THP-1 细胞培养.docx

生物试验：THP-I细胞培育THP-I是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者.属于悬浮细胞，适合用于转染或感染试验.其表面抗原H1.A型为：A2,A9,B5,DRwl,DRw2.ATCCNumberTI8-202Designation:THP-I工具/原料培育基:RPMI-1640(Invitrogen#11875-093)胎牛血清：FetalBovineSerum(FBS1GIBCO#10099-141)二甲亚砚:DMSO(SIGMAD2650)双抗P/S(PenicilIinZStreptomycin)(GIBCO#15140-122)方法/步骤细胞培育:THP-I细胞培育于含有1O%FBS+1%PS的RPMI-1640培育基中，培育环境为370Cf5%CO2,可以每隔3-4天力D-些簇新的培育基，或干脆传代.细胞传代：当细胞密度达到约8xl05cellsml左右时，即可进行传代.由于是悬浮细胞，可干脆将细胞吸出，离心之后传代.传代最少浓度不应少于1x105cells/ml.细胞冻存：取差不多IXIoA7个细胞，用Iml含有10%DMSO的FBS重悬，转入冻存管,于-80。C冰箱过夜.其次天移入液翅中长期保存.留意事项细胞养不好，可能的缘由有，THP-I细胞特殊依靠细胞浓度，ATCC上105到106每M1.1是一个很高的密度，细胞少了就不太简单养好。细胞株的来源很重要，如干脆来源于ATCC（AmericanTypeCultureCollection美国模式菌种保蕊中心）生命力要强于国内细胞库的。留意细胞的密度肯定要高，介于5×105106/M1.之间，增值的快.细胞数量太少，不适合THP-I生长，一般状态不好的THP-I在培育了3天后数量仍旧不多，接着培育一天或者两天，培育基严峻泛黄，细胞数会增加.这一点不同于同是单核细胞系的937细胞。THP-I细胞适合在细胞Ph环境偏酸性环境生长对培育基改变特别敏感，所以尽量运用相同Ph的1640.传代后切忌常移出培育箱视察，否则会影响细胞生长，状态变差，一股首先表现为细胞内颗粒变多。-ASTHP-I生长相当快，对于状态已经不好的状况,建议传代后34天再视察，一般4天时间培育基已明显泛黄，细胞数量巨增;I）THP-I细胞喜爱酸性条件，你不要老是换培育基.越酸的条件，细胞密度越大，细胞就长得越好;2）不要频繁换液，一般2-3次换液离心一次（只是补充培育基）3）运用1640（ATCC举荐），留意加碳酸氢的2.5g就可以了，宁酸勿碱4）留意冻存的时候定度大些，举荐用血清冻存.复苏比较慢，建议起先用小瓶，不要用一次性的.