hbv基因型与乙型病毒性肝炎临床关系及发病机制的分析-analysis of the clinical relationship and pathogenesis between hbv genotypes a.docx

hbv基因型与乙型病毒性肝炎临床关系及发病机制的分析-analysisoftheclinicalrelationshipandpathogenesisbetweenhbvgenotypesa博士学位论文中文中文摘要第一部分HBV基因型与乙型病毒性肝炎临床关系的探讨目的采纳多对型特异性引物，通过巢式.聚合酶链式反应(PCR)法检测湖南乙型病毒性肝炎(乙肝)患者血清中乙型肝炎病毒(耶V)基因型的分布情况同时用这种多对型特异性引物巢式PCR法探讨了HBV基因型与临床表现的关系。方法依据从前Sl基因到S基因中的保守序列设计出10条内外引物，内引物分成A、B两组，分别扩增A、B、C和D、E、F型I-IBV1然后将第组产物分别用3%琼脂糖进行电泳，依据PCR产物片断大小干脆判定HBV常用的聚合醐链式反应.限制性片段长度多态性(PCR.RF1.P)法进行了比较，以证明该方法的牢靠性和精确性。收集湖南省内HBV慢性携带者，慢性乙肝度和慢性重型乙肝等5种临床类型的慢性HBV感染者的血清220例，采纳行巢式PCR法对血清中的HBV进行基因分型，了解湖南人群的HBV基因型将不同基因型的临床资料进行统计学分析比较。结果多对型特异性引物对巢式PCR法与PCR-RF1.P法的结果完全一样重现率(100%)：湖南HBV感染人群HBV基因分型结果为B型190(86.4%)、C型30例(13.6%)。随着病情加重，基因C型的比例增(Plt：0.05)0C基因型病人中的重病例比例显著高于B基因型(Plt例.O例型的丙第酸转氨基酶(J蝴)、总胆红素(TBI1.)、HBV-DMA等平均水平都较B型高，但无统计义。不过，c型的A1.T上升率(96.7%)显著高于B型(75.2%)(Plt;O.05)。C两型的ITBeAg阳性率总体无差别，但在慢性重型以及21.30岁年龄段的者中,C型的HBeAg阳性率(35.0%和50.0%)均显著高于B型(M.4%24.5%)(P均lt;O.05)三结论这种新的巢式PCR分型法能清楚直观地辨别IIBV基因型,结果准牢靠。用此法证明了湖南人群中的HBV感染其优势基因型以B型为主，C次之。基因型与临床表现有相关性，c型引起的病情较B型严峻。博士学位论文中文摘要其次部分HBV基因型与乙型病毒性肝炎发病机制关系的初步探讨目的初步探究HBV基因型与乙肝发病机制的关系，视察B、c两种基因型的HBV是否因为在促进肝细胞凋亡的实力方面存在差异而导致的致病性不同。方法选取编号为A21、Bl、El、E61的四份乙肝病人血清，分别属于B、C轻、重两种病情。用PCR扩增出四份血清样品的HBV-C区DNA片段(639bp),分子克隆和亚克隆等方法，以绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-Cl为真核表达载体，基因型和临床表型的重组真核表达质粒。通过PCR、双酶切、DNA测序等方法对质粒进行鉴定，并用Blastn程序比较不同基因型和临床表型HBV-C区DNA和同源性。