免疫组化与免疫荧光的区别.docx

免疫If1.化与免疫荧光一、两者都是蛋白定位的检测（也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜）.二、区分是:1、概念和基本原理免疫组税化学又称免疫细胞化学，是指带显色剂标记的特异性抗体在祖织细邂原位通过抗原抗体反应和加织化学的早.色反应，时相应抗原进行定性、定位、定量祗定的一项新技术,它把免疫反应的特异性.组织化学的可见性奇妙地结合起来.借助显微假的现像和放大作用.在细胞，亚细府水平检测各种抗原物质,并可在原位显示相应的基因和基因表达产物，免疫组织化学技术现已有：免疫荧光组织（细胞）化学技术、免疫梅组织（细胞）化学技术、亲和组织化学技术、免投金银及铁标记免疫组织化学技术等.免及荧光组织（细胞）化学技术是采纳荧光素标记的己知抗体（或抗原）作为探针，检测待测组织、细胞标本中的祀抗原（或抗体）.形成的抗原抗体复合物上带有荧光素,在荧光显微镜下，由于受高压汞灯光源的紫外光照辘荧光素发出光明的焚光，这样就可以辨别出抗假（或抗体）的所在位罚及其性质，并可利用荧光定量技术计算抗原的含源。以达到时抗原物质定位、定性、定fit测定的目的.2、标本制作：免疫荧光般用冰冻切片,IW减杂质干扰:而即免疫组化一般用石始切片或咏或切片均可以.3、i½!JS:免疫荧光染色步嘿简洁,而除免疫组化方法较为困难多了DAB显色过程.4、染色后的标本保存：免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照，时间长了荧光衰退：而酹免疫组化染色标本可以长期保存.5,免及祖化结果除了知道斑臼是在细融浆还是细胞服表达高些，还可以用软件做相对定局分析。6、免长荧光得到的图片是彩色的,美丽些,可以发高档次文孽.免疫学三大工具：免疫组化、Western.E1.ISA,分别用于定位,定性和定量。免疫组化：是融合了免疫学原理（抗原抗体特异性结合）和组织学技术（组织的取材、固定、包埋、切片、脱蜡、水化等），通过化学反应使标记抗体的显色剂（荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，来对组织（细胞）内抗原进行定位、定性及定量的探讨（主要是定位）。样本是细胞或组织,要在显微镜下视察结果，可能出现膜阳性、质阳性和核阳性。EIiSa（酣联免疫吸附试验用到了免疫学原理和化学反应显色，待测的样品多是血清、血浆、尿液、细胞或组织培育上清液，因而没有用到组织包埋、切片等技术，这是与免疫组化的主要区分，操作上起先须要将抗原或抗体结合到固相我体表面，从而使后来形成的抗原-抗体-的-底物笑合物粘附在载体上，这就是“吸附”的含义。免疫组化和e1.isa所用到的原理大致相同，只是因为所检测的样品不同，从而在操作方法上有所不同。E1.iSa多用于定量分析，其灵敏度特别高。westernbo1.t：先要进行SDS-PAGE,然后将分别开的蛋白质样品用电转仪转移到固相载体匕而后利用抗原-抗体-标记物显色来检测样品，可以用于定性和半定量。