探讨通过自然免疫刺激剂(NODl与T1.R3配体）刺激1.SECs,激活IIBV的特异性免疫应答及其可能的机制。为抗HBV免疫干预新策略的探讨供应了理论依据。方法1.用胶原梅潴注与抗-CDl46免疫磁珠分别方法分别C57B1./6小鼠1.SECso2 .尾静脉高压水注射PSM2质粒方式构建含HBv抗原特异T细胞小鼠模型。抗CD90.2磁珠分别方法分别HBV特异T细胞。3 .CFSE染色检测NODKT1.R3配体单独或联合剌激1.SECs诱导的HBv特异T细胞增殖状况。4 .用NOD1、T1.R3配体单独或联合刺激1.SECs,3h收集细胞,定量RT-PCR检测IFN-、IFN-、ISG15、IRF3、I1.-6、TNF-、TGF-、I1.-IOCC1.2、CC1.5、CXC1.1、CXC1.2、CXC1.9、CXC1.lO,-actinmRNA表达水平。20h收集细胞及华中科技大学硕士学位论文4上清，流式细胞术检测细胞表面分子：MHC-IICD80、CD86、PD-1.l、华中科技大学硕士学位论文5CDIo6、CD54。定量E1.lSA检测细胞上清中的细胞因子：IFN/、TNF-.I1.-60结果1.N0D1-T1.R3协同刺激促进小鼠1.SECS诱导HBV抗原特异T细胞增殖。2.N0D1-T1.R3协同刺激上调小鼠1.SECs趋化因子包括，CC1.2、CC1.5、CXC1.kCXC1.2.CXC1.9、CXC1.lOmRNA表达水平。3.