克里本类芽孢杆菌抗水稻稻瘟病初探.docx

克里本类芽兔杆菌抗水稻稻瘟病初探克里本类芽泡杆菌抗水稻稻瘟病初探肖娜张秋英刘育颖冯文文周煌冯彦娟龙伟吉安职业技术学院吉安市农产品质量平安检测中心摘要：通过比较克里本类芽胞杆菌、稻瘟病菌在3种培育基的生长状况，发觉克里本类芽抱杆菌和稻痕病菌都可以在牛肉浸骨蛋白腺培育基繁殖，且生长状况良好；将这两种菌同时接种到牛肉膏蛋白陈培育基上，试验结果表明克里本类芽胞杆菌对稻瘟病菌有良好的抑制生长作用。在水稻盆栽上喷洒稻症病菌抱子悬浮液和克里本类芽抱杆菌菌株发酵液，视察水稻发病状况，表明克里本类芽抱杆菌对水稻稻瘟病有良好的抑制作用。关健词：克里本类芽抱杆菌：水稻稻瘟病菌；水稻稻痕病在全世界范围内，水稻病害主要有3种类型：稻痕病、白叶枯病及纹枯病1-3o其中稻瘟病又被誉为水稻三大病害之首，由囊菌Magnaporthegrisea(Hebert)Barr稻梨抱属真菌引起的水稻真菌性病4-50对于稻瘟病的防治目前还没有强有力的措施，通常主要从以下几方面进行：栽培管理、抗病品种选育、化学防治、生物防治等方面对稻瘟病进行综合防治6-8o克里本类芽JS杆菌（PaenibaCi1.IUSkriBbensis）属于原核生物界，厚壁菌门，杆菌纲，芽泡杆菌目，芽胞杆菌科，类芽胞杆菌属。近儿年人们渐渐发觉了克里本类芽泡杆菌具有较好的抗真菌活性，已有相关学者在对其进行深化探讨9-12o本文先探讨这两种菌在不同培育基的生长状况，选择一种合适的培育基做培育基对峙试验，在水稻上喷洒稻瘟病菌泡子悬浮液和克里本类芽他杆菌菌株发酵液，同时观测水稻发病状况，探讨克里本类芽泡杆菌对水稻稻瘟病是否有抑制作用。所得到试验能给水稻稻瘟病的生物治疗供应一个新的方向。1 材料与方法1.1.试验材料与设备试验供试菌株：江西天人股份有限公司保存的克里本类芽饱杆菌菌株，江西农业高校保存的稻瘟病菌菌株，水稻由井冈山应用科技学校供应。供试培育基固体PDA培育基（PDA8g、琼脂2g）；固体察氏培育基（成糖6g、硝酸钠0.3g、磷酸氢二钾0.2g、硫酸镁0.1g、氯化钾0.1g、硫酸铁0.002g、琼脂4g）；固体牛肉浸膏蛋白陈培育基（牛肉浸膏1g、蛋白陈2g、氯化钠1g、琼脂4g）：液体PD培育基（PDA8g）：液体察氏培育基（蔗糖6g、硝酸钠0.3g、磷酸氢二钾0.2g、硫酸镁0.1g、氯化钾0.1g、硫酸铁0.002g）YXQ-SG46-28OS高压灭菌锅上海东亚压力容器制造有限公司DIIP-9082MBE电热恒温培育箱常州市人和仪器厂SW-CJ-2D双人超净工作台苏州苏干净化设备有限公司1.2试验方法1.21不同培育基对克里本类芽泡杆菌和稻瘟病菌的生长影响（1）将供试克里本类芽抱杆菌菌株分别接种至固体PDA培育基、固体察氏培育基、固体牛肉浸膏蛋白陈培育基这三种培育基上，37C恒温培育箱中培育48h,视察并记录菌株生长性状。（2）将供试稻瘟病菌菌株菌丝体分别接种上述3种培育基上，在30C恒温培育箱中培育48h,视察并记录菌株生长性状。2 1.4.2克里木芽胞杆菌和稻瘟病菌对峙试验将克里木类芽他杆菌用划线法接在察氏培育基的一半，再将稻瘟病用划线法接到另一半培育基，37°C恒温培育箱中48h后视察两种菌的生长状况。1.4.3克里本类芽饱杆菌对水稻盆栽稻瘟病菌的抑制（1）稻瘟病菌胞子悬浮液的制备将已纯培育的供试稻瘟病菌菌株接种到斜面培育基上，待菌丝长满后加入1.5m1.,的灭菌水并轻轻刮菌丝，后移取菌丝液到盛有PDA培育基的培育皿（9Cm）上，涂布匀称后放置在28C恒温箱中培育。待平板上菌丝长满后（约7d）,在无菌条件下刮除平板上菌丝后置于室内组织培育架上24h光照培育，室温2528C。等到充分产抱（约5d）后，每皿用5m1.蒸储水洗下范子，对的子浓度进行浓缩，100倍显微镜下计数抱子数量，最终用血球计数板调整泡子浓度至5x103个/m1.,制备稻瘟病菌抱子悬浮液。（2）克里本类芽饱杆菌菌株发酵液的制备将克里本类芽抱杆菌活化后，挑取单菌或菌落接种到液体察氏培育基中，经过30C宸荡培育84h后得克里本类芽抱杆菌菌株发酵液，对克里本类芽抱杆菌菌株发酵液进行浓缩，最终用血球计数板在100倍显微镜下计数菌株数量。选用品种为欣荣优08,根据水稻盆试验方法浸种、催芽后，待胚根长至2cm左右，选择两株长势一样的水稻苗移栽至塑料放盘中士培，长至3叶期，一株水稻喷洒稻瘟病菌胞子悬浮液和克里木类芽饱杆菌菌株发酵液，另一株则作为空白比照组，不喷洒克里本类芽胞杆菌菌株发酵液，同时观测水稻发病状况。2结果与探讨2.1不同培育基对克里本类芽布杆菌的影响克里本类芽范杆菌菌株在不同培育基上，生长性状有明显的差异，菌落形态较为相像。在察氏培育基和牛肉浸西蛋白陈培育基上，克里本类芽胞杆菌菌落呈乳白色、脓状、近圆形、边缘整齐、菌落隆起，表面粘稠；在PDA培育基上，克里本类芽的杆菌不生长。由此可见，上述三种培育基中，PDA培育基没有菌株生长，不适合克里本类芽胞杆菌生长，而察氏培育基和牛肉浸膏蛋白陈培育较适合克里本类芽饱杆菌生长，其中以察氏培育基最适合（2.1.a.b、c）每次试验三个平行。图2.1a察氏培育基培育的克里本类芽抱杆菌图2.1b牛肉浸膏蛋白陈培育基培育的克里本类芽胞杆菌图2.IcPDA培育的克里本类芽抱杆菌2.2不同培育基对稻瘟病菌的影响稻瘟病菌菌株在不同培育基上，生长性状有明显的差异，菌落形态较为相像。稻瘟病菌菌株在PDA培育基上生长较快，早期为灰色半透亮,24h后转为灰色有然色轮纹，菌落底面黑色，培育基不变色；在察氏培育基上菌株生长较快，早期菌丝层薄半透亮，48h后菌丝由白色变为灰色，菌丝层较为疏松，菌落表面灰色，底面黑色，培育基不变色;牛肉哲蛋白族培育基上菌株生长域慢，但菌丝致密，菌丝层厚，菌落表面白色，菌落边缘培育基变为黄褐色。由此可见，PDA培育基、绥氏培育基和牛肉哲蛋白脐培育基都适合稻瘟病菌生长。(图2.2abc).图2.2aPDA培育基培育的稻瘟图2.2b察氏培育基培育的稻瘟病菌图2.2c牛肉浸弯蛋白陈培育基培育的稻瘟病菌图图2.2稻瘟病菌在不同培育基的生长状况2.3克里本芽他杆菌和稻瘟病菌对峙试验将克里本类芽泡杆菌用划线法接在察氏培育基的一半，再将稻瘟病用划线法接到另一半，放在37C恒温培育箱中72后视察结果，发觉克里本类芽泡杆菌能对稻瘟病菌产生肯定的抑菌效果。图图2.3克里本芽电杆菌和稻瘟病菌对峙试验2.4克里本类芽泡杆菌对水稻盆栽稻瘟病的影响试验表明，空白比照组的叶片病斑呈梭形或纺锤形，长约11.5cm,宽约0.30.5cm,病斑中心呈灰白色，边缘褐色，外围常有淡黄色晕圈，病斑两端有向叶脉延长的褐色坏死线，背面生有灰色霉层。病斑多时相互连接形成不规则大斑，一些叶片渐渐枯死；而经过克里本类芽抱杆菌的无菌发酵液处理的叶片没有出现叶片呈梭形或纺锤形，中心呈灰白色，边缘褐色，外围常有淡黄色晕圈的病斑，且叶片仍旧保持绿色，表现出良好的抑菌活性，由此可见，克里木类芽饱杆菌对水稻稻瘟病有抑制作用(图2.4a、b)。图2.4a(1.)稻瘟病水稻图2.4a(2)稻瘟病水稻叶子图2.4b(1)稻瘟病-克里本水稻图2.4b(2)稻瘟病-克里本水稻叶子3结论PDA培育基、察氏培育基和牛肉杏蛋白陈培育基都适合稻瘟病菌生长：PDA培育基不相宜克里本类芽他杆菌生长察氏培育基和牛肉浸膏蛋白月东为主的培育基较相宜克里本类芽范杆菌生长。将克里本类芽抱杆菌和稻瘟病菌同时接种到察氏培育基上，发觉克里本类芽泡杆菌能对稻瘟病菌产生肯定的抑菌效果。只喷洒稻瘟病菌包子悬浊液的水稻盆栽出现稻瘟病，而喷洒了稻瘟病菌泡子悬浊液和克里本类芽泡杆菌菌株发酵液的水稻盆栽无明显改变，表明克里本类芽抱杆菌对水稻稻瘟病有良好的抑制作用。所得到的结果可以为克里本类芽抱杆菌抗水稻稻瘟病探讨供应肯定的试验依据，同时为水稻稻瘟病的治疗供应肯定的理论依据，具有重要意义。参考文献。1ZhangQ.Strategiesfordeve1.opinggreensuperriceJ.Proceedingsofthenationa1.AcademyofSciences,2007(104):164-166.2刘伟.水稻稻瘟病抗性的探讨进展J.中国稻米，2010,16(5)：32-35.3陈彦，赵彤华，王兴亚，等.52.5%丙环哩三环噗悬浮剂防治水稻稻瘟病和纹枯病药效评价J.辽宁农业科学,2012(1):69-71.4王中业.黑龙江稻瘟病菌生理分化和抗源筛选及病菌遗传转化探讨D哈尔滨：东北农业高校,2012.5乐旺美,陈实,潘庆华等.水稻稻瘟病菌侵染途径探讨综述U1.江西农业学报,2006,18(2):101105.6陆亚萍,徐列明,吴德君.稻瘟病的防治现状及非农药防治途径J.植物爱护学，2011(24):216216.7蒋晓英，张致力，陈旭等.稻瘟病无害化防控技术探讨进展J.江西农业学报,2009,21(3):121123.8侯忠艳.水稻稻瘟病的发生于防治U现代农业科技，2011,32(6):187188.9SimoneR,FabioFV,G1.eiserTeta1.Antimicrobia1.activityofPaenibaci1.1.uskribbensisPOC115againstthedermatophyteTrichophytonrubrumJ.Wor1.dJMicrobio1.Biotechno1.,2012,28:953962.10AiMZ,GangYZ,TongGG,eta1.So1.ubi1.izationofinso1.ub1.epotassiumandphosphatebyPaenibaCiI1.USkribensisCX-7:Asoi1microorganismwithbio1.ogica1.contro1.potentia1.J.AfricanJourna1.ofMicrobio1.ogyResearch,2013,7(1):41-47.11ShengJX,SaeJH,KimBS.Antifunga1.ActivityofPaenibaci1.1.uskribbensisStrainT-9Iso1.atedfromSoi1.sagainstSevera1.P1.antPathogenicFungi.12梁小文，王根豪，陈晓燕等.一株克里本类芽抱杆菌及其应用：中国，201010579186.2P,2014-04-30.